Dette dokumentet bruker en flyt-cytometri-baserte analysen til skjermen biblioteker av kjemiske hemmere for identifisering av hemmere og sine mål som påvirker T-celle reseptor signalering. Metodene som er beskrevet her kan også utvides for høy gjennomstrømming screenings.
T-celle reseptor (TCR) signalering pathway består av en rekke meglere som overfører signaler ved aktivering av TCR. Forskjellige strategier har vært foreslått og implementert for identifisering av nye meglere TCR signalnettverk, som ville forbedre forståelsen av T-celle prosesser, inkludert aktivering og thymic utvalg. Vi beskriver en screening analysen som gjør identifisering av molekyler som påvirker TCR signalering basert på aktivering av utvikle thymocytes. Sterk TCR signaler føre utvikle thymocytes aktivere apoptotisk maskiner i en prosess kjent som negative utvalg. Gjennom anvendelse av kinase hemmere er de med mål som påvirker TCR signalering kan overstyre prosessen med negative utvalg. Metoden beskrevet i dette dokumentet kan brukes til å identifisere hemmere av kanoniske kinaser med etablerte roller i TCR signalveier og hemmere av nye kinaser ennå å bli etablert i TCR signalveier. Screening strategien her kan brukes til skjermer for høyere gjennomstrømming for identifikasjon av romanen druggable mål i TCR signalering.
T-celler er en avstamning av lymfocytter spiller en sentral rolle i vedlikehold av adaptiv immunitet. De uttrykke TCR, slik at de kan anerkjenne deres ligander, komplekser som består av et store histocompatibility kompleks molekyl (MHC) med et bundet peptid, som finnes på overflater av antigen presentere celler (APCs). Følge av TCR signalveien gjennom TCR/MHC samspillet er avgjørende for T-celle aktivering og utvikling1.
I T-celle development overføre bein margtransplantasjon-avledet blodkreft stamceller (HSCs) mot thymus, der de gjennomgå differensiering og gå gjennom stadier av T celle avstamning progresjon2. Dobbel-positive (DP) thymocytes, uttrykke både CD4 og CD8 coreceptors, engasjere seg med selv-peptid/MHC på APCs. Thymocytes med en moderat affinitet til deres selv-peptid/MHC ligander moden til å bli enkelt-positive (SP) CD4 eller CD8 thymocytes, en prosess kalt som positiv valg. Derimot gjennomgår thymocytes mottar overdreven TCR stimulering gjennom selv-peptid/MHCs apoptose via negativ utvalg3,4. Denne prosessen med stimulering-indusert, caspase-avhengige apoptose kan være etterlignet i vitro ved å stimulere thymocytes, for eksempel med anti-CD3/28 antistoff perler5. Modne T-celler som passerer utvelgelsesprosessen er aktivert av ikke-selv-peptid/MHC ligander fra APCs i periferien. Self-peptid/MHCs er fortsatt relevant for eksterne T-celler, i sammenheng med tonic Signaliser for overlevelse og homøostatisk spredning, differensiering av hjelper T-celler og styrking av T-celle svar til ikke-selv-peptid/MHCs gjennom coagonism6,7,8,9. Høy affinitet TCR binding til peptid/MHC ligand aktiverer flere nedstrøms signalveier, som involverer mange signalnettverk molekyler utgjør en kompleks TCR signalering nettverk10. TCR signalveier har vært studert i flere tiår, og ennå oppdagelsen av nye meglere av veien viser ingen tegn til avta11,12. Modulering av TCR signalveier har klinisk relevans og kan omfatte potentiating T-celle svar for immunterapeutisk programmer eller hemming av T-celle svar for kontroll av autoimmunitet13. Strategier for modulering av T-celle svar avhenger hovedsakelig avbrudd i kinase eller fosfatase aktivitet14,15,16.
Vi beskriver en anvendelse av en flyt-cytometri-baserte analysen for screening av små kjemiske forbindelser til å modulere TCR signalisering og T-celle aktivering17til. Analysen er avhengig av fenomenet thymocytes aktivere apoptose veien når de utsettes for sterke TCR signaler. Analysen er tilstrekkelig sensitive til å identifisere endringer i stimulering styrke; rugende thymocytes uttrykke transgene TCR med peptid/MHC tetramers med økende affinitet resulterte i en tilsvarende økning i caspase aktivisering-brukt som et mål av apoptotisk svar5. For skjermen, vi brukte et bibliotek av kinase hemmere og vurdert deres evne til å modulere thymocyte svaret å sterk TCR signaler.
