新方法 在体 内 用于评估非酒精性脂肪性肝病进展的微型计算机断层扫描成像技术

摘要

使用饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠模型，我们描述了一种新型方法的应用 体内 以微计算机断层扫描成像技术作为无创方法评估非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的进展阶段，重点聚焦于肝脏血管网络，因其在NAFLD相关肝功能紊乱中具有重要作用。

摘要

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种日益严重的全球性健康问题，目前缺乏有效治疗手段进一步加剧了NAFLD的影响。现有技术在时空分辨和无创条件下对肝脏微环境结构进行表征以及对疾病分期进行评分的能力不足，这已成为制约NAFLD及时准确诊断（包括分级）与监测，以及潜在疗法开发的重要限制因素。本研究利用饮食诱导的NAFLD小鼠模型，探讨了 体内 微型计算机断层扫描（CT）成像技术作为一种非侵入性方法，用于评估非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的进展阶段，主要关注肝脏血管网络，因其在NAFLD相关肝功能紊乱中具有重要作用。该成像方法可实现对肝脂肪变性及功能组织摄取的纵向分析，同时可评估相对血容量、门静脉直径以及血管网络密度。通过理解NAFLD进展过程中肝脏血管网络的适应性变化，并将这些变化与该方法所揭示的其他疾病进展特征（如脂肪变性、炎症、纤维化）进行关联分析，有望为小鼠NAFLD研究建立更高效、可重复的新方法。本方案还有望提升临床前动物模型在探究 针对疾病进展的新型疗法的开发。

引言

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种代谢性疾病，影响约25%的人群和>80%的病态肥胖者¹。据估计，其中约三分之一的患者会发展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH），其特征为肝细胞脂肪变性、炎症及纤维化²。NASH是肝硬化和肝细胞癌（HCC）发生风险显著升高的疾病阶段^3,4。因此，目前NASH是肝移植的第二大常见原因，并且预计不久将成为肝移植最重要的预测因素^5,6,7。尽管该疾病具有较高的发病率和严重性，但目前尚无针对NAFLD的特异性治疗手段，现有疗法仅旨在控制与疾病相关的病理状态，如胰岛素抵抗和高脂血症^5,6。

近年来，内皮细胞以及代谢组织（如脂肪组织和肝脏）的血管网络在病理生理学中的作用及其适应性变化在研究中日益受到重视，尤其是在肥胖和代谢紊乱过程中^7,8。内皮细胞是一层单层细胞，内衬于血管网络内部，起到功能性和结构性屏障的作用。它还参与多种生理和病理过程，如血栓形成、代谢物转运、炎症反应和血管生成^9,10。以肝脏为例，其血管网络的一个显著特征是存在一类高度特化的细胞，称为肝窦内皮细胞（LSECs）。这类细胞缺乏基底膜，并具有多个窗孔结构，有利于血液与肝实质之间底物的快速交换。由于其独特的解剖位置和生物学特性，LSECs在肝脏的病理生理过程中可能发挥关键作用，包括在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）/非酒精性脂肪性肝炎（NASH）期间肝脏炎症和纤维化的发展。事实上，LSECs在NAFLD进程中发生的病理、分子和细胞层面的适应性改变，促进了疾病的进展¹¹。特别是NAFLD期间由LSECs介导的肝脏血管生成，与炎症的发生以及疾病向NASH甚至肝细胞癌（HCC）的进展密切相关¹²。此外，与肥胖相关的早期NAFLD表现为LSECs中胰岛素抵抗的发展，这一变化早于肝脏炎症或其他晚期NAFLD征象的出现¹³。

此外，肝窦内皮细胞（LSECs）最近被发现是多种病因所致肝病过程中肝脏血流和血管网络适应性变化的核心调控者^14,15。事实上，慢性肝病的特征是明显的肝内血管收缩以及血流阻力增加，这些因素促进了门静脉高压的形成¹⁶。在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的情况下，多种与LSEC相关的机制参与了这一过程。例如，如上所述，LSEC特异性的胰岛素抵抗与肝血管系统胰岛素依赖性血管舒张功能减弱相关¹³。此外，在疾病进展过程中，肝脏血管系统对血管收缩因子的敏感性升高，进一步加剧了肝血流障碍，并导致剪切应力的出现，二者共同引起肝窦微循环的紊乱¹⁷。这些发现提示，血管系统是肝病中的一个关键作用靶点。然而，目前在NAFLD/NASH的早期诊断与监测以及潜在疗法开发方面仍存在局限性，主要体现在难以对肝脏微环境及（微）血管结构进行一致性的表征，以及难以以时空分辨、无创的方式对疾病分期进行评分。

