在清洁验证过程中，回收率低且结果不稳定的主要原因是缺乏一种能够持续有效清洁试片表面的明确定义的操作程序。本文描述了清洁不锈钢试片的正确方案。
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本文内容
摘要
摘要
本研究旨在确定影响从不锈钢试片表面回收药物残留物的参数。评估了一系列因素，包括药品加标水平、加标方法、药物-辅料比例、不同分析人员之间的差异、日内差异以及试片的清洁程序。结果发现，缺乏一种能够 consistently 清洁试片表面的明确定义的操作流程，是导致回收率低且变异较大的主要原因。采用原位清洗溶液（CIP）对试片表面进行清洁的评估结果显示，无论先前评估的条件如何，回收率均较高（>90%），且结果具有良好的重现性（Srel≤4%）。该方法已成功应用于小分子（分子量 <1,000 Da）以及大分子生物药物（分子量高达 50,000 Da）的清洁验证。
引言
在中间体和活性药物成分（API）生产过程中，非专用设备在更换产品时必须验证其清洁度，以防止交叉污染，并确保其在后续使用前符合要求。清洁程序应包含足够的细节，以便操作人员能够以可重复且有效的方式清洁各类设备，并且这些程序应根据美国食品药品监督管理局（FDA）的要求进行验证1。FDA已多次发出警告信，指出存在清洁不充分2,3,4、未能验证清洁验证方法以及未遵守清洁程序等问题5。21 CFR §211.67 规定了成功实施清洁验证所需满足的要求。
行业标准要求，在与生产设备具有相同表面/光洁度的不锈钢试片上进行清洁验证分析方法的验证。在实验室中，使用不锈钢试片（例如，50 cm2）代表设备表面进行清洁验证实验。在这些分析方法的开发与验证过程中，将目标残留物（即，应从设备表面回收的残留物）加标至不锈钢试片上，其加标量由最大允许残留携带量（MACO）限值确定。该限值基于可接受暴露限（AEL）确定，后者定义为患者暴露后不会产生不良健康影响的限值（无可见不良反应水平，NOAEL）。
执行擦拭取样的分....
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方案
1. 样品溶液
- 根据治疗剂量标准下的最大允许残留量（MACO），计算药物的清洁限度（CL）。
注：此处，根据治疗剂量标准下的最大允许残留量（MACO），已计算出药物A的清洁限度（CL）为每50 cm2 2.4 µg。清洁验证分别在清洁限度的50%、100%和150%水平下进行。已针对两种制剂（2.5%和60% w/w 药物载量）进行了清洁验证评估。
2. 样片的清洗程序
- 初始方法
- 用清水冲洗并擦拭样品表面 10 - 15 秒，重复两次，再用甲醇重复清洗两次，以去除任何残留物。由于甲醇具有毒性和高挥发性，该操作应在通风橱中进行。
- 进阶方法
- 使用原位清洗溶液
- 将超声波清洗器设置为室温。该超声波清洗器无功率调节功能，因此需通过设定时间以获得充分的清洗效果。
- 将样品浸入高效液相色谱（HPLC）级水中，超声处理 2 分钟。
- 将样品浸入含 0.1% 碱性洗涤剂的 HPLC 级水溶液中，超声处理 2 分钟。
- 将样品浸入 HPLC 级水中，超声处理 2 分钟。
- 将样品浸入含 0.1% 酸性洗涤剂的 HPLC 级水溶液中，超声处理 2 分钟。
- 将样品浸入 H....
- 使用原位清洗溶液
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结果
药物A清洁验证初始尝试的代表性结果总结见表2。在按照实验部分所述详细步骤对样品片进行清洁之前，在不同加标水平、不同原料药/辅料比例、不同实验人员之间，甚至同一实验人员在不同日期的操作中，均获得了不一致的结果。回收率的这种变异需要加以解决，因为部分结果未能满足验证要求（60% < 回收率 < 150%），例如在所有清洁限度下，60%药物载荷的回收率均不符合标准。
在表2中观察到的第一类变异性是精密度的变异性，这可以从大多数回收率结果所对应的较高Srel值中看出（括号中列出的数值）。除了预期的分析人员之间的变异性（参见参考文献13中的数据），即使由同一名分析人员在其他条件均未改变的情况下进行实验，也观察到了日间变异性，如表2中前两次实验（在2.5%药物载量下.......
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讨论
不锈钢片表面API残留回收率低且结果不稳定的主要原因是缺乏明确的片材表面清洁操作规程。对片材表面进行清洁后，加标回收率结果一致且准确，重现性良好。通过在不锈钢片上实现高回收率的验证，采用经验证方法从生产设备获得的实际清洁验证结果应准确、精密，真实反映设备上的残留水平，最大限度降低因产品间交叉污染导致假阴性结果的风险，从而保障患者安全。
分析人员最初通过调整实验条件（如稀释剂中的有机相比例、加标过程、加标溶液中所用酸的种类和浓度等）来排查回收率低且不一致的问题。然而，该方法未能解决回收率低且不稳定的问题。当使用原位清洗溶液对不锈钢表面进行充分清洁后，上述问题得以彻底解决。这一改进显著提高了生产设备清洁验证成功通过的可能性。需要指出的是，本文所使用的原位清洗溶液仅限于制药行业，因此其他行业（如加工食品、乳制品、化妆品等）应选择合适的原位清洗溶液。 等等。）。CIP 溶液的选择及清洗过程是该工艺成功的关键步骤。本文所述方案将有助于制药行业及其他行业的分析人员更有效地设计和实施成功的清洁验证。该工作还将有助于最大限度地减少批间和/或产品间的交叉污染，从而避免对人类健康产生.......
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披露
不存在经济利益或利益冲突。
致谢
本研究未获得任何资助机构的支持。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 不锈钢试片 | GlobePharma (New Brunswick, NJ ). | SS316-20RA-50cm2 | |
| 原位清洗液（CIP100 和 CIP200） | 购自 Steris Corporation (Mentor, OH) | 1D10BG | 分别为碱性清洗剂和酸性清洗剂 |
| 正排量移液器 | Gilson (Middleton, WI). | ||
| 高效液相色谱级水 | Millipore Milli-Q Advantage 水纯化系统 (Darmstadt, Germany) 或 Honeywell Burdick & Jackson (Muskegon, Michigan) | 7732-18-5 | |
| 高效液相色谱级甲醇 | EMD | MX0475-1 | |
| 冰醋酸 | EMD | MAX0073P5 | |
| 高效液相色谱级乙腈 | J.T. Baker (Avantor Performance Materials, Center Valley, PA) | 75-05-8 | |
| 三氟乙酸 | J.T. Baker (Avantor Performance Materials, Center Valley, PA) | 75-05-8 | |
| 色谱柱 Zorbax Eclipse | XDB-C18, 4.6 x 100 mm, 3.5 µm HPLC 柱 | UNSPSC – 41115709 | |
| Vanquish 超高效液相色谱系统 | Thermo Fisher Scientific, Germering, Germany | ||
| Branson B8510 超声波清洗器 | Branson Ultrasonics (Danbury, CT, USA) | 型号 (8510-D7H) |
参考文献
- Validation of cleaning processes (7/93). Guide to inspections validation of cleaning processes. , United States Food and Drug Administration. (2004).
- Warning Letter: 320-12-08, Gulf Pharmaceuticals. , U.S. Department of Health and Human Services. (2012).
- Warning Letter: 320-12-058, Novartis Internationsl AG. , U.S. Department of Health and Human Services. (2012).
- Warning Letter: 05-10, Teva Parenterals Medicines, Inc. , U.S. Department of Health and Human Services. (2009).
- Warning Letter: 320-14-09, Tianjin Zhongan Pharmaceutical Co., Ltd. , U.S. Department of Health and Human Services. (2014).
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