Flere flyt-cytometri-basert eller fluorescens-reporter-baserte strategier har blitt beskrevet for høy gjennomstrømming screening av et utvalg av perifer aktivisering fenotyper i ulike T-celle delsett. Slike strategiene omfatter bruk av genetisk fluorescerende journalister å vurdere timing og omfanget av T-celle aktivering18, bruk av omfatter degranulering som en presentasjon av cytotoksiske T-celle aktivitet19,20, og analyse av den fosforylering av ulike proteiner involvert i mobilnettet signalering21.
Screening analysen presenteres her er vellykket identifisere forbindelser som hemmer kanoniske molekyler av TCR signalering veien, så vel som potensielle, romanen forbindelser med hemmende effekt på TCR signalering. For eksempel identifisert vi hemmere av GSK3β og Hsp90 som nye forbindelser påvirker T-celle svar17. Analysen er kjøpedyktig skille hemmere som forstyrrer signaltransduksjon, på grunn av en reduksjon i apoptotisk svaret, fra TCR-uavhengig virkningene av hemmere på mobilnettet toksisitet. I tillegg til induksjon av apoptose måle vi også CD69 oppregulering og TCR downregulation som markører for aktivisering. Som TCR signalering nettverk er komplisert, kan bruken av flere readouts øke sjansene for å oppdage molekyler med spesifikke effekter på en enkelt bane. Her introduserer vi også bruk av en uavhengig av sentrifugering protokoll som en høy gjennomstrømming alternativ til de originale protokollen under fargingen cellene i forberedelse til flyt cytometric analysen. Analysen beskrevet i dette dokumentet bruker en liten sammensatt bibliotek med kinase hemmere, men i prinsippet kan det brukes for høyere gjennomstrømming screening. Biblioteket av valg kan også inkludere en rekke hemmere eller andre molekyler.
Screening strategien foreslått her vurderer muligheten for små molekyl hemmere å undertrykke den apoptotisk effekten i thymocytes etter stimulering, i tillegg til mer konvensjonelle markører T-celle aktivering-CD69 oppregulering og TCR downregulation . Ekstra markører kan også bli inkludert aktivere analyse av ulike thymocyte delsett32. Et interessant aspekt til gjeldende analysen ligger i det faktum at hemmere som hindrer TCR signalering ville også dempe induksjon av apoptose, ytterligere utheving æren av TCR-uavhengig effekter hemmere kan ha på indusere celledød. Videre tillater en flyt-cytometri-baserte analysen bruk av flere readouts som tydelig aktivisering markører, som kunne rapportere virkningene av hemmere om personlige greiner TCR signalnettverk. I tilfellet her, var det hemmere som viste en differensiell hemming av caspase-3 aktivisering og CD69 oppregulering. Fordi noen forbindelser kan påvirke husarbeid funksjoner som proteinsyntese eller vesicula handel, er det ikke overraskende å observere effekter på oppregulering av de novo syntetisert markører (f.eks CD69) men ikke på posttranslational endringer (f.eks proteolytisk aktivering av caspase-3).
Som analysen presentert her måler apoptose som en presentasjon, er det viktig at de latente toksiske effektene av hemmere ikke skjule resultatene. For eksempel skjermen vi ikke utvanne staurosporine utover 1 nM, til tross for det fortsatt er giftig for cellene på at konsentrasjonen. Representant resultatene er enig med staurosporine å være en promiskuøse kinase inhibitor og en induser apoptose33. Uten en tilstrekkelig fortynning av forbindelser testet til nontoxic konsentrasjoner, er det mulig å overse mulige treff.
