已对以下文章发布更正： 用于蛋白质纯化的聚五氟苯基丙烯酸酯功能化 SiO2 微球的制备。 在全文中，术语 "3-aminopropyltriethoxysilane" 已更正为 "3-aminopropyltrimethoxysilane"，同时将 "APTES" 更正为 "APTMS"。
勘误：用于蛋白质纯化的聚(五氟苯基丙烯酸酯)功能化 SiO2 微球的制备
本文内容
摘要
摘要
已发布更正： 用于蛋白质纯化的聚五氟苯基丙烯酸酯功能化SiO2微球的制备。在整篇文章中，“3-aminopropyltriethoxysilane”已更正为“3-aminopropyltrimethoxysilane”，“APTES”已更正为“APTMS”。
关键词已从以下内容更新：
聚五氟苯基丙烯酸酯，3-氨丙基三乙氧基硅烷，活性聚合物刷，聚合后功能化，抗体固定化，免疫沉淀
至：
聚五氟苯基丙烯酸酯，3-氨基丙基三甲氧基硅烷，活性聚合物刷，聚合后功能化，抗体固定化，免疫沉淀
摘要已从以下内容更新：
我们展示了一种简单的方法，用于制备聚五氟苯基丙烯酸酯（poly(PFPA)）接枝的二氧化硅微球，以实现抗体固定化并进一步应用于免疫沉淀（IP）。poly(PFPA)接枝表面通过一个简单的两步法构建。第一步，将3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APTES）作为连接分子沉积在二氧化硅表面。第二步，通过可逆加成-断裂链转移（RAFT）聚合合成的poly(PFPA)均聚物，通过聚合物上的五氟苯基（PFP）单元与APTES上的氨基之间的交换反应，接枝到连接分子上。通过X射线光电子能谱（XPS）确认APTES和poly(PFPA)在二氧化硅颗粒上的沉积，并通过动态光散射（DLS）测量颗粒尺寸变化进行监测。为了提高微球表面的亲水性，还进行了部分聚(PFPA)与氨基功能化的聚乙二醇（amino-PEG）的取代反应。随后，将PEG取代的poly(PFPA)接枝二氧化硅微球用于抗体的固定化，以进行IP应用。作为示例，采用针对RNA激活蛋白激酶（PKR）的抗体，并通过Western blotting测定IP效率。分析结果表明，固定化抗体的微球确实可用于富集PKR，同时非特异性蛋白相互作用极低。
至：
我们展示了一种简便的方法，用于制备聚五氟苯基丙烯酸酯（poly(PFPA)）接枝的二氧化硅微球，以实现抗体固定化并进一步应用于免疫沉淀（IP）。poly(PFPA)接枝表面通过一个简单的两步法构建。第一步，将3-氨基丙基三甲氧基硅烷（APTMS）作为连接分子沉积在二氧化硅表面。第二步，通过可逆加成-断裂链转移（RAFT）聚合合成的poly(PFPA)均聚物，通过聚合物上的五氟苯基（PFP）单元与APTMS上的氨基之间的交换反应，接枝到连接分子上。通过X射线光电子能谱（XPS）确认APTMS和poly(PFPA)在二氧化硅颗粒上的沉积，并结合动态光散射（DLS）测量的颗粒尺寸变化进行监测。为了提高微球表面的亲水性，还进行了部分氨基功能化聚乙二醇（amino-PEG）对poly(PFPA)的取代。随后，将PEG取代的poly(PFPA)接枝二氧化硅微球用于抗体的固定化，以进行IP应用。作为示例，采用抗蛋白激酶RNA激活型（PKR）抗体，并通过Western blotting测定IP效率。分析结果表明，固定化抗体的微球确实可用于富集PKR，同时非特异性蛋白相互作用极低。
引言部分的第四段已更新，原文为：
本文介绍了一种用于抗体固定化及免疫沉淀（IP）应用的聚(PFPA)接枝表面的替代制备方法。如图1所示，该方法为简单的两步过程：首先将APTES连接分子沉积到二氧化硅表面，随后通过聚合物上的PFP单元与APTES上的氨基之间的反应，将聚(PFPA)聚合物共价连接至连接分子上。该制备方法可实现聚(PFPA)与基底表面的永久交联，同时避免了聚(PFPA)刷状聚合物的SI-CTA合成及SI-RAFT聚合过程中相关的诸多复杂问题。此外，仍可对部分PFP单元进行氨基-PEG取代，从而精确调控聚合物刷表面的性质。本文展示了采用该方法制备的聚(PFPA)接枝二氧化硅微球可用于抗体的固定化，并通过IP实现蛋白质富集。文中详细记录了微球制备、抗体固定化及IP检测的具体步骤，为希望寻找传统Protein A/G依赖性IP方法替代方案的读者提供参考。
至：
本文介绍了一种用于抗体固定化及免疫沉淀（IP）应用的聚(PFPA)接枝表面的替代制备方法。如图1所示，该方法为简单的两步过程：首先将APTMS连接分子沉积到二氧化硅表面，随后通过聚合物上的PFP单元与APTMS上的氨基之间的反应，将聚(PFPA)聚合物共价连接至连接分子上。该制备方法可实现聚(PFPA)与基底表面的永久交联，同时避免了聚(PFPA)刷状聚合物的SI-CTA合成及SI-RAFT聚合过程中相关的诸多复杂问题。此外，仍可对部分PFP单元进行氨基-PEG取代，从而精确调控聚合物刷表面的性质。我们证明，采用该方法制备的聚(PFPA)接枝二氧化硅微球可用于抗体的固定化，并通过IP实现蛋白质富集。本文详细记录了微球制备、抗体固定化及IP检测的完整流程，为希望寻求传统Protein A/G依赖性IP方法替代方案的读者提供参考。
方案第 2.1 步已更新，原内容为：
用APTES处理SiO2微珠
至：
用 APTMS 处理 SiO2 微珠
方案第 2.1.1 步已从以下内容更新：
SiO2 颗粒以5%（w/v）的水悬浮液形式提供。取0.8 mL SiO2 悬浮液，加入40 mg APTES和8 mL甲醇，置于装有搅拌子的20 mL闪烁瓶中混合。
至：
SiO2 颗粒以5% (w/v) 的水悬浮液形式提供。取0.8 mL SiO2 悬浮液，加入40 mg APTMS和8 mL甲醇，置于装有搅拌子的20 mL闪烁瓶中混合。
方案第 2.1.3 步已从以下内容更新：
将溶液转移至锥形管中。为分离APTES功能化的SiO2微球，以10,000 × g离心5分钟，随后弃去上清液。用3 mL新鲜甲醇重新分散微球以洗涤。用手轻轻振荡管子以混匀，必要时可在水浴中超声数秒以改善分散效果。再次以10,000 × g离心5分钟，弃去上清液，并重复洗涤步骤一次。
至：
将溶液转移至锥形管中。为分离APTMS功能化的SiO2微球，将溶液在10,000 × g离心5分钟，然后弃去上清液。用3 mL新鲜甲醇重新分散微球以洗涤。用手轻轻振荡管子以混匀，必要时可在水浴中超声数秒以改善分散效果。再次在10,000 × g离心5分钟。弃去上清液，并重复洗涤步骤一次。
将方案的第 2.1.4 步更新为：
将甲醇洗涤后的 SiO2 微球与 3 mL 二甲基亚砜（DMSO）混合。手动振荡混合物，或必要时超声数秒，直至微球在 DMSO 中完全分散。在 10,000 × g 条件下离心 5 分钟，然后移除上清液。重复该步骤，以确保溶剂从甲醇完全置换为 DMSO。
注：最终悬浮液含有在 4 mL DMSO 中分散的 APTMS 功能化 SiO2 微球。
修改为：
将甲醇洗涤后的 SiO2 微球与 3 mL 二甲基亚砜（DMSO）混合。手动振荡混合物，或必要时超声数秒，直至微球在 DMSO 中完全分散。在 10,000 × g 条件下离心 5 分钟，然后移除上清液。重复该步骤，以确保溶剂从甲醇完全置换为 DMSO。
注：最终悬浮液含有在 4 mL DMSO 中分散的 APTMS 功能化 SiO2 微球。
方案第 2.2 步由：
将聚(PFPA)接枝至 APTES 功能化的 SiO2 微球
修改为：
将聚(PFPA)接枝至 APTMS 功能化的 SiO2 微球
方案第 2.2.2 步由：
取 1 mL 以 DMSO 悬浮的 APTES 功能化 SiO2 微球（来自步骤 2.1.4），加入聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌反应 1 小时。
修改为：
取 1 mL 以 DMSO 悬浮的 APTMS 功能化 SiO2 微球（来自步骤 2.1.4），加入聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌反应 1 小时。
方案第 3.4 步由：
为制备悬浮于 DMSO 中的 APTES 功能化 SiO2 微球，请遵循步骤 2.1 中所示的相同操作。将 1 mL 微球悬浮液转移至步骤 3.3 中制备的 PEG 取代聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌 1 小时，使聚(PFPA) 与 APTES 功能化 SiO2 微球之间的接枝反应进行。
修改为：
为制备悬浮于 DMSO 中的 APTMS 功能化 SiO2 微球，请遵循步骤 2.1 中所示的相同操作。将 1 mL 微球悬浮液转移至步骤 3.3 中制备的 PEG 取代聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌 1 小时，使聚(PFPA) 与 APTMS 功能化 SiO2 微球之间的接枝反应进行。
代表性结果部分的第一段由：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的制备示意图，包括含或不含 PEG 取代的情况。为监测 APTES 和聚(PFPA) 的接枝过程，采用动态光散射（DLS）（图 2）和 X 射线光电子能谱（XPS）（图 3）对裸 SiO2 微球、APTES 功能化 SiO2 微球以及聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球进行表征。微球的免疫沉淀（IP）效率通过蛋白质印迹法（Western blotting）测定。图 4 显示了使用 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的蛋白质印迹结果，其中微球分别与无抗体、非特异性抗体或抗 PKR 抗体孵育。图 5 显示了使用 0% 和 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的蛋白质印迹结果，两种微球均与抗 PKR 抗体孵育。
修改为：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的制备示意图，包括含或不含 PEG 取代的情况。为监测 APTMS 和聚(PFPA) 的接枝过程，采用动态光散射（DLS）（图 2）和 X 射线光电子能谱（XPS）（图 3）对裸 SiO2 微球、APTMS 功能化 SiO2 微球以及聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球进行表征。微球的免疫沉淀（IP）效率通过蛋白质印迹法（Western blotting）测定。图 4 显示了使用 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的蛋白质印迹结果，其中微球分别与无抗体、非特异性抗体或抗 PKR 抗体孵育。图 5 显示了使用 0% 和 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的蛋白质印迹结果，两种微球均与抗 PKR 抗体孵育。
图 1 由：
图 1：使用 APTES 作为连接分子制备聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的示意图。（a）聚(PFPA) 接枝微球。（b）部分 PEG 取代的聚(PFPA) 接枝微球。
修改为：
图 1：使用 APTMS 作为连接分子制备聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的示意图。（a）聚(PFPA) 接枝微球。（b）部分 PEG 取代的聚(PFPA) 接枝微球。
图 2 由：
图 2：在 DMSO 中分散的（a）裸 SiO2 微球（SiO2）、（b）APTES 功能化 SiO2 微球（APTES-SiO2）和（c）聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 DLS 测量结果。 每个样品的 Z 平均直径（d）和多分散指数（PDI）均已列出。
修改为：
图 2：在 DMSO 中分散的（a）裸 SiO2 微球（SiO2）、（b）APTMS 功能化 SiO2 微球（APTMS-SiO2）和（c）聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 DLS 测量结果。 每个样品的 Z 平均直径（d）和多分散指数（PDI）均已列出。
图 3 由：
图 3：裸 SiO2 微球（SiO2）、APTES 功能化 SiO2 微球（APTES-SiO2）和聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 XPS 谱图。 所分析的峰对应于（a）Si 2p、（b）O 1s、（c）N 1s 和（d）F 1s。
修改为：
图 3：裸 SiO2 微球（SiO2）、APTMS 功能化 SiO2 微球（APTMS-SiO2）和聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 XPS 谱图。 所分析的峰对应于（a）Si 2p、（b）O 1s、（c）N 1s 和（d）F 1s。
讨论部分的第一和第二段由：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的合成过程。通过使用 APTES 作为连接分子，可通过简单的两步法在 SiO2 基底上共价接枝聚(PFPA) 刷。尽管部分 PFP 单元在与 APTES 反应中被消耗，但大量 PFP 单元仍预期可用于后续与氨基-PEG 或抗体的反应。已知 PFP 基团会形成低能表面，因此聚(PFPA) 刷在水中溶剂化能力较差28。在免疫沉淀（IP）应用中，抗体需固定在聚(PFPA) 刷上，该交换反应在水性缓冲溶液中进行，以保持抗体的活性。如我们先前发表的研究所述，用胺基功能化的 PEG 等亲水分子部分取代 PFP 单元可提高表面亲水性，从而提高抗体固定效率18。在本研究中，也制备了部分 PEG 取代的聚(PFPA)，然后使用相同的 APTES 连接分子将其接枝到 SiO2 表面。总体而言，图 1 所示的方法可制备具有不同 PEG 取代程度的聚(PFPA) 接枝表面。这些具有可调表面性质的聚合物刷为抗体固定及后续的 IP 应用提供了理想平台。
微球的制备过程通过 DLS 和 XPS 进行监测。图 2 总结了 DMSO 中各种功能化 SiO2 微球的 DLS 结果。裸 SiO2 微球的流体力学直径为 666 nm，与制造商报告的微球尺寸（0.676 μm；SD = 0.03 μm）一致。经 APTES 处理后，微球直径增至 740 nm；经聚(PFPA) 处理后，微球直径进一步增至 1889 nm。需要指出的是，聚(PFPA) 接枝微球的多分散指数（PDI）较大（PDI = 0.76），表明样品质量较差，含有大量聚集体。尽管 DLS 曲线仅显示一个纳米级峰，但悬浮液中可能存在少量聚集体。还通过 XPS 检测功能化 SiO2 微球以确定其表面组成（图 3）。经 APTES 处理后，检测到与 APTES 上的氨基相关的 N 1s 峰；经聚(PFPA) 处理后，检测到与聚合物上 PFP 单元相关的 F 1s 峰。这些数据共同表明 SiO2 表面成功实现了功能化，即先接枝 APTES，再接枝聚(PFPA)。
修改为：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的合成过程。通过使用 APTMS 作为连接分子，可通过简单的两步法在 SiO2 基底上共价接枝聚(PFPA) 刷。尽管部分 PFP 单元在与 APTMS 反应中被消耗，但大量 PFP 单元仍预期可用于后续与氨基-PEG 或抗体的反应。已知 PFP 基团会形成低能表面，因此聚(PFPA) 刷在水中溶剂化能力较差28。在免疫沉淀（IP）应用中，抗体需固定在聚(PFPA) 刷上，该交换反应在水性缓冲溶液中进行，以保持抗体的活性。如我们先前发表的研究所述，用胺基功能化的 PEG 等亲水分子部分取代 PFP 单元可提高表面亲水性，从而提高抗体固定效率18。在本研究中，也制备了部分 PEG 取代的聚(PFPA)，然后使用相同的 APTMS 连接分子将其接枝到 SiO2 表面。总体而言，图 1 所示的方法可制备具有不同 PEG 取代程度的聚(PFPA) 接枝表面。这些具有可调表面性质的聚合物刷为抗体固定及后续的 IP 应用提供了理想平台。
微球的制备过程通过 DLS 和 XPS 进行监测。图 2 总结了 DMSO 中各种功能化 SiO2 微球的 DLS 结果。裸 SiO2 微球的流体力学直径为 666 nm，与制造商报告的微球尺寸（0.676 μm；SD = 0.03 μm）一致。经 APTMS 处理后，微球直径增至 740 nm；经聚(PFPA) 处理后，微球直径进一步增至 1889 nm。需要指出的是，聚(PFPA) 接枝微球的多分散指数（PDI）较大（PDI = 0.76），表明样品质量较差，含有大量聚集体。尽管 DLS 曲线仅显示一个纳米级峰，但悬浮液中可能存在少量聚集体。还通过 XPS 检测功能化 SiO2 微球以确定其表面组成（图 3）。经 APTMS 处理后，检测到与 APTMS 上的氨基相关的 N 1s 峰；经聚(PFPA) 处理后，检测到与聚合物上 PFP 单元相关的 F 1s 峰。这些数据共同表明 SiO2 表面成功实现了功能化，即先接枝 APTMS，再接枝聚(PFPA)。
方案
已发布更正： 用于蛋白质纯化的聚五氟苯基丙烯酸酯功能化SiO2微球的制备。在整篇文章中，“3-aminopropyltriethoxysilane”已更正为“3-aminopropyltrimethoxysilane”，“APTES”已更正为“APTMS”。
关键词已从以下内容更新：
聚五氟苯基丙烯酸酯，3-氨基丙基三乙氧基硅烷，活性聚合物刷，聚合后功能化，抗体固定化，免疫沉淀
至：
聚五氟苯基丙烯酸酯，3-氨基丙基三甲氧基硅烷，活性聚合物刷，聚合后功能化，抗体固定化，免疫沉淀
摘要已从以下内容更新：
我们展示了一种简单的方法，用于制备聚五氟苯基丙烯酸酯（poly(PFPA)）接枝的二氧化硅微球，以实现抗体固定化并进一步应用于免疫沉淀（IP）。poly(PFPA)接枝表面通过一个简单的两步法构建。第一步，将3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APTES）作为连接分子沉积在二氧化硅表面。第二步，通过可逆加成-断裂链转移（RAFT）聚合合成的poly(PFPA)均聚物，通过聚合物上的五氟苯基（PFP）单元与APTES上的氨基之间的交换反应，接枝到连接分子上。通过X射线光电子能谱（XPS）确认APTES和poly(PFPA)在二氧化硅颗粒上的沉积，并通过动态光散射（DLS）测量颗粒尺寸变化进行监测。为了提高微球表面的亲水性，还进行了部分聚(PFPA)与氨基功能化的聚乙二醇（amino-PEG）的取代反应。随后，将PEG取代的poly(PFPA)接枝二氧化硅微球用于抗体的固定化，以进行IP应用。作为示例，采用针对RNA激活蛋白激酶（PKR）的抗体，并通过Western blotting测定IP效率。分析结果表明，固定化抗体的微球确实可用于富集PKR，同时非特异性蛋白相互作用极低。
至：
我们展示了一种简单的方法，用于制备聚（五氟苯基丙烯酸酯）（poly(PFPA)）接枝的二氧化硅微球，以实现抗体固定化并进一步应用于免疫沉淀（IP）。poly(PFPA)接枝表面通过一个简单的两步法构建。第一步，将3-氨基丙基三甲氧基硅烷（APTMS）作为连接分子沉积在二氧化硅表面。第二步，通过可逆加成-断裂链转移（RAFT）聚合合成的poly(PFPA)均聚物，通过聚合物上的五氟苯基（PFP）单元与APTMS上的氨基之间的交换反应，接枝到连接分子上。APTMS和poly(PFPA)在二氧化硅颗粒表面的沉积通过X射线光电子能谱（XPS）进行确认，并通过动态光散射（DLS）测量的颗粒尺寸变化进行监测。为了提高微球表面的亲水性，还进行了部分poly(PFPA)与氨基功能化的聚乙二醇（amino-PEG）的取代反应。随后，将PEG取代的poly(PFPA)接枝二氧化硅微球用于抗体的固定化，以进行IP应用。作为示例，采用针对RNA激活蛋白激酶（PKR）的抗体，并通过Western blotting测定IP效率。分析结果表明，固定化抗体的微球确实可用于富集PKR，同时非特异性蛋白相互作用极低。
引言部分的第四段已更新，原文为：
本文介绍了一种用于抗体固定化及免疫沉淀（IP）应用的聚(PFPA)接枝表面的替代制备方法。如图1所示，该方法为简单的两步过程：首先将APTES连接分子沉积到二氧化硅表面，随后通过聚合物上的PFP单元与APTES上的氨基之间的反应，将聚(PFPA)聚合物共价连接至连接分子上。该制备方法可实现聚(PFPA)与基底表面的永久交联，同时避免了聚(PFPA)刷状聚合物的SI-CTA合成及SI-RAFT聚合过程中相关的诸多复杂问题。此外，仍可对部分PFP单元进行氨基-PEG取代，从而精确调控聚合物刷表面的性质。本文展示了采用该方法制备的聚(PFPA)接枝二氧化硅微球可用于抗体的固定化，并通过IP实现蛋白质富集。文中详细记录了微球制备、抗体固定化及IP检测的具体步骤，为希望寻求传统Protein A/G依赖性IP方法替代方案的读者提供参考。
至：
本文介绍了一种用于抗体固定化及免疫沉淀（IP）应用的聚(PFPA)接枝表面的替代制备方法。如图1所示，该方法为简单的两步过程：首先将APTMS连接分子沉积到二氧化硅表面，随后通过聚合物上的PFP单元与APTMS上的氨基之间的反应，将聚(PFPA)聚合物共价连接至连接分子上。该制备方法可实现聚(PFPA)与基底表面的永久交联，同时避免了聚(PFPA)刷状聚合物的SI-CTA合成及SI-RAFT聚合过程中相关的诸多复杂问题。此外，仍可对部分PFP单元进行氨基-PEG取代，从而精确调控聚合物刷表面的性质。本文展示了采用该方法制备的聚(PFPA)接枝二氧化硅微球可用于抗体的固定化，并通过IP实现蛋白质富集。文中详细记录了微球制备、抗体固定化及IP检测的具体步骤，为希望寻找传统Protein A/G依赖性IP方法替代方案的读者提供参考。
方案第 2.1 步已从以下内容更新：
用 APTES 处理 SiO2 微珠
至：
用 APTMS 处理 SiO2 微珠
方案第 2.1.1 步已从以下内容更新：
SiO2 颗粒以5%（w/v）的水悬浮液形式提供。取0.8 mL SiO2 悬浮液，加入40 mg APTES和8 mL甲醇，置于装有搅拌子的20 mL闪烁瓶中混合。
至：
SiO2 颗粒以5% (w/v) 的水悬浮液形式提供。取0.8 mL SiO2 悬浮液，加入40 mg APTMS和8 mL甲醇，置于装有搅拌子的20 mL闪烁瓶中混合。
方案第 2.1.3 步已从以下内容更新：
将溶液转移至锥形管中。为分离APTES功能化的SiO2微球，以10,000 × g离心5分钟，随后弃去上清液。用3 mL新鲜甲醇重新分散微球以洗涤。用手轻轻振荡管子以混匀，必要时可在水浴中超声数秒以改善分散效果。再次以10,000 × g离心5分钟，弃去上清液，并重复洗涤步骤一次。
至：
将溶液转移至锥形管中。为分离APTMS功能化的SiO2微球，以10,000 × g离心5分钟，然后弃去上清液。用3 mL新鲜甲醇重新分散微球以洗涤。用手轻轻振荡管子以混匀，必要时可在水浴中超声数秒以改善分散效果。再次以10,000 × g离心5分钟。弃去上清液，并重复洗涤步骤一次。
将方案的第 2.1.4 步更新为：
将甲醇洗涤后的 SiO2 微球与 3 mL 二甲基亚砜（DMSO）混合。手动振荡混合物，或必要时超声数秒，直至微球在 DMSO 中完全分散。在 10,000 × g 条件下离心 5 分钟，然后弃去上清液。重复该步骤，以确保溶剂从甲醇完全置换为 DMSO。注：最终悬浮液含有在 4 mL DMSO 中分散的 APTMS 功能化 SiO2 微球。
修改为：
将甲醇洗涤后的 SiO2 微球与 3 mL 二甲基亚砜（DMSO）混合。手动振荡混合物，或必要时超声数秒，直至微球在 DMSO 中完全分散。在 10,000 × g 条件下离心 5 分钟，然后弃去上清液。重复该步骤，以确保溶剂从甲醇完全置换为 DMSO。
注：最终悬浮液含有在 4 mL DMSO 中分散的 APTMS 功能化 SiO2 微球。
方案第 2.2 步由：
将聚(PFPA)接枝至 APTES 功能化的 SiO2 微球
修改为：
将聚(PFPA)接枝至 APTMS 功能化的 SiO2 微球
方案第 2.2.2 步由：
取 1 mL 以 DMSO 悬浮的 APTES 功能化 SiO2 微球（来自步骤 2.1.4），加入聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌反应 1 小时。
修改为：
取 1 mL 以 DMSO 悬浮的 APTMS 功能化 SiO2 微球（来自步骤 2.1.4），加入聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌反应 1 小时。
方案第 3.4 步由：
为制备悬浮于 DMSO 中的 APTES 功能化 SiO2 微球，遵循步骤 2.1 所示的相同操作流程。将 1 mL 微球悬浮液转移至步骤 3.3 中制备的 PEG 取代聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌 1 小时，使聚(PFPA) 与 APTES 功能化 SiO2 微球之间的接枝反应进行。
修改为：
为制备悬浮于 DMSO 中的 APTMS 功能化 SiO2 微球，遵循步骤 2.1 所示的相同操作流程。将 1 mL 微球悬浮液转移至步骤 3.3 中制备的 PEG 取代聚(PFPA) 溶液中。在室温下剧烈搅拌 1 小时，使聚(PFPA) 与 APTMS 功能化 SiO2 微球之间的接枝反应进行。
代表性结果部分第一段由：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的制备示意图，包括含或不含 PEG 取代的情况。为监测 APTES 和聚(PFPA) 的接枝过程，采用动态光散射（DLS）（图 2）和 X 射线光电子能谱（XPS）（图 3）对裸 SiO2 微球、APTES 功能化 SiO2 微球以及聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球进行表征。微球的免疫沉淀（IP）效率通过 Western 印迹法测定。图 4 显示了使用 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的 Western 印迹结果，其中微球分别与无抗体、非特异性抗体或抗 PKR 抗体孵育。图 5 显示了使用 0% 和 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的 Western 印迹结果，两种微球均与抗 PKR 抗体孵育。
修改为：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的制备示意图，包括含或不含 PEG 取代的情况。为监测 APTMS 和聚(PFPA) 的接枝过程，采用动态光散射（DLS）（图 2）和 X 射线光电子能谱（XPS）（图 3）对裸 SiO2 微球、APTMS 功能化 SiO2 微球以及聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球进行表征。微球的免疫沉淀（IP）效率通过 Western 印迹法测定。图 4 显示了使用 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的 Western 印迹结果，其中微球分别与无抗体、非特异性抗体或抗 PKR 抗体孵育。图 5 显示了使用 0% 和 1% PEG 取代聚(PFPA) 接枝微球进行 IP 的 Western 印迹结果，两种微球均与抗 PKR 抗体孵育。
图 1 由：
图 1：使用 APTES 作为连接分子制备聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的示意图。（a）聚(PFPA) 接枝微球。（b）部分 PEG 取代的聚(PFPA) 接枝微球。
修改为：
图 1：使用 APTMS 作为连接分子制备聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的示意图。（a）聚(PFPA) 接枝微球。（b）部分 PEG 取代的聚(PFPA) 接枝微球。
图 2 由：
图 2：在 DMSO 中分散的（a）裸 SiO2 微球（SiO2）、（b）APTES 功能化 SiO2 微球（APTES-SiO2）和（c）聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 DLS 测量结果。 每个样品的 Z 平均直径（d）和多分散指数（PDI）均已列出。
修改为：
图 2：在 DMSO 中分散的（a）裸 SiO2 微球（SiO2）、（b）APTMS 功能化 SiO2 微球（APTMS-SiO2）和（c）聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 DLS 测量结果。 每个样品的 Z 平均直径（d）和多分散指数（PDI）均已列出。
图 3 由：
图 3：裸 SiO2 微球（SiO2）、APTES 功能化 SiO2 微球（APTES-SiO2）和聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 XPS 谱图。 所分析的峰对应于（a）Si 2p、（b）O 1s、（c）N 1s 和（d）F 1s。
修改为：
图 3：裸 SiO2 微球（SiO2）、APTMS 功能化 SiO2 微球（APTMS-SiO2）和聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球（poly(PFPA)-SiO2）的 XPS 谱图。 所分析的峰对应于（a）Si 2p、（b）O 1s、（c）N 1s 和（d）F 1s。
讨论部分第一、二段由：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的合成过程。通过使用 APTES 作为连接分子，可通过简单的两步法在 SiO2 基底上共价接枝聚(PFPA) 刷。尽管部分 PFP 单元在与 APTES 反应中被消耗，但大量 PFP 单元仍预期可用于后续与氨基-PEG 或抗体的反应。已知 PFP 基团会形成低能表面，因此聚(PFPA) 刷在水中溶剂化能力较差28。在免疫沉淀（IP）应用中，抗体需固定在聚(PFPA) 刷上，该交换反应在水性缓冲溶液中进行，以保持抗体活性。如我们先前发表的研究所述，用胺基功能化的 PEG 等亲水分子部分取代 PFP 单元可提高表面亲水性，从而提高抗体固定效率18。本研究中也制备了部分 PEG 取代的聚(PFPA)，然后使用相同的 APTES 连接分子将其接枝至 SiO2 表面。总体而言，图 1 所示的方法可制备具有不同 PEG 取代程度的聚(PFPA) 接枝表面。这些具有可调表面性质的聚合物刷为抗体固定及后续 IP 应用提供了理想平台。
微球的制备过程通过 DLS 和 XPS 进行监测。图 2 总结了 DMSO 中各种功能化 SiO2 微球的 DLS 结果。裸 SiO2 微球的流体动力学直径为 666 nm，与厂家提供的微球尺寸（0.676 μm；SD = 0.03 μm）一致。经 APTES 处理后，微球直径增至 740 nm；经聚(PFPA) 处理后，直径进一步增至 1889 nm。需要指出的是，聚(PFPA) 接枝微球的多分散指数（PDI）较大（PDI = 0.76），表明样品质量较差，含有大量聚集体。尽管 DLS 曲线仅显示一个纳米级峰，但悬浮液中可能存在少量聚集体。还通过 XPS 检测功能化 SiO2 微球以确定其表面组成（图 3）。经 APTES 处理后，检测到与 APTES 上氨基相关的 N 1s 峰；经聚(PFPA) 处理后，检测到与聚合物上 PFP 单元相关的 F 1s 峰。这些数据共同表明 SiO2 表面成功实现了功能化，即先接枝 APTES，再接枝聚(PFPA)。
修改为：
图 1 展示了聚(PFPA) 接枝 SiO2 微球的合成过程。通过使用 APTMS 作为连接分子，可通过简单的两步法在 SiO2 基底上共价接枝聚(PFPA) 刷。尽管部分 PFP 单元在与 APTMS 反应中被消耗，但大量 PFP 单元仍预期可用于后续与氨基-PEG 或抗体的反应。已知 PFP 基团会形成低能表面，因此聚(PFPA) 刷在水中溶剂化能力较差28。在免疫沉淀（IP）应用中，抗体需固定在聚(PFPA) 刷上，该交换反应在水性缓冲溶液中进行，以保持抗体活性。如我们先前发表的研究所述，用胺基功能化的 PEG 等亲水分子部分取代 PFP 单元可提高表面亲水性，从而提高抗体固定效率18。本研究中也制备了部分 PEG 取代的聚(PFPA)，然后使用相同的 APTMS 连接分子将其接枝至 SiO2 表面。总体而言，图 1 所示的方法可制备具有不同 PEG 取代程度的聚(PFPA) 接枝表面。这些具有可调表面性质的聚合物刷为抗体固定及后续 IP 应用提供了理想平台。
微球的制备过程通过 DLS 和 XPS 进行监测。图 2 总结了 DMSO 中各种功能化 SiO2 微球的 DLS 结果。裸 SiO2 微球的流体动力学直径为 666 nm，与厂家提供的微球尺寸（0.676 μm；SD = 0.03 μm）一致。经 APTMS 处理后，微球直径增至 740 nm；经聚(PFPA) 处理后，直径进一步增至 1889 nm。需要指出的是，聚(PFPA) 接枝微球的多分散指数（PDI）较大（PDI = 0.76），表明样品质量较差，含有大量聚集体。尽管 DLS 曲线仅显示一个纳米级峰，但悬浮液中可能存在少量聚集体。还通过 XPS 检测功能化 SiO2 微球以确定其表面组成（图 3）。经 APTMS 处理后，检测到与 APTMS 上氨基相关的 N 1s 峰；经聚(PFPA) 处理后，检测到与聚合物上 PFP 单元相关的 F 1s 峰。这些数据共同表明 SiO2 表面成功实现了功能化，即先接枝 APTMS，再接枝聚(PFPA)。