兔子静脉介词模型模仿再血管化手术使用静脉移植评估动脉血压下的影响增生

摘要

本议定书旨在通过将静脉置于动脉血压下，在使用静脉移植进行静脉移植手术后衰减静脉内血性增生的策略，从而在实验中产生静脉内质增生。

摘要

虽然静脉移植在缺血性疾病的再血管化手术中通常用作自体移植物，但由于动脉血压暴露，导致静脉增生加速，长期的体量仍然很差。本协议旨在通过将兔形静脉与ipsi侧胡萝卜动脉相交，建立实验性静脉增生。该协议不需要在身体躯干深处进行外科手术，切口的程度有限，对动物的侵入性较小，允许在植入后进行长期观察。这个简单的程序使研究人员能够研究减轻植入静脉移植的暗示增生进展的策略。使用这种协议，我们报告了微RNA-145（miR-145）的影响转导，已知微RNA-145能够控制血管平滑肌肉细胞（VSMC）从增殖到收缩状态的表型，进入收获的静脉移植物。我们通过VSMC的表型变化，在植入手术前通过转导miR-145，证实了静脉移植的体内增生衰减。在这里，我们报告一个侵入性较低的实验平台，以研究可用于减轻静脉移植在再血管手术中的风险增生的策略。

引言

全世界因动脉粥样硬化而患缺血性疾病的患者数量正在增加^1。尽管目前心血管疾病的医学和外科治疗取得了进步，但缺血性心脏病，如心肌梗死，仍然是导致发病率和死亡率的主要原因^2。此外，以四肢血流量减少为特征的外周动脉疾病诱发严重的肢体缺血，其中约40%的患者在诊断后6个月内失去双腿，死亡率高达^20%3。

再血管化手术，如冠状动脉旁路移植（CABG）和周围动脉旁路手术，是缺血性疾病的主要治疗选择。这些手术的目的是提供一个新的血液途径，提供足够的血液流向动脉的硬骨或阻塞病变的远端部位。虽然原位动脉移植，如CABG的内部胸动脉，是首选作为旁路移植，因为预期的更长的光度，静脉移植，如自体性沙芬静脉，是常用的，因为更高的可及性和可用性^4。静脉移植的薄弱环节是动脉移植率比动脉移植率低^，在动脉压力下加速增生，导致静脉移植病^6。

静脉移植疾病通过以下三个步骤发展:1） 血栓;2） 暗示性增生;和3）动脉粥样硬化^7。为了解决静脉移植病，已经进行了大量的^{基础研究。}到目前为止....

方案

注:所有对动物进行的外科手术均应按照《实验室动物护理和使用指南》（www.nap.edu/catalog/5140.html）或其他适当的道德准则进行。议定书应在继续之前得到有关机构动物福利委员会的批准。

1. 动物的准备

1. 购买体重2.7~3.0公斤的雄性日本白兔（或体型相当的兔子）。
2. 在12小时的光暗周期中使兔子适应1周，并在手术前定期喂兔子周食。

2. 麻醉和动物环境

注:所有后续过程必须在无菌条件下执行。手术领域和设备应在使用前用10%的povidone碘溶液、70%酒精或四元铵化合物进行消毒。

1. 通过阴囊静脉注射五巴比妥钠（25毫克/千克）给兔子麻醉。
2. 确保兔子失去力量后，将其转移到操作台，并将其置于上位位置。用麻醉面罩盖住鼻子和嘴巴。开始使用吸入 0.7-1.0% 的 isoflurane-氧混合物来管理一般麻醉。
   注:如果兔子开始移动，高达2%的叶氏暂时性浪涌将有效。
3. 使用电动发夹修剪颈部和肩部的毛皮。喷洒70%乙醇或其他防腐剂对表面进行消毒后，用剃须刀剃须刀剃下宫颈区域的其余头发。用10%的povidone-碘消毒手术场，并施用盐酸脂（3毫克/千克）作为局部麻醉。
   注:检查气管的重复运动。观察颈静脉和颈动脉的脉动。当呼吸和脉动率降低....

结果

图 1A显示了静脉间位手术（上面板）后 2 周内成功进行插值增生的代表性图像。下面板显示微RNA-145负载聚（乳酸-共甘油酸）纳米粒子的治疗效果，这些纳米粒子衰减了内量增生（下面板）。图1B显示了使用磷酸盐缓冲盐水控制（PBS）、控制微RNA（Cont-miR）和微RNA-145（miR-145）组对照组之间的内量增生的比较。微RNA含有聚（乳酸-共甘油酸）纳米粒子。微RNA-145治疗显著减弱了刺激性增生。图2显示了基-67的免疫染色，一个细胞增殖标记。在miR-145组中观察到的Ki-67阳性细胞较少，这表明VSMC从未成熟的增殖状态到成熟的收缩状态的表型变化。

<.......

讨论

本协议旨在提供一个实验平台，用于测试 VSMC 的各种分子或基因干预，以控制表型从增殖状态到收缩状态，进而衰减体内静脉内刺激增生的进展。利用这个模型，我们在手术后2周成功地制备了内皮增生（图1A），并指明了微RNA-145控制VSMC表型^26、27,27的治疗潜力，验证了本发明作为模型，以进一步研究静脉增生的衰减。

我们的兔子增生模型包括以下三个主要步骤:1） 导管损伤;2） 血管间位;和3） 远端分支连接（图3）。用气球导管通道受伤的静脉移植物被证明是去皮的，并且被证明是超塑性^{23，28。23,}在此协议中，我们将导管受伤的静脉移植物视为皂状静脉移植物，这些移植通常通过人工加压和扩张，用于冠状动脉或外周动脉旁路移植等程序。此外，由于.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10% 聚维酮碘溶液	Nakakita	872612	外科消耗品
2-0 VICRYL Plus	Johnson and Johnson VCP316H		外科消耗品
4-0 丝绸缝合	Alfresa pharma	GA04SB	外科消耗品
8-0 聚丙烯缝合	Ethicon	8741H	外科消耗品
头孢唑林钠	Nichi-Iko Pharmaceutical	6132401D3196	抗生素
Fogarty 导管 （2Fr）	Edwards Lifesciences LLC	E-060-2F	外科消耗品
肝素	尼普洛	873334	抗凝剂
静脉导管 （20G）	Terumo	SR-OT2051C	外科消耗品
异氟醚	Fujifilm	095-06573	麻醉
盐酸利多卡因	MP Biomedicals 193917		麻醉
戊巴比妥钠	东京化学工业	P0776	麻醉