评估逍遥散对慢性应激小鼠的抗抑郁作用

摘要

本文介绍了一种建立小鼠抑郁模型的方法，用于观察慢性不可预知性轻度应激（CUMS）相关的行为学变化，并评价逍遥散的抗抑郁作用。

摘要

除了标准化使用抗抑郁药物和心理治疗外，中药的应用也使重度抑郁障碍（MDD）患者的总体症状得到改善。因此，本研究旨在建立小鼠抑郁模型，观察慢性不可预知性轻度应激（CUMS）相关的行为变化，并进一步评价逍遥散的抗抑郁作用。将小鼠随机分为四组：对照组、模型组、逍遥散治疗组和氟西汀治疗组。所有小鼠均单独饲养，通过接受为期21天的多种CUMS干预处理以诱导抑郁样状态，具体操作如实验方案所述。对照组和模型组小鼠每日给予0.5 mL蒸馏水，治疗组小鼠则分别给予逍遥散（0.25 g/kg/天）或氟西汀（2.6 mg/kg/天）。研究中所用药物均在三周内每日经口灌胃给药。为评估抑郁样行为，记录了一系列参数，包括毛发状态、体重、敞箱实验评分和蔗糖偏好实验评分。数据分析显示，与对照组小鼠相比，模型组小鼠的行为发生显著改变，而逍遥散和氟西汀治疗可明显改善这些异常行为。本研究结果表明，逍遥散对CUMS诱导的小鼠抑郁样行为具有抗抑郁作用，提示逍遥散处方中的成分因其对抑郁样行为的有益效应，可能值得进一步开发用于抑郁症的治疗。

引言

重度抑郁障碍（MDD）是一种慢性、高度复发性的精神疾病，临床表现为持续情绪低落、抑郁、自卑、精神运动性迟滞、兴趣丧失、睡眠障碍以及严重的悲观情绪或自杀倾向；该病对人类健康和社会稳定造成了严重危害¹。根据世界卫生组织的报告，MDD已成为全球主要的致残原因之一，并可能在2030年成为疾病负担的主要原因^2,3。目前，抗抑郁药物治疗和心理治疗被认为是治疗MDD的首选方法。然而，大量被诊断为MDD的患者对持续的药物治疗或心理干预无反应，这类患者被归类为难治性抑郁⁴。

逍遥散是一种经典的中药复方⁵，自中国宋代以来已广泛用于治疗心理疾病达数千年之久⁶。它由8味中药组成：Radix Bupleuri、Radix Paeoniae Alba、Radix Angelicae Sinensis、Poria、Rhizoma Atractylodis Macrocephalae、Radix Glycyrrhizae、Rhizoma Zingiberis Recens 和 <....

方案

本方案经北京中医药大学动物伦理委员会批准，符合中国《实验动物护理与使用指南》的所有规定。 实验过程中未发生意外死亡情况，本研究中也无需对任何动物实施安乐死。

1. 准备实验用药物

注意：中药材由北京中医药大学刘B博士购买并鉴定。逍遥散包含以下八味传统中药，配比为6:6:6:6:3:6:2:2：当归、白芍、茯苓、柴胡、甘草、白术、薄荷和生姜。

1. 按先前所述方法制备逍遥散¹⁶。
   注意：我们在中日友好医院中药制剂室提取了这些化合物，提取率为18.8%。
2. 采用高效液相色谱-质谱联用分析法（LC-MS/MS）验证逍遥散的质量¹⁷。

2. 实验操作前小鼠的准备

注意：实验方案中选用60只12周龄的健康雄性C57BL/6J小鼠，每只小鼠体重在18至22 g之间。

1. 在进行CUMS实验前，将小鼠单独饲养于典型的无特定病原体（SPF）级实验动物房中（22 ± 1 °C，12 h/12 h明暗循环，相对湿度：30–40%），适应环境一周。
2. 根据小鼠体重，将其随机分为对照组、模型组、逍遥散治疗组和氟西汀治疗组，每组15....

结果

请注意，这些结果此前已由丁秀芳博士发表。 等¹⁸

数据以均值 ± 均值标准误（SEM）表示。根据正态性检验和方差齐性检验的结果，对一般数据采用单因素方差分析（one-way ANOVA）或非参数检验。组间比较采用LSD检验。此外，对于重复测量数据（毛发评分和体重），采用一般线性模型（GLM）的重复测量过程进行单因素方差分析，并采用多变量方差分析方法对各时间点的组间差异进行比较（LSD法）。

CUMS诱导小鼠的生理状态

在采用慢性不可预知性应激（CUMS）处理小鼠三周以诱导抑郁模型后，模型组小鼠的毛发状态出现逐渐性营养不良；在应激两周后尚未出现明显变化，但.......

讨论

本研究中使用的CUMS模型是建立抑郁症应激易感性模型的常用方法²⁴。CUMS的大多数表现可通过抗抑郁药物恢复，表明该模型具有较强的预测效度²⁵。通过该方法，动物接受慢性不可预测的应激刺激后，会出现重度抑郁症的核心症状，包括位置偏爱条件反射降低、快感缺失以及情绪样行为受损²⁶。本实验方案结果显示，持续给予逍遥散或氟西汀可改善CUMS诱导模型小鼠的抑郁样行为；其中氟西汀作为阳性对照药物，用于验证逍遥散的干预效果。

与旷场实验、强迫游泳实验或新奇抑制摄食实验不同，毛发评分并非与人类抑郁症相关的指标，但却是目前用于小鼠抑郁模型最普遍、最可靠且经过充分验证的方法²⁷。在本研究中，模型组小鼠的毛发状态逐渐出现营养不良性改变，这种变化在应激两周后尚未显现，但在慢性不可预知性温和应激（CUMS）程序结束时（三周）明显加重；而在应激暴露一周后，各组间体重差异尚不显著。然而，在造模两周后，各组间的体重差异开始显现.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
中药	Tongrentang (亳州，安徽) 饮片有限公司	-	药物由中日友好医院中药制剂室提取，使用蒸馏水配制逍遥散混悬液，剂量为 0.25 g/kg/d。
氟西汀	PATHEON FRANCE	5545A	使用蒸馏水配制氟西汀混悬液，剂量为 2.6 mg/kg/d。
C57BL/6j 小鼠	北京维通利华实验动物技术有限公司（查尔斯河公司）	SCXK 2011-0004	购自北京维通利华实验动物技术有限公司（查尔斯河公司）的 60 只健康雄性 12 周龄 C57BL/6J 小鼠。
小鼠笼具	斯泰林生物科技	34853016	318×202×135 mm
蒸馏水	-	-	实验全程使用该蒸馏水。
蔗糖	Sigma	-	用于糖水偏好实验中配制 1% 蔗糖溶液。
ACS-2EAS 电子天平	北京恒中衡电子科技有限公司	-	用于称量小鼠在不同阶段的体重。
木质黑色无光泽箱	-	-	（40 cm × 40 cm × 15 cm），由蓝色线条划分为 25 个相等的方格。
WV-CP470 摄像机	Panasonic，日本	-	高清数码摄像机，用于记录旷场实验的全过程。
EthoVision 3.0 软件	Noldus，瓦赫宁根，荷兰	-	视频追踪系统，用于评估小鼠的运动功能和情绪行为。
SPSS Statistics 21.0 软件	IBM	-	采用 SPSS 21.0 软件进行数据分析，根据正态性检验和方差齐性检验结果，对一般数据采用单因素方差分析或非参数检验，组间比较采用 LSD 法。
Graphpad Prism 6.0 软件	Graphpad Software, Inc.，美国	-	使用 Graphpad Prism 6.0 软件绘制统计图表。