इस प्रोटोकॉल नाबदान झाड़ू और zebrafish प्रणालियों, जो प्रहरी के एकमात्र उपयोग की तुलना में वृद्धि का पता लगाने की ओर जाता है के उपयोग का वर्णन करने के लिए Aeromonas hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और के रूप में रोगजनकों का पता लगाने Pseudocapillaria tomentosa। संगरोध में पी. tomentosa अंडों की निगरानी के लिए एक प्रणाली भी प्रस्तावित है.
स्वास्थ्य निगरानी प्रणाली विकसित और zebrafish अनुसंधान सुविधाओं में प्रयोग किया जाता है क्योंकि ढाणियो rerio के रोगजनकों जैसे Aeromonas hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और Pseudocapillaria tomentosa के लिए क्षमता है पशु कल्याण और अनुसंधान ख़राब । मछली आमतौर पर पोस्ट मार्टम विश्लेषण के लिए रोगाणुओं का पता लगा रहे हैं । प्रहरी के उपयोग के लिए निगरानी की संवेदनशीलता में सुधार और नमूने के लिए पशुओं की संख्या को कम करने के लिए एक तरीका सुझाया है । एक पूर्व निस्पंदन प्रहरी टैंक की स्थापना के बाहर एक परिसंचारी प्रणाली का वर्णन किया गया है । तकनीक के लिए जल प्रदूषण को रोकने और उंर, लिंग, और उपभेदों के एक सावधान चयन द्वारा मछली आबादी का प्रतिनिधित्व विकसित की है । आदेश में जानवरों की न्यूनतम संख्या का उपयोग करने के लिए, वातावरण को स्क्रीन करने के लिए तकनीक भी विस्तृत रहे हैं । पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) सतह नाबदान झाड़ू पर काफी कुछ प्रचलित और रोगजनक माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों का पता लगाने में सुधार करने के लिए प्रयोग किया जाता है जैसे कि माइकोबैक्टीरियम fortuitum, माइकोबैक्टीरियम haemophilum, और माइकोबैक्टीरियम chelonae। एक और पर्यावरणीय विधि एक पकड़े टैंक या नाबदान के तल पर कीचड़ प्रसंस्करण के होते है tomentosa अंडे के लिए देखो । यह एक सस्ता और तेजी से तकनीक है कि संगरोध में लागू किया जा सकता है, जहां एक प्रजनन उपकरण आयातित पशुओं के जोत टैंक में जलमग्न है । अंत में, पीसीआर कीचड़ नमूना और ए hydrophila है नाबदान के नीचे और सतह पर पाया जाता है के लिए आवेदन किया है । आम तौर पर, इन पर्यावरणीय जांच इन विशिष्ट रोगजनकों के लिए लागू तकनीक पूर्व निस्पंदन प्रहरी के परीक्षण की तुलना में एक वृद्धि की संवेदनशीलता के लिए नेतृत्व किया है ।
अनुसंधान और पशु कल्याण1,2की रक्षा के लिए, रोगजनकों की उपस्थिति पशु सुविधाओं के भीतर निगरानी की जाती है । zebrafish, स्वास्थ्य निगरानी के मामले में3,4,5,6,7,8,9,10,11 अक्सर जानवरों पर निर्भर करता है histopathology, वैक्टीरिया संस्कृति, या आणविक तरीकों द्वारा पोस्ट मार्टम का विश्लेषण किया । परीक्षण केवल कॉलोनी जानवरों मछली और संबंधित खर्च की संख्या है कि कम प्रसार के रोगजनकों का पता लगाने के लिए आवश्यक होगा की वजह से अनुशंसित विधि नहीं है । इसलिए, पसंदीदा विधि के लिए पशुओं के एक छोटे से समूह के एक उच्च लोड को उजागर करने के लिए है । इन मछलियों को पूर्व निस्पंदन प्रहरी कहा जाता है । यह जोखिम महीनों के लिए रहता है और यह पशु है देखभाल कार्यभार और/या कुछ उद्देश्य-इंजीनियरिंग समाधान का निर्माण में वृद्धि शामिल है । एक और चुनौती संगरोध में आयातित लाइनों की स्क्रीनिंग जहां उपजाऊ जानवरों को जिंदा रखा जा करने के लिए कर रहे हैं और इस लावे पर नियमित परख के साथ संगत नहीं है ।
