Dette papir bruger en flow-flowcytometri-baserede assay til skærmen biblioteker af kemiske hæmmere for identifikation af hæmmere og deres mål, der har indflydelse på T-celle receptoren signalering. De metoder, der beskrives her kan også udvides til høj overførselshastighed screeninger.
T-celle receptoren (TCR) signalering pathway består af et væld af mæglere, der overfører signaler ved aktivering af TCR. Forskellige strategier er blevet foreslået og gennemført for identifikation af nye mediatorer af TCR signalering, som ville forbedre forståelsen af T-celle processer, herunder aktivering og thymic udvalg. Vi beskriver en screening assay, der muliggør identifikation af molekyler, der har indflydelse på TCR signalering baseret på aktivering af udvikle thymocytter. Stærke TCR signaler forårsage udvikle thymocytter at aktivere apoptotiske maskiner i en proces kendt som negative valg. Gennem anvendelsen af kinase hæmmere er dem med mål, der påvirker TCR signalering tilsidesætte processen med negative valg. Metoden beskrevet i dette papir kan bruges til at identificere hæmmere af canonical kinaser med etablerede roller i TCR signaling veje og hæmmere af nye kinaser endnu at være etableret i TCR signaling veje. Screening strategi her kan anvendes på skærme med højere overførselshastighed for identifikation af roman druggable mål i TCR signalering.
T-celler er en slægt af lymfocytter, spiller en central rolle i opretholdelsen af adaptive immunitet. De udtrykke TCR, som gør det muligt for dem at anerkende deres ligander, komplekser bestående af en større histocompatibility komplekse molekyle (MHC) med en bundne peptid, som findes på overfladen af antigen-præsentere celler (PMV’er). Udløsning af TCR signalering vej gennem TCR/MHC samspil er afgørende for T-celle aktivering og udvikling af1.
I T-celle udvikling overflytte knogle-marv-afledte hæmatopoietisk stamceller (HSCs) til thymus, hvor de gennemgår differentiering og gå gennem faser af T-celle lineage progression2. Dobbelt-positive (DP) thymocytter, udtrykker både CD4 og CD8 coreceptors, engagere sig self-peptid/MHC på de pansrede mandskabsvogne. Thymocytter med en moderat affinitet for deres self-peptid/MHC ligander modne til at blive single-positive (SP) CD4 eller CD8 thymocytter, en proces, der betegnes som positiv markering. Omvendt gennemgå thymocytter, der modtager overdreven TCR stimulering gennem self-peptid/MHCs apoptose via negative valg3,4. Denne proces af stimulation-induceret, caspase-afhængige apoptose kan være efterlignede in vitro- ved at stimulere thymocytter, for eksempel med anti-CD3/28 antistof-perler5. Modne T-celler, der passerer udvælgelsesprocessen er aktiveret af ikke-self-peptid/MHC ligander fra PMV’er i periferien. Self-peptid/MHCs er stadig relevante for perifert T-celler i forbindelse med tonic signalering for overlevelse og homeostatiske spredning, differentiering af hjælper T-celler og styrkelse af T-celle svar til ikke-self-peptid/MHCs gennem coagonism6,7,8,9. Høj-affinitet TCR binding til peptid/MHC ligand aktiverer flere downstream signaling veje, som involverer mange signaling molekyler danner en kompleks TCR signalering network10. Den TCR signaling veje er blevet studeret i flere årtier, og endnu opdagelsen af nye mediatorer af vejen viser ingen tegn på aftagende11,12. Graduering af TCR signaling veje har klinisk relevans og kan involvere forstærkende T-celle Svar nemlig immunterapeutisk applikationer eller hæmning af T-celle svar til kontrol af autoimmunitet13. Strategier for graduering af T-celle svar afhænge hovedsagelig af afbrydelse af kinase eller fosfatase aktivitet14,15,16.
Vi beskriver en anvendelse af en flow-flowcytometri-baserede assay for screening af små kemiske forbindelser for deres evne til at modulere TCR signalering og T-celle aktivering17. Analysen hængsler på fænomenet med thymocytter aktivering apoptose pathway når de udsættes for stærk TCR signaler. Analysen er tilstrækkeligt følsomme til at identificere ændringer i stimulation styrke; inkubere thymocytter udtrykker transgene TCR med peptid/MHC tetramers med stigende affinitet resulterede i en tilsvarende stigning i caspase aktivering-bruges som en målestok for den apoptotiske svar5. For skærmen, vi brugte et bibliotek af kinase hæmmere og vurderet deres evne til at modulere thymocyte svar på stærk TCR signaler.
