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毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱联用(CE-ICP-MS)系统构建用于铁氧化还原形态(Fe(II)、Fe(III))的定量分析

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DOI:

10.3791/61055

2020年5月4日

本文内容

摘要

该铁氧化还原形态分析方法基于毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱,结合样品堆积技术和单次运行中的快速分析。该方法可快速分析多种组织和生物流体样品中的铁氧化还原形态,并提供较低的定量限。

摘要

铁代谢失衡在多种疾病的病理生理机制中起重要作用,包括癌症和多种神经退行性疾病。过量的铁会导致细胞内产生游离的、具有氧化还原活性的亚铁离子(Fe(II)),从而引发氧化应激(OS)以及通过脂质过氧化导致的细胞死亡,即铁死亡(FPT)。因此,相较于总铁含量的测定,对亚铁(Fe(II))和高铁(Fe(III))离子进行定量检测是深入理解这些有害过程的关键。由于在脑脊液(CSF)等实际样本中,Fe(II)/(III)的测定可能受到快速的氧化还原状态转换及低浓度的限制,因此需要具备快速分析能力和低定量限(LOQ)的检测方法。毛细管电泳(CE)具有快速分离Fe(II)/Fe(III)的优势,且无需使用可能干扰氧化还原平衡或导致分析物吸附的固定相。将CE与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用作为检测器,可进一步提高检测的灵敏度和选择性。本方法采用20 mM盐酸作为背景电解质,电压为+25 kV。通过电导率-pH堆积技术改善了峰形和浓度检测限。为降低56[ArO]+的干扰,ICP-MS在动态反应池(DRC)模式下运行,反应气为NH3。该方法的检测限(LOD)达到3 µg/L。由于采用了堆积技术,可在不损害分离效果的前提下增加进样体积,从而改善检测限。以峰面积进行校准,在浓度高达150 µg/L范围内呈线性关系。测定精密度为2.2%(Fe(III))至3.5%(Fe(II))。迁移时间精密度对于两种形态均小于<3%,该数据基于人源神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞裂解液1:2稀释后的重复测定结果。通过标准加入法进行的回收率实验显示,Fe(III)的准确度为97%,Fe(II)为105%。在脑脊液等实际生物样本中,迁移时间可能因电导率(即盐度)的变化而波动,因此需通过标准加入法确认峰的归属。

引言

目前,铁介导的氧化应激(OS)在多种疾病中发挥关键作用,尤其在阿尔茨海默病和帕金森病等神经退行性脑部疾病以及癌症中表现尤为明显1,2,3,4。OS 与氧化还原对 Fe(II)/Fe(III) 的状态和平衡密切相关。Fe(III) 为氧化还原非活性态,而 Fe(II) 可通过催化 H2O2 分解,进而产生活性氧(ROS)、羟基自由基并引发膜脂质过氧化,从而具有强效的促氧化能力5,6。在分子水平上,Fe(II) 生成的 ROS 和过氧化磷脂对蛋白质、脂质和 DNA 的完整性构成严重破坏7,8。此类有害的细胞功能障碍已被证实可导致线粒体功能障碍,表现为 ATP 含量降低9,甚至可触发一种程序性坏死性细胞死亡,即铁死亡(FPT)10,11。因此,对 Fe(II)/(III) 进行定量的氧化还原形态分析,在多种与氧化还原相关的疾病研究中具有极其重要的意义。

化学形态分析是研究痕量元素生物学作用及代谢的成熟工具,不仅广泛应用于一般研究7,8,也广泛应用于神经退行性疾病的研究12,13,14,15,16,17。文献中报道的铁氧化还原形态分析方法通常基于液相色谱(LC)分离,部分研究采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)作为元素选择性检测器。然而,在常规LC操作中,每次运行之间需要过长的清洗时间。更为严重的问题是,LC色谱柱的批间差异导致每次更换色谱柱后都必须重新优化洗脱条件。这些问题限制了高通量分析的实现,还需额外时间以获得可接受的可靠性,并对方法进行彻底的重新评估。

为克服这些缺点,本文介绍了一种基于毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱法(CE-ICP-MS)的 Fe(II)/Fe(III) 氧化还原形态分析方法。与液相色谱法相比,毛细管电泳具有多种优势18。毛细管无固定相,因此几乎不受批次差异的影响。当毛细管老化或堵塞时,可快速更换,且通常性能保持不变。样品间的冲洗和清洗步骤高效且耗时短,每个样品的分析时间也较短。