Screening strategien finnesher ville være vanskelig å bruke mennesker på grunn av komplikasjoner knyttet til å skaffe tilstrekkelig antall thymocytes for høy gjennomstrømming screening. Det er imidlertid mulig å få menneskelige thymus prøver fra pediatric cardiac biopsier34,35 eller fostre36,37. Likevel, som TCR signalnettverk trasé og amino acid sekvenser signalnettverk proteiner er i stor grad konservert mellom mus og mennesker, thymocyte analysen gir en nyttig foreløpige screening strategi, og noen resultater oppnådd med denne analysen ved hjelp av musen thymocytes kan deretter bekreftes i primære menneskelige lymfocytter.
En begrensning av vanlig sentrifugering-avhengige protokollen gjelder utsiktene til celle tap, som kan tilskrives må natur prosessen, som omfatter trinn som cellen permeabilization og sentrifugering. Hver sentrifugering og rørets trinn uunngåelig resulterer i tap av celler. Mens slike tap ikke kan være kritisk for studier som involverer noen eksempler, medføre det problemer når den brukes i høyere gjennomstrømming screening, spesielt som analysen format utvikler seg fra 96 til 384 – til 1536-brønnen. En måte å omgå dette problemet er gjennom bruk av celle-permeable fluorescerende caspase sensorer38 at påvisning av caspase aktivisering og unngå komplikasjoner av cellen permeabilization og flere vasker5. Alternativt, ansette en uavhengig av sentrifugering metode for vaske celler av laminær strømning er også mulig for å minimere tap av cellen. Med en automatisert plate vaske stasjon i forbindelse med en vegg-mindre plate, er celler vasket av laminær strømning uten bruk av en sentrifuge. Eksponentiell fortynning av reagenser tillater det grundig og effektiv skylling av celler i mindre enn 3 minutter, som representerer en tilsvarende fortynning to runder med sentrifugal vask. Uten eksterne stress på grunn av sentrifugering, cellene mer levedyktig og celle tap er minimert.
Vi utforsket også bruke automatiserte plate vaske stasjon etter dyrking thymocytes i 96-brønnen U bunn plater og også dyrking av celler i veggen mindre plater kompatible med automatiserte plate vaske stasjon. Dyrking av celler i veggen mindre platene aktivert eliminering av alle sentrifugering skritt og minimert celle tap ved å eliminere behovet for eksempel overføring over plater. Vanligvis er tre ulike protokollene sammenlignbare både stimulering effektivitet og flekker. Automatisert vask stasjonen gir fordelen med automatisering, hastighet og effektivitet, som gjør det lettere for høyere gjennomstrømming analyse. Videre med økt automatisering, vask fremgangsmåten kan utføres raskere, og det er en større konsistens mellom eksperimenter eller forskere. Men vask stasjonen har visse ulemper: store mengder vaske buffere kreves for skive grunning (150 mL per endringen, som 50 mL brukes for vask); ekstra forsiktighet er nødvendig når du håndterer platen for å unngå noen krysskontaminering av brønnene på grunn av begrenset partisjonering mellom brønnene av små volumer plate; gjenværende buffer på 25 µL i brønnene etter vask nødvendiggjør bruk av reagenser forberedt høyere enn 1 x konsentrasjonen. For å løse problemene med residualvolum og begrenset kapasitet på platen, kan ekstrautstyr utvide inkubasjon volumet fra 70 µL 150 µL legges, og tilrettelegging for bruk av konvensjonelle protokoller. Mens automatiserte plate håndteringssystemer er tilgjengelig, har de en viktig innflytelse i forhold til laminær vaskesystemet, som er en liten enhet for ~ 1 kubikk fot (~0.028 m3). Videre er integrering av sentrifugering i automatiserte plate håndteringssystemer utfordrende, begrense deres bruk i cellen vask. Det finnes ingen annen sentrifuge-uavhengig celle vaske instrumenter tilgjengelig, så vidt vi vet.