हम यहां कुछ तरीकों का वर्णन कुछ zebrafish रोगजनकों (ए. hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और पी. tomentosa) का पता लगाने के लिए जलीय प्रणाली के वातावरण को परखने के द्वारा । उद्देश्य स्वास्थ्य की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया मछली की संख्या को कम करने और कारोबार, लागत, और पता लगाने की संवेदनशीलता का अनुकूलन करने के लिए है । इस तरह के तरीकों जानवरों के उपयोग के लिए एक विकल्प है और कुछ तकनीक संगरोध में आयात स्क्रीनिंग के लिए लागू किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, मोचो9 के बजाय zebrafish (प्रहरी सहित) पर नाबदान झाड़ू पर प्रदर्शन करके अधिक रोगजनक माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों की पहचान करने में सक्षम था, और यह कम नमूनों के साथ प्राप्त किया गया था । इसी अध्ययन में, tomentosa अंडे और पीसीआर और histopathology द्वारा परीक्षण मछली के बजाय प्लवनशीलता और माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर टैंक कीचड़ स्क्रीनिंग द्वारा अधिक संवेदनशीलता के साथ पता लगाया गया ।
तालिका 1 प्रहरी कार्यक्रमों की विभिंन विशेषताओं3,4,5,6,7,8,9,10 संक्षेप । zebrafish सुविधाओं के एक नंबर के द्वारा प्रयोग किया जाता है । निस्पंदन प्रहरी के बाद एक ही तरीके से पानी प्राप्त किसी भी कॉलोनी मछली जबकि पूर्व निस्पंदन प्रहरी पानी प्राप्त एक बार यह कॉलोनी मछली टैंक के माध्यम से परिचालित है पहले । उदाहरण के लिए, पूर्व निस्पंदन प्रहरी लगातार नाबदान पानी प्राप्त करने से परिसंचारी प्रणाली पर स्थापित किया जा सकता है । यह एक विकल्प है जब एक कमरे में कई स्वतंत्र प्रणालियों रहे है नहीं हो सकता है । इस मामले में, पूर्व निस्पंदन प्रहरी के एक टैंक पूरे कमरे स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । प्रहरी एक स्थैतिक टैंक में हैं, परिसंचारी प्रणाली से बाहर है, और उनके पानी को नियमित रूप से बदल गया है, केवल पूर्व निस्पंदन पानी यानीका उपयोग कर, कमरे में सभी प्रणालियों से नाबदान पानी । इस तकनीक के नीचे पर्यावरण स्क्रीनिंग की प्रभावकारिता के साथ तुलना के लिए एक आधार रेखा के रूप में वर्णित है । प्रस्तावित सेट अप पीएच या एक नाइट्रोजन प्रदूषण की कमी जैसे पानी की गुणवत्ता के मुद्दों को नियंत्रित करने के लिए बनाया गया है ।
