本方案描述了一种在膝骨关节炎兔模型中进行推拿干预的方法。
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摘要
摘要
膝骨关节炎（KOA）主要表现为膝关节软骨及周围软组织的退行性改变。推拿治疗KOA的有效性已得到证实，但其潜在机制仍需进一步研究。本研究旨在建立一种科学可行的推拿治疗KOA兔模型，以揭示其作用机制。实验选用18只6月龄正常级雄性新西兰兔，随机分为假手术组、模型组和推拿组，每组6只。通过向膝关节腔内注射4%木瓜蛋白酶溶液建立KOA模型。推拿组采用推拿手法结合膝关节旋转矫正法干预4周，假手术组和模型组仅进行标准抓握和固定操作。干预1周后，观察膝关节活动范围（ROM），并进行软骨组织苏木精-伊红（HE）染色。研究结果显示，推拿可抑制软骨细胞凋亡，修复软骨组织，并恢复膝关节ROM。综上所述，本研究证实了推拿治疗KOA模型兔的科学可行性，凸显其在KOA及相关膝关节疾病研究中的潜在应用价值。
引言
膝骨关节炎（KOA）是一种膝关节的退行性疾病，主要表现为膝关节疼痛、肿胀、变形和活动受限，致残率高，在女性中更为常见。2019年全球骨关节炎患者达5.2781亿人，其中膝骨关节炎占全球骨关节炎总患病率的60.6%1。临床上，KOA的治疗通常分为非手术治疗和手术治疗。非手术治疗包括物理治疗、药物治疗以及富血小板血浆注射治疗2,3。推拿是中医中一种常见、安全、可靠且有效的治疗方法。本研究采用推拿结合膝关节旋转矫正法治疗膝骨关节炎。其中，旋转揉按等推拿手法可调节肌肉组织平衡、减轻疼痛、调节炎症因子水平、改善组织代谢，并抑制关节软骨退变4,5。膝关节旋转矫正法可调整下肢骨与关节的力线排列，改善膝关节间隙，恢复正常的力学传导线，平衡下肢生物力学状态6,7,8,9。抗阻训练可增加肌肉质量和力量，促进软骨组织更新10,
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方案
本研究经山东中医药大学附属医院伦理委员会批准（批准号：2020-29）。
1. 实验动物
- 将18只6月龄正常级别的雄性新西兰兔（体重2.75 ± 0.25 kg）饲养于标准单笼中（12小时光照/12小时黑暗循环，温度20–24 °C，空气湿度40%–60%）。
2. 分组方法
- 采用随机数字法从18只新西兰兔中选取6只作为假手术组，其余12只分配至造模组。
- 成功造模后，采用随机数字法将造模组兔子分为模型组和推拿组，每组各6只。
- 对推拿组实施推拿干预；假手术组和模型组进行相同的抓握与固定操作，但不实施推拿。每隔一天操作一次，持续4周（图1）。
3. 建立骨关节炎模型
- 第1周在标准条件下对兔子进行适应性喂养。自由饮水和进食。将兔子置于右侧卧位，放入兔固定箱中，每日安抚15分钟。将兔子头部固定在头固定板上，安装固定板和螺钉，确保兔子无法移动。在抓取和固定兔子时佩戴防护手套（图1）。
- 第2周的第1、4....
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结果
膝关节活动受限程度和软骨组织损伤程度反映了膝骨关节炎（KOA）的严重性。膝关节活动范围（ROM）反映了膝关节活动受限的程度。膝关节ROM越小，表明膝关节活动受限越严重；反之，膝关节ROM越大，则膝关节活动越接近正常。通过苏木精-伊红（HE）染色观察软骨组织的形态与结构，可反映软骨组织损伤程度。软骨组织表面越不规则，裂隙和缺损越多，软骨细胞数量越少，软骨层厚度越薄，细胞排列越紊乱，细胞分布越不均匀，层次越不清晰，潮线越模糊、越不完整，Mankin评分越高，则膝关节软骨组织损伤越严重；反之，则软骨组织越接近正常32。在建立KOA模型时，可通过观察兔膝关节活动受限的程度来判断造模是否成功23,24。当对兔膝关节进行推拿干预时，通过观察膝关节活动受限程度及软骨组织损伤程度的改善情况，可评估推拿的疗效12。
第7周后，比较两组兔子的左膝关节发现，造模组肌肉更僵硬，活动受限，关节活动.......
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讨论
实验方案的设计对于研究推拿治疗膝骨关节炎（KOA）的机制尤为重要。通过在兔的外膝眼处注射木瓜蛋白酶建立KOA模型。外膝眼位于髌韧带外侧隐窝，位置易于定位，且在膝关节屈曲时此处股骨与胫骨之间的关节间隙较大，便于将药物注入膝关节腔，同时可避免损伤周围组织，因此易于成功建立KOA模型34。在对KOA模型兔进行推拿干预时，需将模型兔适当固定以利于推拿操作。将兔置于固定箱中，使其健侧卧位，头部固定，并安抚其情绪，使其全身放松，避免挣扎。为标准化推拿的力度与频率，提高推拿干预的一致性，推拿操作由经过严格推拿手法训练的操作者完成，并借助推拿手法参数测定仪对操作过程进行控制。
本方案的关键步骤是采用推拿结合膝关节旋转矫正法治疗膝骨关节炎（KOA）。操作前，从兔患侧下肢的髋部至踝部进行触诊，重点检查膝关节周围区域，探查肌腱结节和肌肉僵硬情况，然后屈伸膝关节，观察内膝眼和外膝眼的高度，以实现精准的推拿操作。旋转揉压法可缓解肌肉紧张与痉挛，改善膝关节局部血液循环，促进炎性物质代谢，减轻肿胀和疼痛35.......
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披露
作者声明不存在潜在的利益冲突。
致谢
本工作由山东省中医药科技项目（2021Q080）和齐鲁中医药学术流派传承项目［鲁卫函（2022）93号］资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 0.9% 氯化钠注射液 | Sichuan Keren Pharmaceutical Co. | Z22121903 | |
| -20°C 冰箱 | Haier | BD-328WL | |
| 4% 固定液 | Solarbio | P1110 | |
| 4°C 冰箱 | Haier | SC-315DS | |
| 无水乙醇 | Sinopharm | ||
| 自动组织脱水机 | Dakowei (Shenzhen) Medical Equipment Co. | HP30 | |
| 鼓风干燥箱 | 上海一恒科学仪器有限公司 | DHG-9070A | |
| 盖玻片 | 碧云天 | FCGF50 | |
| 电热恒温水浴锅 | 上海一恒科学仪器有限公司 | HWS-26 | |
| 包埋冷冻台 | 常州派士杰医疗设备有限公司 | BM450 | |
| 包埋机 | 常州派士杰医疗设备有限公司 | BM450A | |
| 乙二胺四乙酸脱钙液 | Servicebio | G1105-500ML | |
| 荧光倒置显微镜 | Leica | Leica DM IL LED | |
| 苏木精-伊红染色试剂盒 | Cisco Jet | EE0012 | |
| 盐酸 | 莱阳经济技术开发区精细化工厂 | ||
| 医用关节角度计 | KOSLO | ||
| 中性树胶 | Cisco Jet | EE0013 | |
| 普通级雄性新西兰兔 | 济南西岭角养殖繁育中心 | SCXK (鲁) 2020 0004 | |
| 木瓜蛋白酶（3000 U/mg） | Bioss | D10366 | |
| 病理组织漂白干燥仪 | 常州派士杰医疗设备有限公司 | PH60 | |
| 宠物电动剪毛器 | Codos | CP-3180 | |
| 兔固定箱 | 任意品牌 | ||
| 轮转切片机 | Leica | 531CM-Y43 | |
| 推拿手法参数测定仪 | 上海杜康仪器设备有限公司 | ZTC- | |
| 呼吸机 | TALY ELECTRIC | C32 | |
| 二甲苯 | 富宇试剂 |
参考文献
- Long, H. B., et al. Prevalence trends of site-specific osteoarthritis from 1990 to 2019: findings from the global burden of disease study 2019. Arthritis & Rheumatology. 74 (7), 1172-1183 (2022).
- Tschopp, M., et al.
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重印与许可
