小鼠皮肤移植

摘要

同种异体皮肤移植是检测宿主T细胞对MHC不同的供体抗原反应的标准模型。本视频文章以可视化方式演示了进行BALB/c-->C57BL/6皮肤移植的每一步操作过程。

摘要

作为最严格且技术难度最低的模型之一，皮肤移植是检测宿主T细胞对MHC差异性供体抗原反应的标准方法。本视频文章旨在通过小鼠模型，为观众提供皮肤移植的逐步可视化演示。该实验方案分为五个主要部分：1）获取供体皮肤；2）准备受体以进行移植；3）皮肤移植操作；4）拆除敷料并监测移植物排斥反应；5）实用技巧提示。熟练掌握后，整个操作过程应在10分钟内完成。

方案

实验开始前：

• 获得IACUC批准
• 对手术器械和棉签进行灭菌

一、收获供体组织

1. 按照机构的标准操作程序实施供体小鼠安乐死
2. 用酒精将耳根部的毛发润湿
3. 从耳根处剪下耳朵，获取供体皮肤
4. 将组织置于冰上的培养皿中
5. 分离耳组织：用鼠齿镊夹住耳根处组织的腹侧和背侧，轻轻拉开组织；将背侧组织（内表面朝下）漂浮在冰上的磷酸盐缓冲液（PBS）中；弃去富含胶原的腹侧瓣膜

二、准备移植受体

1. 使用批准的程序对小鼠进行麻醉
2. 给予镇痛药以缓解术后疼痛（例如，腹腔注射 0.05–0.1 mg/g 布托啡诺）
3. 将小鼠置于侧卧位
4. 进行足趾夹捏以确认动物已充分镇静
5. 用酒精润湿毛发并剃除胸部毛发
6. 用酒精棉片擦拭区域使之清洁

三、皮肤移植

1. 做约 1 cm 的切口：用鼠齿镊提起皮肤，并在镊子下方约 0.25–0.5 cm 处剪开
2. 将供体皮肤从 PBS 中取出，放置于移植床表面（耳部皮肤的内侧面朝向移植床），并用无菌棉签吸除多余的 PBS
3. 仔细修剪多余的供体皮肤，使移植物平整地贴合于移植床内（确保移植物边缘未向内卷曲，且未覆盖到受体躯干皮肤上）
4. 用无菌绷带包裹受体动物（将非粘性纱布部分覆盖于皮肤移植物上）
5. 确保绷带不过紧（观察动物呼吸情况），且四肢可自由活动
6. 用一根 2-0 丝线缝合固定绷带
7. 将动物置于清洁的笼子中（在加热灯下保温，直至动物从麻醉中充分恢复）
8. 每天监测受体 1–2 次，观察是否有痛苦迹象，并根据需要给予镇痛药物以缓解疼痛

四、敷料移除（移植后6-7天）

1. 使用批准的程序对小鼠进行麻醉
2. 剪开并移除丝线缝合线
3. 使用钝头剪刀小心剪开敷料（确保不损伤移植物），并轻柔取出
4. 将小鼠放回清洁的笼子中
5. 在移除敷料后约8小时检查移植物是否有结痂或收缩迹象。若出现上述情况，可能表明移植物未能成功血管化，应视为技术失败
6. 每日监测排斥反应的迹象（通常定义为供体组织出现约80%的坏死）
7. 同种异体皮肤移植通常在术后第8至12天发生排斥

五、实用提示

1. 在耳基部附近采集供体组织可实现：1）最大化移植物尺寸，以及 2）提供不规则的腹侧悬垂部分，便于后续分割
2. 为受体剃毛时务必使用新的剃刀刀片
3. 若需通过腹腔注射给予镇痛剂，应在移植手术前给药，以减少术后操作（降低移植物被破坏的风险）
4. 如条件允许，在敷设绷带前应脱去手套。手套容易粘连绷带，导致敷设困难
5. 在绷带末端缝合一针可减少过早脱落的风险
6. 缠绕绷带时应尽可能紧密，但在打结前必须评估动物呼吸情况。若绷带过紧，动物将停止呼吸；若过松，动物会自行拆除

讨论

如本视频文章所示，皮肤移植模型是一种快速且简便的监测同种异体T细胞反应的方法。同种异体皮肤移植具有广泛的应用，已被用于评估多种免疫抑制剂和耐受诱导方案的效果，同时也被用于研究各种阻断抗体的生物学效应。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
显微解剖镊（弯型）	Sigma-Aldrich	F4142
鼠齿镊（1×2齿，直型）	Fine Science Tools	11053-10	n=2
斜视剪（钝头）	Fine Science Tools	14074-11
虹膜镊（弯型）	Fine Science Tools	11065-07
弹簧剪（角度型）	Fine Science Tools	15006-09
哈尔西微持针器	Fine Science Tools	12500-12
10 cm 培养皿	Corning	430167
PBS	Cellgro	21-040-CV
布托啡诺盐酸盐（Bupernex）	Reckitt Benckiser	517201
胰岛素注射器（29 号针头）	Monoject	8881 600145
棉签	Solon Manufacturing Company	362
单刃剃须刀片（#9）	Smith & Nephew Inc.	67-0238
丝线缝合线（2-0；PS-2）	Ethicon Inc.	583H