बैक्टीरियल पर्यावरण स्क्रीनिंग की अवधारणा परिकल्पना पर निर्भर करता है कि बैक्टीरिया इस तरह के रूप में है कि इस फिल्म में पानी की सतह पर नाबदान की दीवार पर या एक टैंक के नीचे कीचड़ में पाया detectable हैं । नाबदान एक परिसंचारी जलीय कृषि प्रणाली में एक आदर्श नमूना बिंदु लगता है क्योंकि यह अपशिष्ट एकत्र (पानी, मल, फ़ीड, और अंय कार्बनिक सामग्री) सभी टैंकों से पूर्व निस्पंदन । नाबदान की सतह अक्सर आसानी से पहुंच में है, swabbing तेजी से है, और यह aseptically प्रदर्शन किया जा सकता है पार से बचने के लिए नमूने के संदूषण (उदाहरण के लिए दस्ताने से) । अवधारणा zebrafish प्रणालियों में प्रचलित रोगजनक माइकोबैक्टीरियम एसपीपी.9,12की पहचान करने के लिए प्रयोग किया जाता है । तकनीक के नीचे वर्णित है और हम भी zebrafish नाबदान की सतह झाड़ू और कीचड़ में ए hydrophila का पता लगाने की रिपोर्ट कर रहे हैं ।
परजीवी अंडे के लिए पर्यावरणीय जांच मरे एट अल द्वारा पता लगाने पर आधारित है । 13 और प्लवनशीलता तकनीक parasitology और मल में परजीवी अंडे की सूक्ष्म जांच के लिए नियमित रूप से प्रयोग किया जाता है14। मोचो9 नमूना प्रक्रिया के लिए एक विकल्प का प्रस्ताव है और पता चला है कि तकनीक के लिए मछली biotope की अंय प्रजातियों का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । संक्रमित डी. rerio दर्रा पी. उनके मल के साथ tomentosa अंडे और परजीवी अंडे टैंक के नीचे, कीचड़ में रहते हैं । वे वहां उनके पानी की तुलना में अधिक घनत्व के कारण एकत्र किया जा सकता है । अंडे का घनत्व पर्यावरण नमूना भी प्रक्रिया करने के लिए प्रयोग किया जाता है । केंद्रापसारक के साथ एक पहली प्लवनशीलता भारी बात से पानी और प्रकाश मलबे अलग । एक दूसरे के केंद्रापसारक ( tomentosa अंडे के घनत्व से अधिक घनत्व के साथ) संतृप्त चीनी समाधान पर निर्भर करता है (परजीवी अंडे के लिए अनुमति देने के लिए ट्यूब की सतह पर उभरने के लिए ।
इस फिल्म में जीवाणुओं के लिए स्क्रीनिंग और टैंक के नीचे से पी tomentosa के लिए, पहले केंद्रापसारक के बाद प्राप्त कीचड़ नमूना तलछट पर इन सभी रोगजनकों के लिए पीसीआर प्रदर्शन करके जोड़ा जा सकता है । यह नमूना समय को ऑप्टिमाइज़ करता है । विधि नीचे वर्णित है । हम भी एक क्वारंटाइन संदर्भ में इन तकनीकों का उपयोग करने का प्रस्ताव है । आयातित वयस्क zebrafish कि जिंदा रखा जाना चाहिए स्क्रीन करने के लिए, एक प्रजनन उपकरण संगरोध टैंक के लिए डाला जाता है. एक सप्ताह के बाद, मल और प्रजनन उपकरण में अंय अपशिष्ट पदार्थों को एकत्र कर रहे है और माइक्रोस्कोपी या पीसीआर द्वारा जांच की । यह तकनीक नीचे बताई गई है और इस संदर्भ में माइक्रोस्कोप से कुछ tomentosa अंडों का पता लगाया गया ।
तकनीकों, महत्वपूर्ण चरणों और समस्या निवारण की सीमाएं:
आयु, लिंग, तनाव, और प्रहरी के जोखिम की लंबाई मानकीकृत नहीं कर रहे हैं । यह तालिका 1में दिखाया गया है । वहां बहुत कम उंर के 6 महीने, या वृद्ध मछली के नीचे मछली की स्क्रीनिंग है । वहां कुछ रोगजनकों कि युवा मछली को प्रभावित हो सकता है के रूप में वहां कुछ रोगजनकों कि अधिक पुरानी आबादी10,18,19,20में प्रचलित हैं । इसी तरह, लिंग कुछ प्रहरी समूहों के चयन में कुछ रिपोर्ट के बावजूद नहीं माना जाता है कि वहां कुछ रोगजनकों के लिए एक लैंगिक पूर्वाग्रह है21। प्रस्तावित तकनीक इन मुद्दों को हल करने की कोशिश करता है, हालांकि तनाव का चुनाव एक विशिष्ट रोगज़नक़ के अनुसार किया जा सकता है पर नजर रखने के लिए । उदाहरण के लिए, TU माइकोबैक्टीरियम एसपीपी.12,22का पता लगाने के साथ मदद कर सकता है, लेकिन एक खतरा यह है कि प्रहरी तो एक जलाशय या प्रदर्शन नैदानिक संकेत के रूप में कार्य करेंगे । जोखिम की लंबाई के बारे में, Zebrafish अंतर्राष्ट्रीय संसाधन केंद्र10 के दृष्टिकोण के लिए रोगजनकों कि एक अपर्याप्त संदूषण अवधि के साथ याद किया जा सकता है पता लगाने की संभावना बढ़ जाती है । लंबे समय तक जोखिम के लिए की जरूरत का तात्पर्य है कि प्रहरी आसानी से उपलब्ध नहीं हैं । पर्यावरण के नमूनों के अलावा कुछ लचीलापन और स्क्रीनिंग घटनाओं के गुणन की अनुमति देता है । उदाहरण के लिए, नमूना हर दूसरे महीने जगह प्रत्येक स्क्रीनिंग विधि के बीच एक 4 महीने के अंतराल के साथ ले जा सकते हैं । यह एक नए शुरू रोगज़नक़ का पता चला है पहले समय की चूक को कम कर सकते हैं ।
पर्यावरण जांच तकनीक पर्यावरण में रोगजनकों का पता लगाने पर भरोसा करते हैं । रोगजनकों मछली द्वारा बहाया और इसलिए प्रणाली पानी में पतला कर रहे हैं । जल निस्23 द्वारा रोगजनकों पर कब्जा करने की संभावना का पता नहीं लगाया गया । तरीकों का वर्णन हम केवल प्रभावी अगर रोगजनकों पर्याप्त समय के लिए मछली और फिल्म में गुणा दिया जाता है पता लगाने की अनुमति संदूषण की दहलीज तक पहुंच रहे हैं । इस तकनीक की कमी नमूना साइटों की एक महत्वपूर्ण चयन से कम है: टैंक में कीचड़ नाबदान कीचड़ के बजाय नमूना है, और पानी और फिल्म नाबदान की सतह पर नमूने के बजाय एक टैंक या छानने का स्थान में नमूना लिया जाता है… । इसके बावजूद एक ही सिस्टम से सभी नमूनों को समान परिणाम देने की संभावना नहीं है. tomentosa के लिए सकारात्मक परिणाम एक और परख (histopathology, पीसीआर, या कीचड़ विश्लेषण) का उपयोग करके पुष्टि की जा सकती है । माइक्रोबैक्टीरियल पीसीआर सकारात्मक परिणाम संस्कृति या किसी अंय नैदानिक प्रयोगशाला द्वारा पुष्टि की जा सकती है । हालांकि, जब एक स्वास्थ्य की स्थिति की स्थापना, और नमूनों के लिए किसी भी पर्यावरण जांच तकनीक से नकारात्मक परिणामों की पुष्टि की सिफारिश कर रहे हैं ।
मौजूदा/वैकल्पिक तरीकों के संबंध में तकनीक का महत्व:
माइकोबैक्टीरियम एसपीपी वातावरण में आम है और नाबदान में उनकी उपस्थिति की भविष्यवाणी नहीं करता है उनके pathogenicity12। मोचो9 से पता चला है कि निगरानी मृत्यु दर स्वास्थ्य के मुद्दों के विकास के सर्वेक्षण के लिए महत्वपूर्ण है । पशु नमूनों का उपयोग किसी भी पशु चिकित्सा जांच के लिए आवश्यक रहता है । स्वास्थ्य निगरानी एक सुविधा में सभी प्रचलित रोगजनकों का पता लगाने का तात्पर्य है और यह पर्यावरण जांच तकनीक के एकमात्र उपयोग के साथ प्राप्त नहीं किया जा सकता है । फिर