该方法具有良好的优度指标,可靠性高。作为原理验证,本方法应用于人源多巴胺能神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞裂解液,此类样本在神经退行性疾病及癌症研究中具有重要意义19

方案

警告:该方法使用盐酸(HCl,从超纯品开始稀释,浓度为 1 M)和四甲基氢氧化铵(TMAH,从超纯品开始稀释,浓度为 25%)。这两种物质均具有强腐蚀性。请使用皮肤和眼睛防护装备。

1. 电解质的制备

  1. 配制 HCl 电解质溶液:背景电解质(20 mM HCl)、出口电解质(5 mM HCl)和终止电解质(0.05 mM HCl)
    1. 在 100 mL 容量瓶中配制 20 mM HCl:用移液器吸取 2 mL 1 M HCl 加入容量瓶中,用超纯水定容至刻度线,轻轻摇匀。
    2. 在 100 mL 容量瓶中配制 5 mM HCl:用移液器吸取 500 µL 1 M HCl 加入容量瓶中,用超纯水定容至刻度线,轻轻摇匀。
    3. 分两步配制 0.05 mM HCl:先用移液器吸取 1 mL 20 mM HCl 加入 100 mL 容量瓶中,用超纯水定容至刻度线,轻轻摇匀;随后,用移液器吸取 2.5 mL 上述溶液至 15 mL 锥形管(材料表)中,加入 7.5 mL 超纯水,再轻轻摇匀。
  2. 在 15 mL 锥形管中配制前导电解质 12% TMAH:用移液器吸取 4.8 mL 25% TMAH 加入锥形管中,加入 5.2 mL 超纯水,轻轻摇匀。
    注意:12% TMAH 用于每次运行前冲洗和清洗毛细管,并作为样品注入前方的前导电解质。

2. 标准品与样品的制备及保存

  1. 标准溶液
    1. 对于 Fe(II),称取 35.61 mg Fe(II)Cl2·4H2O 置于 100 mL 容量瓶中,用超纯水定容至 100 mL,得到 100 mg Fe(II)/L 的储备液。轻轻摇动至完全溶解。
    2. 对于 Fe(III),称取 29.04 mg Fe(III)Cl3 置于 100 mL 容量瓶中,用超纯水定容至 100 mL,得到 100 mg Fe(III)/L 的储备液。轻轻摇动至完全溶解。
    3. 根据 表 1 将每种标准储备液稀释,以制备工作标准溶液。
      注意:从 100 mg/L 储备液配制每日使用的储备液后,原储备液必须冷冻保存。根据 表 1 配制每日标准溶液后,应将 1 mg/L 储备液分装为每管 1.5 mL,并在 1.5 mL 离心管中冷冻保存(最好顶部不留空气)。每天使用时,取出一管解冻用于配制当日标准溶液,使用后立即弃去剩余溶液。
起始浓度移液体积用 Milli-Q 水定容至最终浓度终体积溶液用途
100 mg/L50 µL4950 µL1 mg/L50 mL每日工作储备液
1 mg/L200 µL1800 µL100 µg/L2 mL标准品
100 µg/L
1 mg/L100 µL1900 µL50 µg/L2 mL标准品
50 µg/L
1 mg/L50 µL1950 µL25 µg/L2 mL标准品
25 µg/L
1 mg/L25 µL1975µL12.5µg/L2 mL标准品
12.5 µg/l
1 mg/L20 µL1980µL10 µg/L2 mL标准品
10 µg/L
02000 µL0 µg/L2 mL空白

表1:配制标准品的移液方案。

  1. SH-SY5Y 细胞裂解液
    注意:细胞裂解液(SH-SY5Y)作为与 Fe(II)/(III) 相关的生物基质,用于展示该方法的性能与可靠性。
    1. 使用先前实验中制备的裂解液16。按照以下方法制备细胞裂解液,避免 pH 变化或可能影响氧化还原平衡的化学物质。使用改良的放射免疫沉淀分析(RIPA)裂解缓冲液(PBS pH 7.4,0.5% 脱氧胆酸钠,1% NP-40),避免使用金属螯合剂(如 EDTA)、还原剂(如 DTT、2-巯基乙醇)、阴离子表面活性剂和金属络合剂(如 SDS),以尽量减少采集后 Fe(II)/Fe(III) 比例的改变。
    2. 在 N2 气氛下操作,以抑制环境空气中 O2 引起的氧化,并在冰上操作以尽量减少自氧化,裂解液应尽快在氮气氛围下于 -80 °C 保存。

3. 设置毛细管电泳与电感耦合等离子体质谱联用仪器

  1. 安装毛细管电泳仪器。
    注意:本节内容主要参考实验室中可用的相应仪器使用手册。
    1. 安装一根长度合适的毛细管,使其从CE仪器的进样小瓶端延伸至ICP-MS的雾化器端。仅在进样端安装毛细管,并将其从仪器内部引出,朝向CE-ICP-MS接口方向布设。
      注意:在本方案中,为实现CE与ICP-MS联用,根据通用仪器配置说明安装了一根90 cm长的熔融石英毛细管(内径50 µm)。通常所需毛细管长度为70−100 cm,具体取决于仪器在实验室中的相对位置。
    2. 在仪器软件中关闭CE仪器出口端的抬升装置,以确保运行顺畅,因为当毛细管引出至CE-ICP-MS接口时该部件不使用。
    3. 从CE仪器的触发输出端(trigger-OUT)连接一根触发电缆至ICP-MS仪器的触发输入端(trigger-IN)。
    4. 在仪器样品与溶液转子中选择所有必要溶液(20 mM HCl、0.05 mM HCl、12% TMAH)、标准品和样品的位置,并在仪器软件中定义其位置(参见仪器手册)。
    5. 将转子和毛细管的温度均设定为20 °C,与实验室控制温度保持一致。
      注意:CE仪器内外毛细管部分之间不会产生温度梯度。
  2. 设置ICP-MS仪器
    1. 根据日常仪器标准设置和操作程序优化ICP-MS仪器,采用制造商提供的协议。
    2. 使用动态反应池(DRC)技术,以NH3作为DRC气体,NH3流速为0.6 mL/min,RPq值设为0.45。
      注意:针对铁形态分析,方法中设定监测56Fe(其为最丰富的铁同位素,相对丰度91.754%),但该同位素会受到[40Ar16O]+簇离子的严重干扰。在标准模式下,四极杆ICP-MS对此同位素几乎无响应,探测器处于溢出状态。采用上述设置(见步骤3.2.2)可实现低背景信号和高灵敏度(常规总铁测定的检出限可达低ng/L范围)。
    3. 设定每个同位素的驻留时间为50 ms,以便在CE分离过程中监测到尖锐且持续时间短的峰。
    4. 将ICP-MS方法编程为由CE仪器触发启动。
  3. 设置CE-ICP-MS接口
    注意:将CE毛细管连接至ICP-MS主要有两种方式。若使用商用接口,请遵循其提供的安装说明。本方案采用一种基于先前文献经修改后的简易自制接口20。关键要点包括:实现高效雾化,尽可能减少毛细管流出液的稀释,同时将总体流速适配至雾化器的最佳工作条件;此外,必须尽量减少雾化器自吸作用在分离毛细管中引起的抽吸流,并确保接地出口电极与毛细管末端之间的电连接。
    1. 雾化器的选择
      1. 选用自吸体积低(例如100 µL/min)且适用于低体积雾化室的同心雾化器。
        注意:低吸入量可使毛细管流出液稀释程度最小化,同时仍保持优化的雾化效率。出口电极的电连接通过电解质流经出口电极及毛细管末端实现。
      2. 利用雾化器的自吸作用,以最小化分离毛细管中的抽吸流,并将流速调节至雾化器所需的最佳值。
      3. 准备表2中列出的以下部件,用于组装该自制接口。
    2. 简易接口的组装
      注意:请参考图1中的示意图,结合以下文字描述进行部件安装。文中提及的编号与图1表2中的编号相对应。
      1. 开始组装接口:将两个三通雌性鲁尔接头(编号3)通过一个雄性圆锥鲁尔接头(编号4)连接。将下方三通鲁尔接头的左端与雄性接头相连,再将该雄性接头连接至上侧三通鲁尔接头的中间接口。
      2. 将一段1 cm长的管子(编号1)套在铂丝(编号7)上,再将一段1 cm长的硅胶管(编号5)套在铂丝及雄性鲁尔接头(编号2)的喷嘴上。通过鲁尔接头典型的旋转拧紧方式,将整个组件固定在下方三通鲁尔接头(编号3)的中间接口上。
      3. 将一段1 cm长的管子(编号1)套在CE毛细管的出口端,并将其定位在距末端约8–9 cm处。
      4. 将一段1 cm长的硅胶管(编号5)套在上述管子及雄性鲁尔接头(编号2)的喷嘴上。
      5. 将整个组件从左侧穿过上方三通T型接头的横杆,并通过鲁尔接头典型的旋转拧紧方式,将雄性鲁尔接头和雌性三通鲁尔接头(编号3)的左端固定。
      6. 将一段25 cm长的硅胶管(编号5)连接至雄性鲁尔接头(编号2)的喷嘴,并通过鲁尔接头典型的旋转拧紧方式,将整个组件固定在下方三通鲁尔接头(编号3)横杆的右端。
      7. 取一段1 cm长的硅胶管(编号6),将其紧密地推入雾化器末端约5 mm,同时将第二个雄性圆锥鲁尔接头(编号4)紧密插入硅胶管的突出部分。
      8. 将已组装好的接口部分连同伸出的CE毛细管,逐步移向雾化器端的雄性圆锥接头。小心地将CE毛细管穿过雄性圆锥接头,再穿过雾化器毛细管较宽的部分,直至其变窄处。若毛细管伸出长度选择合适,上方的雌性三通鲁尔接头此时也应能紧密贴合雄性圆锥接头。
      9. 如有必要,可通过在毛细管进入自制接口处的管子(编号1)上前后移动毛细管,调整其伸出长度。
        注意:CE毛细管在雾化器毛细管起始位置的最优定位并不十分敏感。但切勿将CE毛细管推得过近至雾化器毛细管的狭窄部分,否则可能阻碍或阻塞电解质流出,中断与出口电极的电连接,并增加CE毛细管内的抽吸作用,导致分离过程受扰。反之,也不应使CE毛细管末端离雾化器毛细管过远,否则会导致分离峰展宽,分辨率下降。
      10. 使用放大镜确定最佳位置。
        注意:图1(右下角)展示了CE毛细管在雾化器内部的最佳位置。

CE-ICP-MS 接口示意图,显示雾化器、喷雾室、电解液流和毛细管位置。
图1:CE-ICP-MS 接口的示意图与安装方式。该示意图标识了简单且低成本的 CE-ICP-MS 接口各部件的逐步安装位置。插图显示了毛细管在雾化器中最佳定位的照片。请点击此处查看此图的放大版本。

编号部件用途
1导管(绿色-橙色色码),2 × 约 1 cm用于将毛细管电泳(CE)毛细管和出口电极固定在鲁尔接头部件上并保持密封
2鲁尔接头,公头,3 ×,适用于内径 1.6 mm 硅胶管连接硅胶管至出口电解液,并辅助固定毛细管电泳(CE)毛细管和铂丝电极
3三通鲁尔接头,母头,2 ×作为 T 型接头,连接电极、毛细管和抽吸式出口流路
4鲁尔锥形接头,公头,2 ×将母头鲁尔接头相互连接,并连接至雾化器
5硅胶管,内径 1.6 mm,壁厚 0.8 mm,2 × 1 cm,1 × 约 25 cma)      1 cm;用于将毛细管电泳(CE)毛细管紧固至接口,
b)      1 cm;用于将铂丝电极紧固至接口
c)      25 cm;用于从出口电解液瓶连接至接口
6硅胶管,内径 3 mm,壁厚 1.2 mm,约 1 cm用于将鲁尔锥形接头紧固至雾化器
7铂丝出口电极

表2:用于构建简易自制CE-ICP-MS接口的部件。 表中编号对应图1及文中相应描述。

4. 测量前准备

注意:测量前,应使用强碱性溶液(此处为12% TMAH)冲洗毛细管以进行清洁,然后用背景电解质溶液填充。为了提高分离效果,基于电导率和pH梯度在样品周围构建堆叠缓冲层夹心结构。表3总结了毛细管的连续制备步骤,这些步骤由仪器根据预设方法自动完成:

步骤编号步骤化学物质条件
 CE 柱的制备
Prep 1毛细管清洗12 % TMAH4 bar, 1 min.
Prep 2用背景电解质冲洗毛细管20 mM HCl4 bar, 1 min.
Prep 3堆积:前导电解质12 % TMAH150 mbar, 3 s
Prep 4进样Sample150 mbar, 3 s
Prep 5堆积:终止电解质0.05 mM HCl150 mbar, 3 s

表3:测量前毛细管的制备步骤。 这些步骤通过毛细管电泳系统软件在电泳方法中进行编程,包括加压进样以及在样品周围形成“堆叠三明治”结构。

  1. 在毛细管电泳仪中设置一个方法,依次执行 表3 中列出的步骤。
  2. 在毛细管电泳软件中定义样品表和运行序列,并将该序列同样复制到ICP-MS软件中。

5. 测量与数据评估

  1. 在毛细管电泳(CE)仪器上开始该方法。当装有 20 mM HCl 的进样小瓶置于毛细管进样端并完成程序设定的毛细管预处理和填充后,测量将自动开始。此时向电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)发送“启动触发”信号,ICP-MS 随即开始在线监测铁同位素。
    注意:分离过程采用 +25 kV 的电压。由于连接 CE 仪器与 ICP-MS 所需的毛细管较长,导致分离时间不必要地延长。因此,在进样端施加 250 mbar 的低压以辅助分离。毛细管出口端自吸的电解质为 5 mM HCl。对于电导率中等的样品,总分析时间为 3 分钟。在运行过程中,可在 ICP-MS 软件的信号窗口中实时观察电泳图。每个样品分析结束后,系统将自动生成两个数据文件:一个仅可通过仪器软件从内部数据库访问,另一个以“.xl”或“.txt”格式保存在导出文件夹中,可通过常规色谱软件的导入功能读取。
  2. 有关将文件导出至色谱软件的操作,请参阅 ICP-MS 仪器的软件使用手册。

结果

标准品测定与校准
通过单次进样标准品确定迁移时间:Fe(III) 标准品的迁移时间为 118 秒,Fe(II) 标准品的迁移时间为 136 秒。检出限根据基线噪声采用 3σ 法则计算,参照标准浓度为 50 µg/L。Fe(II) 的检出限(LOD(Fe(II))为 3.1 µg/L,Fe(III) 的检出限(LOD(Fe(III))为 3.2 µg/L。两种铁形态的峰面积校准曲线在检出限至 150 µg/L 范围内均呈线性。尽管 Fe(III) 的线性在更高浓度下仍得到验证,但 Fe(II) 的校准曲线斜率有所下降。考虑到与 Fe(II)/(III) 测定相关的生物样品中铁的浓度通常较低,因此将 150 µg/L 作为上限浓度已足够。若样品浓度更高,可进行相应稀释。峰高校准在浓度高达 600 µg/L 范围内进行了验证,在整个测试范围内均表现出良好的线性关系。结果如图 2所示。

Fe(III) 和 Fe(II) 浓度与峰高的校准曲线;线性回归图。
图 2:Fe(III) 和 Fe(II) 的校准曲线(峰高)。 两种铁氧化还原态的峰高相关校准曲线呈线性,斜率约为 161 *X 请点击此处查看此图的放大版本。

SH-SY5Y 细胞裂解液分析
对 SH-SY5Y 细胞裂解液的分析显示,由于电导率略高,铁氧化还原物种的迁移速度稍慢。Fe(III) 的迁移时间监测为 124 秒,Fe(II) 为 158 秒。在 SH-SY5Y 细胞裂解液中,Fe(III) 迁移时间的精密度为 2%,Fe(II) 为 3%。采用该方法进行的 Fe(II) 和 Fe(III) 定量测定结果显示,Fe(III) 浓度为 330 µg/L,Fe(II) 浓度为 84 µg/L,由此计算得到的 Fe(II)/Fe(III) 比值为 0.25。56Fe 选择性电泳图谱见图 3

电泳结果;显示SH-SY5Y细胞裂解液中Fe(III)和Fe(II)随迁移时间变化的峰图。
图3:SH-SY5Y细胞裂解液的56Fe特异性电泳图谱。 Fe(III)在123 s时被检测到,峰高为58025 cps,与158 s时的Fe(II)峰(峰高22800 cps)明显分离。请点击此处查看此图的放大版本。

讨论

由于铁在氧化应激(OS)进展中起重要作用,从而促进线粒体功能障碍或铁死亡(FTP),本文介绍了一种基于毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱(CE-ICP-MS)的多功能定量方法,可同时实现Fe(II)/Fe(III)的形态分析,并以细胞裂解液为例展示了其应用。该方法分析时间短,其分析性能指标(定量限、精密度、回收率)适用于神经退行性疾病和癌症研究中与铁氧化还原形态分析相关的样品。与基于液相色谱(LC)的先前方法相比,该基于CE的方法实际上不受色谱柱批次影响,也避免了LC色谱柱更换后 previously observed reproducibility problems。每次运行前的毛细管预处理是 <每份样品分析时间约为4分钟,中等盐浓度下可缩短至3分钟。除了分子电荷和大小外,毛细管区带电泳(CZE)中的迁移时间还取决于样品塞内的电导率;当样品本身显著影响电导率时,会导致迁移时间变化或偏移。此类迁移时间偏移在毛细管电泳中已有明确认识,属于CZE固有现象,文献中已有广泛报道。21,22标准品和 SH-SY5Y 细胞裂解液具有中等且均匀的导电性,因此迁移时间变化较小,精密度良好。然而,对于导电性较高的样品,迁移时间可能延长,最长可达 5 分钟。因此,建议采用标准加入法以实现明确的物种鉴定。

铁氧化还原形态分析中的一个关键问题是样品制备过程中形态的稳定性(即 Fe(II)/(III) 平衡的维持)8,13。不合适的 pH 值或螯合化学物质,以及不适当的储存条件(例如样品接触氧气(空气)或深冻储存过程中断),都可能轻易改变 Fe(II)/(III) 的平衡。因此,在制备 SH-SY5Y 细胞裂解液时,选择了一种不含任何螯合化学物质、具有生理 pH 值的裂解缓冲液,并在样品制备过程中及样品容器中覆盖惰性气体,同时立即进行深冻保存。

在文献中,可以找到一些用于监测 Fe(II) 的半定量方法。为了更深入地理解铁在氧化应激中的作用,多个研究团队开发了针对 Fe(II) 的特异性探针,用于在体外半定量监测和可视化亚铁离子的异常升高。然而需要注意的是,这些探针不考虑 Fe(III),也无法实现定量,仅能报告 Fe(II) 的“增多”或“减少”。迄今为止,可用于测定氧化应激(OS)和铁池总量(FPT)的生物标志物仍然有限,这主要是由于缺乏可靠的方法来同时定量 Fe(II) 和 Fe(III) 这两种氧化还原态的铁23,24。鉴于这一现状,本文所介绍的方法能够在一次运行中快速定量 Fe(III) 和 Fe(II),有望成为深入研究铁依赖性分子过程的有力工具。

披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

VV 获得了哥廷根大学医学中心内部研究资助(Forschungsförderung)以及 Else Kröner-Fresenius 基金会 Else Kröner 研究项目的资助。

材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
毛细管电泳毛细管CS-Chromatographie Service, Langerwehe, Germany105180-25
毛细管电泳系统PrinCe technolgies0005.263型号 PrinCe 760
15 ml 圆锥形超透明离心管Analytics-shop.com by Altmann AnalytikPEN0777704
50 ml 圆锥形超透明离心管Analytics-shop.com by Altmann AnalytikPEN0777694
FeCl2 * 4H2OMerck103861
FeCl3Merck803945
Fluidflex 硅胶 HG 软管ProLiquid4001106HG
熔融石英毛细管,外径 360 µm,内径 50 µmChromatographie Service GmbH105180-25
盐酸,1 MMerck1101652500腐蚀性
ICP-MSPerkin ElmerN814003
鲁尔接头,三通雌性BioRad7318229
鲁尔接头,锥形雄性neoLab Migge2-1895
鲁尔接头,雄性neoLab Migge2-1880
Peakfit 峰形分析软件SystatPeakFit 4.12
铂丝Carl Roth0737.1
PVC 软管ProLiquid6000002
RIPA 缓冲液Abcamab156034
四甲基氢氧化铵,25 %Merck814748腐蚀性
TYGON R-3607 软管ProLiquid3700203A

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