Flere flow-flowcytometri-baserede eller fluorescens-reporter-baserede strategier er blevet beskrevet for high throughput screening af et sortiment af perifere aktivering fænotyper i forskellige T-celle subsets. Sådanne strategier omfatter brug af genetiske fluorescerende journalister at vurdere tidspunktet for og omfanget af T-celle aktivering18, brug af degranulering som en udlæsning af cytotoksiske T-celle aktivitet19,20, og analysen af de fosforylering af forskellige proteiner involveret i cellulær signalering21.
Screening analysen præsenteres her er købedygtig med held identificere stoffer, der hæmmer kanoniske molekyler af TCR signalering pathway, såvel som potentielle, nye forbindelser med hæmmende effekter på TCR signalering. For eksempel, identificeret vi hæmmere af GSK3β og Hsp90 som nye stoffer der påvirker T-celle svar17. Analysen er i stand til at skelne de hæmmere, der interfererer med signaltransduktion, på grund af en reduktion i apoptotiske svar fra TCR-uafhængig virkninger for hæmmere cellulære toksicitet. Ud over induktion af apoptose måle vi også CD69 Opregulering og TCR downregulation som markører for aktivering. Som TCR signalering netværk er kompleks, kan brug af flere udlæsninger øge chancerne for at opdage molekyler med specifikke virkninger på en enkelt vej. Her, har vi også indføre brugen af en centrifugering-uafhængig protokol som en høj overførselshastighed alternativ til den originale protokol under farvning af celler i forberedelse til flow cytometric analyse. Analysen er beskrevet i dette dokument bruger en lille sammensatte bibliotek af kinase hæmmere, men i princippet kan det bruges til højere throughput screening. Bibliotek valg kan også optage en række hæmmere eller andre molekyler.
Screening strategi foreslås her evalueres små-molekyle hæmmere evne til at undertrykke de apoptotiske virkninger i thymocytter efter stimulation, ud over mere konventionelle markører for T-celle aktivering-CD69 Opregulering og TCR downregulation . Yderligere markører kan også inkluderes aktiverer analyse af forskellige thymocyte delmængder32. Et interessant aspekt af den nuværende assay ligger i det faktum, at hæmmere, der hindrer TCR signalering også ville dæmpe induktion af apoptose, yderligere fremhæve sondringen af TCR-uafhængig virkninger hæmmere kan have på overtalelse celledød. Derudover tillader en flow-flowcytometri-baserede assay brug af flere udlæsninger som særskilte aktivering markører, som kunne rapportere virkningerne af hæmmere på separate enkelte grene af TCR signalering. I sagen forelagt her, var der hæmmere, der viste en differentieret hæmning af caspase-3 aktivering og CD69 Opregulering. Fordi nogle forbindelser kan påvirke husholdning funktioner såsom proteinsyntese eller vesikulær handel, er det ikke overraskende at observere følger opregulering af de novo syntetiseres markører (f.eks. CD69), men ikke på posttranslationelle ændringer (f.eks. proteolytiske aktivering af caspase-3).
Som analysen præsenteret her foranstaltninger apoptose som en udlæsning, er det bydende nødvendigt, at de latente giftige virkninger af hæmmere ikke overskygge resultaterne. For eksempel, i skærmbilledet, vi ikke fortyndes staurosporine ud over 1 nM, selv om den stadig er giftigt for celler ved denne koncentration. De repræsentative resultater er i overensstemmelse med staurosporine at være en promiskuøs kinase inhibitor og en inducer af apoptose33. Uden en tilstrækkelig fortynding af de stoffer testet for ugiftige koncentrationer, er det muligt at overse potentielle hits.
Screening strategi detaljeret her ville være vanskeligt at anvende til mennesker på grund af komplikationer forbundet med at opnå tilstrækkelig antal thymocytter for high throughput screening. Det er dog muligt at få menneskelige thymus prøver fra pediatric hjerte biopsier34,35 eller fostre36,37. Ikke desto mindre, som TCR signalering veje og aminosyresekvenser af signalering proteiner er stort set bevaret mellem mus og mennesker, thymocyte analysen giver en nyttig indledende screening strategi, og eventuelle resultater opnået med denne analyse ved hjælp af musen thymocytter kan, derefter, verificeres i primære humane lymfocytter.
En begrænsning af den konventionelle centrifugering-afhængige protokol vedrører udsigten til celletab, som kan tilskrives den omstændelig karakter af den proces, som indebærer skridt såsom celle permeabilization og centrifugering. Hver centrifugering og resuspension trin uundgåeligt resulterer i tab af celler. Mens sådanne tab ikke kan være afgørende for undersøgelser, hvor et begrænset antal prøver, kan det give problemer når de anvendes i højere-throughput screening, især som assay format skrider fra 96 – til 384 – til 1536-godt. En måde at omgå dette problem er ved hjælp af celle-gennemtrængelige fluorescerende caspase sensorer38 at muliggøre påvisning af caspase aktivering samtidig undgå komplikationer af celle permeabilization og flere vasker5. Alternativt kan du er ansætte en centrifugering-uafhængig metode til vask celler af laminar flow også muligt for at minimere celletab. Med en automatiseret plade vask station i forbindelse med en væg-mindre plade, vaskes celler af laminar flow uden brug af en centrifuge. Den eksponentielle fortynding af reagenser giver mulighed for en grundig og effektiv afskylning af celler i mindre end 3 min., hvilket svarer til en tilsvarende fortynding til to runder af centrifugal vask. Uden eksterne belastninger på grund af centrifugering, cellerne er mere holdbar og celle tab minimeres.
Vi har også undersøgt muligheden af at anvende automatiserede pladen vask station efter dyrkning thymocytter i 96-brønd U-bunden plader og også dyrkning af celler direkte i væggen-mindre plader kompatibel med automatiseret pladen vask station. Dyrkning af celler i væg-mindre plader aktiveret afskaffelse af alle centrifugering trin og minimeret celletab ved at eliminere behovet for en stikprøve overførsel på tværs af pladerne. Generelt, de tre forskellige protokoller er sammenlignelige i både stimulation effektivitet og farvning. Den automatiserede vask station giver fordelen ved automatisering, hastighed og effektivitet, hvilket gør det lettere for højere overførselshastighed analyse. Desuden, med øget automatisering, vask trin kan udføres hurtigere, og der er en større sammenhæng mellem eksperimenter eller eksperimentatorer. Vask station har imidlertid visse ulemper: store mængder af vask buffere er nødvendige for skive priming (150 mL per buffer ændring, hvoraf 50 mL bruges til vask); ekstra pleje er nødvendig, når håndtering pladen til at undgå enhver krydskontaminering af brønde på grund af begrænset opdeling mellem wells af små-volumen plade; resterende buffer på 25 µL i brøndene efter vask kræver anvendelsen af reagenser tilberedes på en højere end 1 x koncentration. For at løse problemer af residualvolumen og begrænset mængde kapacitet på pladen, kan tilbehør til at udvide inkubation volumen fra 70 µL til 150 µL tilføjes, at lette vedtagelsen af konventionelle protokoller. Mens automatiserede plade håndtering systemer er i øjeblikket tilgængelige, har de en betydelig fodaftryk i forhold til laminar vask system, som er en lille enhed af ~ 1 kubik fod (~0.028 m3). Desuden er integration af centrifugering i automatiserede plade håndteringssystemer udfordrende, begrænse deres brug i celle vask. Der er i øjeblikket ingen anden centrifuge-uafhængig celle vask instrumenter til rådighed, så vidt vi ved.