微型计算机断层扫描（micro-CT）成像是目前用于准确描绘活体生物体内解剖结构信息的无创成像金标准方法。微型CT与磁共振成像（MRI）代表了两种互补的成像技术，能够覆盖广泛的病理类型，并对所成像的结构和组织提供极高的分辨率和丰富的细节。其中，微型CT是一种快速且精确的工具，常用于研究骨疾病及其相关的骨表面改变¹⁸、评估肺纤维化随时间的进展¹⁹、诊断肺癌及其分期²⁰，甚至用于检查牙科病理变化²¹，且无需对成像样本进行特殊处理或破坏。

微型计算机断层扫描（micro-CT）成像技术基于不同器官在X射线与物质相互作用过程中表现出的差异性衰减特性。在CT图像中，X射线衰减差异较大的器官可呈现高对比度（例如，肺组织呈暗色，骨骼呈亮色）。而衰减特性非常相似的器官（如不同的软组织）在CT图像上则难以区分²²。为克服这一局限性，研究人员已广泛探索了基于碘、金和铋的专用对比剂用于活体（in vivo）成像。这些对比剂可改变其富集组织的衰减特性，从血液循环中清除缓慢，从而实现整个血管系统或特定组织的均匀且稳定的显影²³。

在人类疾病诊断中，CT成像及类似技术（如磁共振成像-derived质子密度脂肪分数）已用于测定肝脏脂肪含量^24,25。在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的背景下，高软组织对比度对于准确区分病理性病变或微小血管至关重要。为此，常使用可增强肝脏组织特征对比度的造影剂。此类工具和材料可用于研究多种肝脏特征及可能的病理表现，例如血管网络的结构与密度、脂质沉积/脂肪变性，以及肝脏中功能性组织对脂质（乳糜微粒）的摄取与转运。此外，还可评估肝脏相对血容量和门静脉直径。在极短的扫描时间内，这些参数可提供关于NAFLD评估与进展的不同且互补的信息，有助于建立无创且详细的诊断方法。

本文中，我们提供了一种新型方法的逐步操作方案 体内 采用微计算机断层扫描（micro-CT）成像技术作为无创方法评估非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的进展阶段。利用本方案，可在肝病小鼠模型中对肝脂肪变性程度、组织功能摄取、相对血容量、门静脉直径以及血管网络密度进行纵向分析与评估。

方案

所有实验均由BIOEMTECH的工作人员按照欧洲及国家动物福利法规进行，并获得国家主管部门批准（许可证编号 EL 25 BIOexp 45/PN 49553 21/01/20）。所有实验的设计与报告均遵循ARRIVE指南²⁶。实验小鼠购自希腊雅典的希腊巴斯德研究所。

注意：动物在温度为20–22 °C、相对湿度为50%–60%、12小时光照/12小时黑暗循环（光照时间07:00–19:00）的环境中，饲养于带有通风装置的独立笼具中，笼内配备栏杆和纸板管以丰富环境。采用高脂饮食（HFD）与高果糖玉米糖浆（HFCS）联合干预，后者是一种含果糖和葡萄糖的甜味剂，广泛用于现代富脂饮食中，该组合被用作诱导非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的公认可靠模型。^27,28,29,307-8周龄时，雄性C57BL/6小鼠被给予 随意摄取 可选择正常饮食（n = 2），其中10%千卡来自脂肪，或高脂饮食（HFD，n = 2），其中60%千卡来自脂肪，并在饮水中补充5%高果糖玉米糖浆，持续22周。每周使用电子天平测量体重；在实验期间，每隔一天使用评分表监测动物福利状况。成像实验结束后，处死小鼠。 通过 颈椎脱位法

1. 动物准备

注意：成像方案总结于图1中。

1. 使用3%-4%异氟烷（溶于室内空气）对小鼠进行麻醉，并使用专用加热垫维持其体温。
   注意：在开始扫描前，必须通过检查小鼠是否存在足底回缩反射缺失来确认麻醉深度足够。
2. 在实验开始前，将眼用软膏涂抹于动物眼睛上。
3. 将动物放置于CT扫描仪的托架中，固定鼻罩，并切换至1.5%-3%异氟烷（溶于室内空气）以维持麻醉状态。
   注意：必须通过检查足底回缩反射是否消失，来确认维持麻醉所需的合适异氟烷浓度。
4. 持续监测小鼠状态。

2. 扫描前准备

注意：成像分为两个实验阶段进行，以便使第一种对比剂充分从循环系统和组织中清除。第一阶段给予 eXIA（第一种对比剂），第二阶段给予 ExiTron（第二种对比剂），具体操作如下方“成像工作流程”（第 3 节）所述。

1. 将对比剂（根据实验阶段选择 eXIA 或 ExiTron）置于室温下平衡 3 小时。
2. 在 CT 扫描仪上设置以下扫描参数：采用高分辨率协议，管电压为 50 kVp，电流为 460 µA，非螺旋扫描模式，每圈 720 个投影，共扫描四圈，采集时间为 4 分钟。

3. 成像工作流程

1. 实验阶段1
   1. 根据最大对比度要求，按每克体重6 µL的未稀释剂量计算并准备第一种对比剂的给药体积。
   2. 用生理盐水填充尾静脉导管，并将其连接至装有对比剂的注射器。
   3. 获取平扫全身体部（WB）及肝脏基线扫描图像。
   4. 确保注射器或导管中无气泡或堵塞。
   5. 将预装导管插入尾静脉，注射造影剂 通过 缓慢手动注射，持续时间为1-3分钟（非团注）。当设定为适当的输注速率时，可使用注射泵。
      注意：可将动物尾部置于温水中以诱导血管扩张，有助于导管插入
   6. 在不同时间点获取 WB 和肝脏扫描图像，具体时间点如图所示 表1.
      注意：如果无法获取所有时间点的数据，应重点关注注射后45分钟（PI），此时肝脏摄取达到峰值，以及注射后48小时（PI），此时完成清除。
2. 实验阶段2
   1. 按照第1节所述方法，于首次造影剂注射后48小时完成最终成像的10天后，再次准备小鼠以给予第二种造影剂。
   2. 执行步骤 2.1–2.2。
   3. 根据体重，按每克8 µL的未稀释剂量计算并准备第二种造影剂的给药体积，以获得最大对比度。
   4. 用生理盐水填充尾静脉导管，并将其连接至装有对比剂的注射器。
   5. 获取平扫全身及肝脏基线扫描图像，以评估相对血容量和肝脏脂肪变性。
   6. 确保扫描中无对比剂显影，以表明第一种对比剂已完全清除。
   7. 将预装导管插入尾静脉，注入造影剂 通过 缓慢手动静脉注射，持续时间为1-3分钟（非团注）。当设定为适当的输注速率时，可使用注射泵。
   8. 在不同时间点获取 WB 和肝脏扫描图像，具体时间点如图所示 表1.
      注意：WB 扫描在接种后 10 分钟和 4 小时获取。两次扫描之间较长的时间间隔可用于评估示踪剂在体内的生物分布及其相对清除情况。

4. 数据提取与分析

注意：本方案中提供的数据提取与分析步骤基于特定的图像处理软件（见材料表）。当使用不同软件时，所述步骤可能需要相应调整。

1. 肝脂质沉积/脂肪变性的评估
   注意：在评估肝脂肪变性时，不使用对比剂，并对对照组与病理组进行比较。由于不同小鼠间组织衰减特性存在相对较大的差异，因此根据以下公式并参照先前所述方法，将肝脏的密度值相对于脾脏（无脂肪组织）和脂肪（绝对脂肪组织）进行归一化处理²⁵:
   
   1. 进行分析时，加载平扫的DICOM文件，并调整灰阶/对比度，以清晰显示肝脏、脾脏和白色脂肪组织（WAT）。
   2. 访问 建模操作员 工具 通过 工具下拉菜单中的前面板，然后选择 3D ROI 工具.
   3. 在……之下 3D ROI 操作符，选择 添加 ROI 生成多个感兴趣区域（每个组织最多八个），在肝脏（优先选择左内叶、右内叶和左外叶区域）和脾脏显示清晰、无明显血管和脂肪的区域进行取样。
      注意：对于白色脂肪组织（WAT），应在内脏脂肪组织库的中部选择感兴趣区域（ROI）。推荐区域如下所示。 图2使用肝脏/脾脏比值且不包含WAT的标准化方法也可参照先前建立的方法进行应用³¹.
   4. 在……之下 3D 绘画模式与侵蚀/膨胀 特征，选择 二维，并使用出现的界面为每个 ROI 指定名称和颜色。
   5. 使用 球体 使用直径为8像素的画笔ROI工具手动绘制二维ROI区域。
   6. 通过在感兴趣区域上分割二维感兴趣区域（ROI）来进行采样 十字线 横断面上的工具，如图所示 图3A.
   7. 在矢状面和冠状面中点击选定的点，以完成二维感兴趣区域（2D ROI）的分割，如图所示 图3B.
   8. 重复此过程以定义其余的 ROI。
      注意：采样时应避开器官的边缘区域，因为这可能会引入噪声，影响各ROI计算所得的亨氏单位（HU）值的可靠性。
   9. 当对分割的 ROI 感到满意后，前往 导航，并选择 显示表格 显示包含各ROI计算所得HU值的量化表格。
      注意：感兴趣的数值列在“均值”（Mean）列中，该列包含感兴趣器官 ROI 内体素的数值平均值（HU）。记录感兴趣的数值，或通过选择保存整个表格 导出表格.
   10. 计算肝脏、脾脏和腹部皮下脂肪（WAT）的平均CT值（HU），并将所得数值代入上述公式以计算肝脏脂肪百分比。
2. 肝脏中功能性组织摄取/脂质（乳糜微粒）转运
   注意：功能性组织摄取/脂质（乳糜微粒）转移的分析基于首次对比剂注射后45分钟和48小时获取的扫描图像，采用先前发表的方法进行³²使用以下公式计算不同组织和时间点的对比度：
   
   PV器官_i 是器官在该时间点的平均像素值 t_i （从0小时到48小时），以及 PV器官₀ 是图像中未使用对比剂时器官的平均像素值。
   1. 要执行此分析，请加载eXIA扫描的DICOM文件，并调整灰阶/对比度以清晰显示肝脏、脾脏和左心室。
   2. 访问 建模操作员 通过 工具下拉菜单中的前面板，然后选择 3D ROI 工具.
   3. 在……之下 3D ROI 操作符，选择 添加 ROI 对肝脏进行多个感兴趣区域的分割。
   4. 在……之下 3D 绘画模式与侵蚀/膨胀 特征，使用该 球体 使用直径为 8 像素的画笔 ROI 工具并进行 −1 腐蚀。
      注意：在每个器官清晰可见的切片上选择多个感兴趣区域（ROI）。避免选择边界区域，因为这会引入噪声并影响每个ROI所计算的HU值的可靠性。这将导致采样多个三维ROI，对应于较小的器官体积。
   5. 使用出现的界面为每个感兴趣区域（ROI）指定名称和颜色。
   6. 当对设计的感兴趣区域（ROIs）满意后，前往 导航，并选择 显示表格 显示包含各ROI计算所得HU值的量化表格。
      注意：感兴趣数值列在“均值”（Mean）列下，该列显示了感兴趣区域（ROI）内包含的体素的数值平均值（HU）。各器官ROI的平均HU值对应于 PV器官_i记录感兴趣的数值，或通过选择保存整个表格 导出表格.
   7. 获得 PV器官₀，使用注射对比剂前的DICOM文件重复上述所有步骤，以计算肝脏、脾脏和左心室的平均亮度。
   8. 将数值代入上述方程，以计算出与功能性组织摄取/脂质（乳糜微粒）转运相对应的百分比对比度。
3. 肝脏血管网络的结构与密度
   注意：对肝血管网络结构和密度的分析基于先前已发表的方法学³³ 在第二次对比剂注射后10分钟获取的肝扫描上进行。
   1. 加载ExiTron扫描的DICOM文件，并调整亮度/对比度以清晰显示肝脏血管网络。
   2. 访问 建模操作员 通过 工具下拉菜单中的前面板，然后选择 3D ROI 工具.
   3. 在……之下 3D ROI 操作符，选择 添加 ROI 生成肝脏的三维感兴趣区域。
   4. 在……之下 3D 绘画模式与侵蚀/膨胀 特征，选择 3D.
      注意：使用 球体 使用ROI绘制工具并设置−1侵蚀值，以定义冠状面上的分割层。ROI绘制工具的直径需根据每一层进行调整（以添加或删除所需的/不需要的体素选择）。建议首先在冠状面上初步定义肝脏体积，然后利用横断面和矢状面校正ROI。该过程需要高度精确。操作者在分割每一ROI层时，必须格外小心，避免将其他组织、血管和骨骼包含在内，同时确保肝脏所有区域均被纳入所定义的ROI中。因此，熟悉肝脏的解剖边界至关重要。
   5. 当对所得的肝脏感兴趣区域（ROI）满意后，执行切割操作，以去除图像数据中不属于初始分割的肝脏感兴趣区域的所有体素。为此，请从 ROI 选择器，然后点击 执行切割 此操作可去除背景，同时保持肝脏感兴趣区域（ROI）不变。
      注意：尽管撤销/重做功能适用于在以下情况下执行的所有操作 3D ROI 工具，裁剪感兴趣区域（ROI）的操作无法撤销。因此，在执行此操作前，用户可考虑将初始的肝脏ROI以DICOM格式保存。
   6. 所得肝脏感兴趣区域包含血管网络及周围组织，必须将其去除。为此，通过点击来重置肝脏感兴趣区域 重置感兴趣区域 扫帚按钮
   7. 使用出现的界面将肝脏感兴趣区域（ROI）的所有像素转移至背景。
      注意：此操作后，肝脏感兴趣区域（ROI）仍将存在，但不再包含任何体素。
   8. 为了重新分割肝脏ROI，使其仅包含与血管相关的像素，请前往 分割算法 由魔杖图标表示，并选择 连通阈值分割.
   9. 将ROI定义为 输出 以及背景作为 输入 从应用阈值之前，在输入下拉菜单中选择。
   10. 设置 阈值 通过点击 分钟 和 Max 在每个阈值字段左侧的图标上填写最大值和最小值，以获取血管网络。
       注意：只有处于所选范围内的像素才会被包含在最终的感兴趣区域（ROI）中。通过在不同动物间调整阈值，可确保根据每只动物注射的对比剂确切剂量，对相同的解剖区域进行分析。尽管所选组织中的数值可能不完全相同，但对比剂的剂量在所选组织间保持恒定。
   11. 使用 十字线 工具单击血管网络清晰可见的点，并单击 应用 进行分割。
   12. 激活最大强度投影（MIP）查看器。
   13. 根据MIP视图中血管网络的清晰程度评估所得肝脏感兴趣区。
   14. 如果组织仍位于肝脏ROI的某些部分，通过调整重复步骤4.3.5–4.3.11 分钟 阈值，直到分割的肝脏感兴趣区域清晰显示血管网络。
   15. 当对所得的肝脏感兴趣区（ROI）满意后，生成包含计算所得肝脏ROI体积（单位为立方毫米）的定量表格。
       注意：感兴趣的数据列在“mm”中³“列，其中包含肝脏ROI内体素的数值体积（HU）。注意感兴趣的数值，或通过选择保存整个表格” 导出表格.
4. 肝相对血容量
   注意：为了测量肝相对血容量（rBV），该参数与肝纤维化进展过程中新生血管的形成量显著相关，需采用第二次注射对比剂前的扫描图像以及注射后4小时的扫描图像。分析方法同前文所述。³⁴.
   1. 要执行此分析，请加载 ExiTron scan DICOM 文件，并调整灰阶/对比度。
      注意：关闭 MIP 查看器：在……之下 偏好设置，勾选该框以在加载时禁用最大强度投影（MIP）查看器。对于大型数据集，此操作可提高加载速度。
   2. 访问 建模操作员 通过 前面板上的工具下拉菜单，然后选择 3D ROI 工具该工具为绘制、可视化、保存以及定量分析二维和三维区域提供了高级选项。
   3. 在……之下 3D ROI 操作符，选择 添加 ROI，并划分两个感兴趣区域：一个用于肝脏，另一个用于大血管。
   4. 在……之下 3D 绘画模式与侵蚀/膨胀 特征，选择 二维.
      注意：建议使用 球体 使用画笔工具圈选感兴趣区域，肝脏区域的画笔直径设为8-10像素，血管区域设为4-6像素。然而，画笔直径可根据待选区域的大小进行适当调整。
   5. 使用出现的界面为每个感兴趣区域（ROI）指定名称和颜色。
      注意：选择感兴趣组织的中心区域的两到五个切片，并定义分割层，为每种组织生成二维感兴趣区域（ROI）。在每个切片上选择区域时，应避开器官边界区域，如图所示。 图4，因为这可能会引入噪声并影响每个ROI计算出的HU值的可靠性。
   6. 当对设计的感兴趣区域（ROIs）满意后，前往 导航，并选择 显示表格 显示包含各ROI计算所得HU值的量化表格。
      注意：感兴趣的数值列在“均值”列下，该列显示了感兴趣区域（ROI）内包含的体素的数值平均值（HU）。记录感兴趣的数值，或通过选择保存整个表格 导出表格.
   7. 对注射对比剂前的DICOM文件重复上述所有步骤，以获得肝脏在对比剂注射前的平均亮度。具体操作为，仅针对肝脏执行步骤4.4.2至4.4.5。
   8. 计算每种组织在相应时间点的平均HU值，并将所得数值代入以下方程：
      
      注意：注射对比剂后的大血管被视为100%相对血容量（rBV），而给予对比剂前的肝脏被视为0%相对血容量（rBV）。
5. 门静脉直径
   注意：门静脉直径的测量采用与肝组织相对血容量（rBV）测量相同的扫描图像，分析方法如前所述。³⁵.
   1. 加载 ExiTron scan DICOM 文件，并调整灰阶/对比度。
   2. 在肠系膜上静脉与脾静脉汇合处上方三到四个层面处确定横断面图5).
   3. 使用 尺子 用于精确测量两点间距离的工具（例如圆形静脉区域的直径）。
      注意：距离是在图像上提取的，但也可以前往 导航 并选择 显示表格 显示包含计算距离的量化表格或进行选择 导出表格 保存结果。

结果

在本项代表性研究中，无需使用任何对比剂的显微CT成像显示，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠的肝脏脂肪百分比高于对照组（表2），证实了其病理特征。通过使用ExiTron对比剂，并结合上述肝脏血管网络结构与密度分析方法，发现NAFLD小鼠肝脏血管网络的总体积密度高于健康对照组（图6，表2）。与对照小鼠相比，NAFLD小鼠的门静脉直径也更大（表2），这一结构改变与肝病过程中门静脉高压相关^34,36,37。同样，NAFLD动物的肝脏相对血容量（rBV）计算值也高于健康对照组（表2）。

此外，功能性组织摄取实验的分析表明，与健康对照组小鼠相比，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠体内eXIA对比剂的蓄积量更高且...

讨论

目前推荐用于人类非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）诊断与分期的方法是肝活检，该方法存在出血并发症以及取样误差的风险。⁴⁰相反，在动物模型中，此类诊断通常通过死后组织学检查进行，尽管目前已有关于可存活肝活检的操作方案，并且在研究设计允许的情况下推荐使用⁴¹使用死后组织学方法意味着需要大量动物来研究该疾病的进展过程。因此，无法在同一只动物体内动态观察疾病的发展；此外，在比较来自不同动物、不同时间点获取的样本时，预期会存在更高的变异性。本文中，我们提供一种创新的、非侵入性的 体内 micro-CT 方法应用于一种已建立的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）实验动物模型，可在同一动物体内通过定量分析以下功能参数，实现对疾病进展的纵向评估：肝脂肪变性程度、功能性组织摄取、相对血容量、门静脉直径以及血管网络密度。

目前，显微CT成像是一种非侵入性成像方法的金标准，可准确呈现活体生物体内的解剖学信息。显微CT能够达到很高的空间分辨率，因此是研究多种病理状态下细微结构的有力工具。此外，利用X...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
eXIA160	Binitio Biomedical, Inc.		https://www.binitio.com/?Page=Products
高脂饮食（60% 千卡热量来自脂肪）	Research Diets, New Brunswick, NJ, USA	D12492
高果糖玉米糖浆	Best flavors, CA	hfcs-1gallon
Lacrinorm 眼用软膏	Bausch & Lomb
正常饮食（10% 千卡热量来自脂肪）	Research Diets, New Brunswick, NJ, USA	D12450
Viscover ExiTron nano 12000	Milteny Biotec, Bergisch Gladbach, Germany	130-095-698
VivoQuant	Invicro
X-CUBE	Molecubes, Belgium		https://www.molecubes.com/systems/