भी, निदान उपकरण की संवेदनशीलता की कमी में देरी या स्वास्थ्य की स्थिति का एक सटीक विवरण को रोकने कर सकते हैं । जबकि प्रहरी के उपयोग के लिए जनसंख्या में एक प्रचलित सूक्ष्म का पता लगाने के लिए आवश्यक मछली की संख्या कम कर देता है, संवेदनशीलता की कमी को पर्यावरण स्क्रीनिंग5,23सहित विधियों का एक संयोजन का उपयोग करने के लिए वजन कहते हैं । वास्तव में विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त स्थिति आमतौर पर इस तरह की सुविधा है कि पर्यावरण और पशु नमूने नकारात्मक24,25परीक्षण करना चाहिए में एक प्रजाति के अभाव के रूप में परिभाषित किया गया है ।
नाबदान झाड़ू को माइकोबैक्टीरियम एसपीपी. show की पहचान करने के लिए परिणाम है कि मछली के नमूनों पर भरोसा एक झूठी नकारात्मक स्वास्थ्य स्थिति के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । 6 परीक्षण माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों में रोगजनक या संभावित रोगजनक के रूप में वर्णित है zebrafish15 और कुछ के रूप में नियमित रूप से संगरोध में प्रदर्शन किया क्लोरीन26 के साथ अंडा सतह के संक्रमण से समाप्त नहीं किया जाएगा । इसलिए, झूठी नकारात्मक सहयोगियों जो लाइनों को आयात करने के लिए कुछ परिणाम हो सकता है । उदाहरण के लिए, एम. fortuitum मछली के नमूने पर पीसीआर से चूक गया था लेकिन नाबदान झाड़ू पीसीआर के आधे से अधिक यह पता चला । यह देखते हुए कि इन आइसोलेटों अधिक दूसरों की तुलना में क्लोरीन के लिए प्रतिरोधी रहे है और उनके पानी प्रणालियों में वृद्धि करने की क्षमता27, यह गैर दूषित आयात सुविधा के लिए एक जोखिम है । लाइनों के आयात की अनुमति के लिए, प्रबंधकों पर भरोसा है और उनकी तुलना के साथ निर्यात की सुविधा के स्वास्थ्य रिपोर्टों की जरूरत है । ICLAS प्रदर्शन मूल्यांकन प्रोग्राम28 उस प्रक्रिया को कुतर में कुंजी है । regordonae नेटवर्क फ्रेंच डी. rerio11में एम. और एम. mucogenicum का पता लगाने की रिपोर्ट । इन आइसोलेटों का उपयोग हम वाणिज्यिक प्रयोगशालाओं के पैनलों में प्रस्तावित नहीं कर रहे हैं । यह ICLAS कार्यक्रम का विस्तार करने के लिए और नैदानिक परख अनुरूप के रूप में के रूप में अच्छी तरह से रोगजनक प्रजातियों की सूची29उपयोगी होगा ।
ए. hydrophila भी एक रोगज़नक़ कि क्षमता है जब पशुओं के आयात करने के लिए पेश किया है, हालांकि अपनी क्लोरीन30 अपने उंमूलन अधिक दिनचर्या अंडा सतह के संक्रमण के दौरान होने की संभावना बनाता है । नाबदान, झाड़ू, और कीचड़ परिणाम बताते है कि पर्यावरण जांच के लिए इस रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पीसीआर23द्वारा कीचड़ में माइकोबैक्टीरियम एसपीपी जैसे अन्य बैक्टीरिया का पता लगाया गया है । नमूना के इस प्रकार विशेष रूप से प्रासंगिक है क्योंकि यह शेड रोगजनकों का पता लगाने की अनुमति देता है । उदाहरण के लिए, एक और नया आवेदन tomentosaके लिए संगरोध में आयातित मछली स्क्रीन करने के लिए कीचड़ विश्लेषण है. परजीवी पशु के स्वास्थ्य13 और neoplasia मॉडल16के लिए एक खतरा है । इसके अलावा, नियमित zebrafish अंडे की सतह के संक्रमण में इस्तेमाल क्लोरीन सांद्रता31कुशल नहीं हैं । इसलिए, एक सप्ताह के कारोबार के साथ और किसी भी मछली इच्छामृत्यु के बिना आयातित जानवरों को स्क्रीन करने की क्षमता बहुत आकर्षक लगता है । इस तकनीक के आयात के एक triage की अनुमति से संगरोध और सुरक्षा नियमों को प्रभावित कर सकते हैं । एक निर्णय प्रक्रिया तो निर्यात सुविधा में प्रचलित रोगजनकों के अनुसार बनाया गया है, आयातित मछली से नमूनों में पाया रोगजनकों, और आयात सुविधा के स्वास्थ्य की स्थिति से समझौता करने का खतरा10।
भविष्य अनुप्रयोगों या इन तकनीकों माहिर के बाद निर्देश:
यहां तक कि अगर नियमित संगरोध उपचार चुना विकल्प है, ऐसी दवा की प्रभावकारिता३२,३३,३४,३५,३६ प्रजनन डिवाइस कीचड़ विश्लेषण के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है । अधिक सामांयतः, पर्यावरणीय स्क्रीनिंग मछली biotope में शामिल बैक्टीरिया और परजीवी उंमूलन के खिलाफ यौगिकों का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पर्यावरण जांच के एक अंय आला आवेदन के लिए जीना फ़ीड३७,३८में रोगज़नक़ आबादी की निगरानी है । हालांकि इन तकनीकों के मुख्य आवेदन zebrafish सुविधाओं में स्वास्थ्य की निगरानी के लिए निदान toolbox के लिए एक मूल्यवान इसके अतिरिक्त के रूप में है । एक और अधिक सटीक, लागत और स्वास्थ्य की स्थिति के समय कुशल परिभाषा के लिए धंयवाद, नाबदान झाड़ू और कीचड़ विश्लेषण प्रहरी निगरानी और दिनचर्या संगरोध अभ्यास के पूरक हैं । दरअसल, इन तकनीकों का भविष्य किसी भी जलीय प्रयोगशाला स्वास्थ्य रिपोर्ट का नियमित हिस्सा होना है.
The authors have nothing to disclose.
लेखक अपनी तकनीकी मदद और अहम इनपुट के लिए फ्रांसिस क्रिकेटरों संस्थान की BRF तैराकी टीम का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । यह काम फ्रांसिस क्रिकेटरों संस्थान जो कैंसर रिसर्च यूके (FC001999), ब्रिटेन के चिकित्सा अनुसंधान परिषद (FC001999), और वेलकम ट्रस्ट (FC001999) से अपने मूल धन प्राप्त करता है द्वारा समर्थित किया गया ।
Aqua-Sed 250 mL | Vetark | 2-phenoxyethanol | |
Tubed Sterile Dryswab Tip | mwe | MW100 | Sump surface |
BD Plastipak Disposable Syringe 50mL Eccentric | Becton Dickinson |
300866 | They are actually graduated to 60 ml |
Centrifuge tube 15 mL Corning | Corning | 430766 | |
Centaur 2 benchtop centrifuge with 4 x 200 mL Swing–Out Rotor (unsealed) | Sanyo | MSB020.CX1.5 | |
Cover Glass 22 mm x22 mm | Menzel-Glaser | MNJ-350-020H | |
Plain Swab Sterile Plastic Applicator Rayon Tipped White Cap | Sterilin Ltd Thermo Fisher Scientific | F155CA | Swab sediment from sludge |
50 mL Self-Standing Centrifuge Tube CentriStar Cap | Corning | 430921 | |
In-Tank Spawning Tray Set | MBK Installations Ltd |