本文介绍了一种利用电子 von Frey 仪评估感染布氏锥虫（Trypanosoma evansi）小鼠伤害感受的实验方案，通过测定后肢足底及内脏的机械痛阈值来实现。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
方法文章
电子 von Frey 与小鼠面部表情量表联合用于评估异常性疼痛及疼痛反应 Trypanosoma evansi感染的小鼠
本文内容
摘要
摘要
传染病的发病机制研究仍然是一个复杂的领域。在家畜中可观察到多种临床症状的发展过程，例如异常性疼痛和疼痛。然而，要了解这些症状的发生通路并实施正确治疗，需要开展受控实验，其中许多实验需使用实验动物。测量后肢足底和内脏机械阈值的变化，是观察啮齿类动物疼痛感知变化的一种有效技术。首先可通过基础状态测试测量缩足反应，从而更好地控制实验分组。在诱导感染并加入药物干预后，可进行后续测试。结合使用电子 von Frey 仪器与面部评分量表观察类似疼痛的变化，可实现对小鼠异常性疼痛和疼痛的简单、精确且一致的评估。因此，采用本方法研究Trypanosoma evansi感染，是评估实验感染动物异常性疼痛和疼痛的有效手段，该方法也可应用于家畜常规治疗的相关研究。
引言
Trypanosoma evansi 是南美洲称为“"苏拉病"或“"马瘫病"”的疾病的病原体1,2。该病常感染马科动物和牛，也可感染野生动物，主要通过吸血蝙蝠、虻类及螫蝇叮咬传播1,3。苏拉病是家畜中的一种重大疾病，在缺乏正确治疗的情况下可能致死，临床症状无特异性，包括贫血、食欲减退、体重下降、肌肉无力和流产等，症状表现可因宿主种类和地理区域不同而有所差异2,4,5,6。
在疾病发展过程中，感染动物出现痛觉过敏和疼痛的表现仍是一个较新的研究课题2,7。深入了解这些症状背后的发病机制，是改进和完善当前治疗方案的重要一步，可通过在经典的抗锥虫治疗方案中添加有效的镇痛药物来实现5
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
方案
所有实验均使用10周龄的成年雌性Swiss小鼠（35-55 g）进行。动物饲养在聚砜笼具中（每笼3-5只），饲养环境温度控制在（21 ± 1 °C），光照周期为12小时光照/12小时黑暗，可自由摄取标准实验室饲料和水。ad libitum。每次实验每组分配10只动物，以验证药物处理效应的一致性。实验设计已提交并获得圣卡塔琳娜州立大学伦理委员会（CEUA）批准（批准号：6019201123）。所有动物实验均遵循ARRIVE指南（动物研究：in vivo实验报告规范），并按照美国国家研究委员会《实验动物护理与使用指南》进行。
1. Trypanosoma evansi 的制备与接种
警告：处理感染性血液样本、试剂及其他化学化合物时，应穿戴一次性实验服、手套、口罩和护目装备。
- 开启水浴设备，并将其调节至37 °C的恒定温度。
- 从超低温冰箱（-80 °C）中取出含有保存血液样本的微量离心管，放入水浴中直至血液完全解冻。
注意：在不同实验的每组小鼠中，应使用相同的分离株进行感染，以保持血液传代次数一致。 - 使用含60% D-(+)-葡萄糖的磷酸盐缓冲液（PBS, 0.1 M, pH 7.4）对样本进行连续稀释（体积比10:1），直至每0....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
结果
通过电子 von Frey 仪器评估感染 T. evansi 后小鼠右后足及内脏组织机械阈值的降低
根据已有 T. evansi 样本的相关数据，实验持续进行5天2。感染组小鼠在感染后第3天开始表现出右后足机械阈值的显著下降，并在随后的2天内持续显著低于对照组（图1A），与未感染小鼠相比差异明显。腹部触觉敏感性的结果类似，感染小鼠在感染后第3天起出现内脏异常性疼痛（内脏痛觉过敏），并在之后2天内机械阈值持续显著低于对照组（图1B）。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
讨论
在涉及感染动物的实验中，一个关键步骤是控制寄生虫血症水平。不同品系的T. evansi在小鼠体内可能表现出不同的行为，导致从急性到慢性感染的不同病程2,4,5,6。此外，感染剂量的变化可能会缩短或延长小鼠的存活时间。因此，建议在正式实验前获得存活曲线，以确定实验的合适周期，并避免因小鼠意外死亡而造成实验中断15,16。此外，这些数据还可用于确定实验中适用的人道终点。
此外，为了保证血液传代次数相同，实验中所有小鼠必须使用同一菌株进行感染，具体原因见方案部分。同样，可用于感染小鼠的材料可以是冻存或新鲜的感染血液，因为某些冻存样本在水浴解冻后可能失活。然而，新鲜感染血液可能引起更快的寄生虫血症，从而.......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
披露
作者声明无任何利益冲突。
致谢
作者特别感谢圣卡塔琳娜州立大学提供的经费支持，感谢药理学实验室提供的动物和实验空间，以及感谢血液寄生虫与媒介生物化学实验室提供的感染了T. evansi的冷冻保存血液样本，该样本用于本实验。
....访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 26 G 1/2" 针头连接胰岛素注射器 | TKL | 80288090100 | 用于向实验动物输注溶液 |
| 冯·弗雷镇痛仪配件 | INSIGHT | EFF 303 | 带数字镇痛仪检测支撑装置的限制盒 |
| D-(+)-葡萄糖 | SIGMA-ALDRICH | G7021 | 一种单糖，是生物体以ATP形式获取能量的主要来源 |
| 数字镇痛仪 | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | 冯·弗雷Wi-Fi是一种便携式设备，用于评估组织对机械刺激的敏感性 |
| Gilson型10 µL聚丙烯吸头 | CRALPLAST | 18261 | 用于电子冯·弗雷装置的聚丙烯吸头，推荐用于后肢异常性疼痛评估 |
| 实验室水浴锅 | BEING INSTRUMENT | BW-22P | 用于将盛装在适当容器中的液体和半固体物质加热至特定温度 |
| 磷酸盐缓冲液 | SIGMA-ALDRICH | 806552 | 一种平衡盐溶液缓冲液，广泛用于多种细胞培养应用 |
| 瑞士小鼠（Mus musculus），雌雄均有 | UFSC | Swiss Webster | 用于受控实验的实验动物 |
| Trypanosoma evansi冷冻保存样本 | UDESC | - | 用于感染所有小鼠的样本，由血源性寄生虫与媒介生物化学实验室提供 |
| 通用型10 µL聚丙烯吸头 | CRALPLAST | 18171 | 用于电子冯·弗雷装置的聚丙烯吸头，推荐用于内脏异常性疼痛评估 |
参考文献
- Desquesnes, M., et al. Trypanosoma evansi and surra: a review and perspectives on origin, history, distribution, taxonomy, morphology, hosts, and pathogenic effects. BioMed Research International. 2013, 194176(2013).
- Cipriani, D. S., et al.
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
重印与许可