Screening strategien præsenteret her er købedygtig identificere små molekyler og deres påståede mål kinaser, der påvirker TCR signalering og T-celle aktivering. Biblioteket bruges her består hovedsageligt små-molekyle hæmmere af kinaser og var i stand til at generere en række potentielt interessant hits. Protokollen kan også anvendes let, hæmmer biblioteker af andre enzym klasser eller andre typer af små molekyler og biblioteker af andre stoffer (fx, forskellige makromolekyler). Protokollen kan også bruges til at screene andre celletyper, som perifert T-lymfocytter eller udødeliggjort celler, herunder dem, der udtrykker transgene TCRs eller transporterer reporter systemer. At identificere og karakterisere nye mediatorer af T-celle signalering kan forbedre vores viden om den signalvejen og også støtte i udviklingen af målrettede terapi i immune sygdomme13,14,15, 16. i alle, denne undersøgelse tilføjer til rækken af tilgængelige muligheder for påvisning af mæglere af T-celle signalering via high throughput screening assays.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra Singapore Ministry of Healths nationale medicinske Forskningsråd, NMRC CBRG15may017 og Singapore Ministeriet for uddannelse, 2014-T2-1-136 (til N.R.J.G.).
RPMI | HyClone | SH30027FS | |
FBS | HyClone | SH3007103 | |
L-Glutamine | HyClone | SH3003401 | |
Sodium pyruvate | HyClone | SH3023901 | |
Penicillin/Streptomycin | HyClone | SV30010 | |
b-mercaptoethanol | Sigma Aldrich | 516732 | |
10X PBS | Vivantis | PB0344 – 1L | |
Kinase Screening Library (96-Well) | Cayman Chemical | 10505 | Exact contents of the library may vary |
DMSO | Sigma Aldrich | D2650 | |
Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
anti-CD3/CD28 beads | Thermo Fisher Scientific | 11452D | |
FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit | BD Pharmingen | 550480 | Contains Fixation/Permeabilisation buffer, 10X Perm/Wash buffer and anti-caspase 3 antibody |
DA-Cell Washer | CURIOX | HT1000 | |
96-well DA-Cell Plate | CURIOX | 96-DC-CL-05 | |
Antibodies | |||
CD3e | BioLegend | 100236 | |
TCRb | BD Biosciences | 553174 | |
CD4 | BD Biosciences | 740007 | |
CD8 | BD Biosciences | 563786 | |
CD69 | eBioscience | 25-0699-42 | |
Inhibitors | |||
TG003 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PKC 412 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Doramapimod | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Paclitaxel | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erlotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-5 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-BEZ235 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Phthalazinone pyrazole | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-879 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
1-NA-PP1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Torin 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide II | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIBF 1120 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SMI-4a | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide XI (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10657 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-703026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Chelerythrine chloride | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Tunicamycin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
GSK 1059615 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Ruxolitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 505124 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
INK128 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Canertinib (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 431542 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 173074 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Valproic Acid (sodium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 0325901 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
VX-702 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Emodin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CHIR99021 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIO | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Imatinib (mesylate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sunitinib Malate | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Gefitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
3-Methyladenine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide I | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide IV | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide V | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 663284 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D 4476 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NU 7026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-9 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Indirubin-3'-monoxime | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-62 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-93 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CGP 57380 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Iso-Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-Glycyl-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide VIII (acetate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ST638 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6656 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY364947 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10621 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
YM-201636 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 447439 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-041164 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-AEW541 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP242 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ABT-869 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10622 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
17β-hydroxy Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10626 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6668 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10572 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
N,N-Dimethylsphingosine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY294002 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
U-0126 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Staurosporine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-92 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 (potassium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
O-1918 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Y-27632 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 98059 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 169316 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TGX-221 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D-erythro-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
OSU03012 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
JNJ-10198409 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Arachidonic Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lauric Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-252424 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10505 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI-103 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PIK-75 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sphingosine Kinase Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Piceatannol | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(R)-Roscovitine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BAY-43-9006 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10561 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-604850 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI3-Kinase α Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ML-9 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Triciribine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erbstatin Analog | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Kenpaullone | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-494 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-825 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1478 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 216763 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 415286 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-17 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-8 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LFM-A13 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-514 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Apigenin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10554 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
DRB | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-13022 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-14620 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-490 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-82 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-99 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-213 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-183 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lavendustin C | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 336372 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
5-Iodotubercidin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 202190 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10571 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Nilotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SP 600125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
L-threo-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-89 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
HA-1077 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-370 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1296 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KT 5823 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Janex 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10574 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10575 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10576 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NH125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TWS119 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 210902 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10577 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10578 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 184161 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CCT018159 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Myricetin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |