本文介绍了在临床研究中使人暴露于肩突硬蜱（Ixodes scapularis）幼虫的研究方法。该技术相对简单，受试志愿者耐受性良好，并可根据实验需求进行调整。涉及人类受试者的研究必须在经相关监管机构批准的临床研究方案下进行。
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本文内容
摘要
摘要
蜱传疾病是美国乃至全球重要的公共卫生问题。蜱是专性吸血的节肢动物，硬蜱科蜱虫必须附着在宿主皮肤上并完成持续数天的吸血过程，才能获取其所需的血液餐。将动物暴露于蜱虫是研究宿主对蜱叮咬及蜱传疾病反应的常用方法。我们开发了相关操作流程，开展了首项人类志愿者暴露于未感染幼虫Ixodes scapularis的科学研究，并发表了研究结果。本文描述了用于限制蜱活动的敷料制备方法、如何将蜱固定于宿主皮肤、敷料的维护以及如何从宿主体上移除蜱。使志愿者暴露于蜱叮咬属于实验性操作，必须在经适当监管机构批准的临床研究方案下进行。该方法可促进转化医学研究，有助于深入理解人类对蜱叮咬的反应，并推动蜱传疾病诊断、预防和治疗方法的开发。
引言
硬蜱（Ixodidae：蜱螨目）是全球分布的专性吸血外寄生虫，能够传播多种具有重要医学和兽医意义的病原体，包括细菌、病毒和寄生虫。硬蜱需在宿主身上附着数天才能完成一次血餐，其具有长期附着于皮肤的能力，并在此过程中避免被宿主免疫系统识别、防止局部血液凝固，从而促进长期取食1,2,3。动物研究表明，非易感宿主在反复接触蜱虫后可产生对蜱叮咬的抵抗能力，从而降低病原体传播的可能性；而易感宿主则可被蜱虫反复寄生。获得性蜱抵抗能力取决于宿主免疫反应的性质4,5,6,7。
蜱传疾病在美国正日益构成威胁，2004年至2016年间报告的病例数量增加了一倍以上8,9。由于气候变化，不同蜱类的地理分布范围持续扩大10,11。美国....
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方案
让志愿者暴露于蜱虫叮咬是一种实验方法，必须在相关监管机构批准的临床研究方案下进行。这些临床研究（NCT01143558、NCT02446626 和 NCT05036707）已获得各自治理审查委员会的批准，在美国食品药品监督管理局授予的试验用器械豁免许可下开展，并依照《良好临床实践指南》执行。此外，这些研究已在 ClinicalTrials.gov 上注册，并已获得所有参与者的书面知情同意。
1. 密闭敷料的制备
- 为制作测量模板，将一块 3" × 3" 的水胶体封闭敷料沿测量线一侧进行复印（图 1A 和 材料表）。
- 沿 1" 线裁剪已复印的模板，然后沿 2" 线裁剪，形成一个直径为 2"、中心留有 1" 圆孔的圆形模板（图 1B）。
- 使用该模板将非粘性泡沫敷料裁剪成一个直径为 2"、中心留有 1" 圆孔的圆形（图 2A、B 和 材料表）。
- 使用同一模板，在一块 4" × 4" 超薄水胶体敷料的中央裁剪出一个....
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结果
该研究证明，该操作是安全且耐受性良好的，主要不良事件为咬伤部位出现轻度瘙痒，在58%的操作中观察到这一现象。当使用洁净实验室饲养的I. scapularis蜱幼虫时，未发生与操作相关的严重不良事件19。在进行的43次操作中，与放置的蜱虫数量相比，附着蜱虫的平均回收率为45% ± 27%（标准差），中位回收率为40%（图6）。
幼虫期I. scapularis蜱虫附着于人体的确切时间尚不明确，因为蜱虫从放置到附着的过程并未被常规观察。在一次对研究志愿者持续观察2½小时的案例中，观察期结束时所有蜱虫均未发生附着。幼虫期I. scapularis蜱虫从放置到吸血至完全饱食需要4至5天19。
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讨论
尽管涉及蜱虫暴露的动物研究4,5,6,7,21在增进我们对宿主对蜱传疾病及蜱叮咬反应的理解方面具有不可估量的价值，但这些模型在预测人类宿主反应方面的准确性存在局限性。本研究描述了一种在受控条件下使人暴露于蜱叮咬的方法学模型，该模型可轻松调整以回答不同的研究问题，并拓展了在人类中开展此类必要研究的能力。
最初的研究需要开发一种新系统，该系统既能允许蜱虫持续吸血数天，同时又能确保人类受试者感到舒适且可耐受。在评估了不同技术后，本文所述的 containment dressing（封闭敷料）最终被证明最为成功。在初期试验中，蜱虫会爬向封闭敷料圆形切口的边缘，并在尚未附着前暴露于黏性表面而死亡。为应对这种蜱虫行为，在封闭敷料的水胶体黏附层下方增加了一个非黏性的泡沫环。.......
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披露
Adriana Marques 博士拥有一项专利 US 8,926,989 B2；并且是全球莱姆病联盟和美国莱姆病基金会的无偿科学顾问。Siu Ping Turk 和 Aleah Eschman 没有存在可能构成利益冲突的关联关系。本出版物的内容不一定反映卫生与公共服务部的观点或政策，提及商品名、商业产品或组织亦不表示美国政府的认可。
致谢
本研究得到了美国国立卫生研究院（NIH）下属国家过敏与传染病研究所内部研究计划的支持。我们感谢Linden T. Hu、Sam R. Telford III、Kenneth Dardick、Carla Williams、Erin Chung和Christina Brandeburg参与实验方案的开发工作。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 20 号针头 | 任意品牌 | 用于穿刺小瓶瓶盖。 | |
| 3" x 3" 闭合性敷料 | Monarch Labs Names | LeFlap | https://www.monarchlabs.com/ordering |
| 4" x 4" 超薄水胶体敷料 | ConvaTec | DuoDerm | https://www.convatec.com/products/advanced-wound-care/brand-names/pc-wound-duoderm-granluflex/duoderm-extra-thin-dressing/ |
| 4" x 4" 纱布 | Monarch Labs Names | 用于清洁皮肤 | |
| 清洁水或生理盐水 | 用于清洁皮肤 | ||
| 防水屏障（例如 7" x 7"） | AquaGuard | TIDI | 用于淋浴防护，https://www.tidiproducts.com/product-listing/aquaguard-shower-cover-sheets |
| 非粘性泡沫敷料 | Coloplast | Biatain | https://www.coloplast.us/biatain-non-adhesive-en-us.aspx |
| 2" 防过敏胶带卷 | Monarch Labs Names | Durapore | 用于加固闭合性敷料。 |
| 粘性胶带卷 | 用于固定蜱虫 | ||
| 采集用小瓶（例如冻存管） | Ependorf | ECC200 |
参考文献
- Yeh, M. T., et al. Determining the duration of Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) attachment to tick-bite victims. J Med Entomol. 32 (6), 853-858 (1995).
- Piesman, J., Mather, T. N., Sinsky, R. J., Spielman, A. Duration of tick attachmen....
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重印与许可
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