Screening strategien presenteres her er kjøpedyktig identifisere små molekyler og deres påståtte målet kinaser, som påvirker TCR signalisering og T-celle aktivering. Biblioteket her omfatter hovedsakelig små molekyl hemmere av kinaser og kunne generere en rekke muligheter interessant treff. Protokollen kan også brukes gjerne til hemmer biblioteker til andre enzym klasser eller andre typer små molekyler og biblioteker av andre stoffer (f.eks, ulike makromolekyler). Protokollen kan også brukes til skjermen andre celletyper, for eksempel perifere T-lymfocytter eller udødeliggjort celler, inkludert de uttrykker transgene TCRs eller bærer reporter systemer. Identifisere og karakterisere nye meglere av T-celle signalisering kan forbedre vår kunnskap om signalveien og også hjelp i utviklingen av målrettet terapi i immune sykdommer13,14,15, 16., denne studien legger utvalg av tilgjengelige alternativer for påvisning av meglere av T-celle signalnettverk via høy gjennomstrømming screening analyser.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra Singapore helsedepartementets National Medical Research Council, NMRC CBRG15may017 og Singapore departementet for utdanning, 2014-T2-1-136 (til N.R.J.G.).
RPMI | HyClone | SH30027FS | |
FBS | HyClone | SH3007103 | |
L-Glutamine | HyClone | SH3003401 | |
Sodium pyruvate | HyClone | SH3023901 | |
Penicillin/Streptomycin | HyClone | SV30010 | |
b-mercaptoethanol | Sigma Aldrich | 516732 | |
10X PBS | Vivantis | PB0344 – 1L | |
Kinase Screening Library (96-Well) | Cayman Chemical | 10505 | Exact contents of the library may vary |
DMSO | Sigma Aldrich | D2650 | |
Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
anti-CD3/CD28 beads | Thermo Fisher Scientific | 11452D | |
FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit | BD Pharmingen | 550480 | Contains Fixation/Permeabilisation buffer, 10X Perm/Wash buffer and anti-caspase 3 antibody |
DA-Cell Washer | CURIOX | HT1000 | |
96-well DA-Cell Plate | CURIOX | 96-DC-CL-05 | |
Antibodies | |||
CD3e | BioLegend | 100236 | |
TCRb | BD Biosciences | 553174 | |
CD4 | BD Biosciences | 740007 | |
CD8 | BD Biosciences | 563786 | |
CD69 | eBioscience | 25-0699-42 | |
Inhibitors | |||
TG003 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PKC 412 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Doramapimod | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Paclitaxel | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erlotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-5 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-BEZ235 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Phthalazinone pyrazole | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-879 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
1-NA-PP1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Torin 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide II | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIBF 1120 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SMI-4a | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide XI (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10657 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-703026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Chelerythrine chloride | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Tunicamycin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
GSK 1059615 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Ruxolitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 505124 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
INK128 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Canertinib (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 431542 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 173074 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Valproic Acid (sodium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 0325901 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
VX-702 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Emodin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CHIR99021 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIO | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Imatinib (mesylate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sunitinib Malate | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Gefitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
3-Methyladenine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide I | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide IV | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide V | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 663284 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D 4476 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NU 7026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-9 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Indirubin-3'-monoxime | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-62 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-93 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CGP 57380 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Iso-Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-Glycyl-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide VIII (acetate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ST638 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6656 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY364947 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10621 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
YM-201636 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 447439 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-041164 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-AEW541 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP242 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ABT-869 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10622 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
17β-hydroxy Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10626 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6668 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10572 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
N,N-Dimethylsphingosine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY294002 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
U-0126 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Staurosporine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-92 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 (potassium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
O-1918 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Y-27632 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 98059 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 169316 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TGX-221 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D-erythro-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
OSU03012 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
JNJ-10198409 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Arachidonic Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lauric Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-252424 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10505 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI-103 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PIK-75 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sphingosine Kinase Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Piceatannol | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(R)-Roscovitine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BAY-43-9006 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10561 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-604850 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI3-Kinase α Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ML-9 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Triciribine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erbstatin Analog | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Kenpaullone | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-494 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-825 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1478 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 216763 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 415286 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-17 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-8 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LFM-A13 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-514 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Apigenin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10554 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
DRB | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-13022 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-14620 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-490 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-82 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-99 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-213 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-183 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lavendustin C | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 336372 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
5-Iodotubercidin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 202190 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10571 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Nilotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SP 600125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
L-threo-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-89 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
HA-1077 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-370 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1296 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KT 5823 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Janex 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10574 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10575 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10576 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NH125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TWS119 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 210902 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10577 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10578 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 184161 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CCT018159 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Myricetin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |