使用低成本染料可视化糖原积累和肠道完整性 秀丽隐杆线虫

摘要

通过实验教学可以使生物学课程对学生更具吸引力。本文介绍了两种不同但互补的实验方案，可在课堂教学中用于鼓励学生提出并验证与高热量饮食、饥饿和衰老相关的假设。

摘要

Caenorhabditis elegans（秀丽隐杆线虫）是一种透明的非寄生性线虫，其生物学结构简单，因此非常适合通过细胞或其分子成分的染色来开展生命科学教学。卢戈氏碘液（碘-碘化钾溶液）在生物化学中被广泛用于染色糖原储存。通过该染色方法，可以观察到饲喂与饥饿状态下线虫之间的差异，以及不同条件（如不同饮食和氧气水平）的影响。刺蓝（Erioglaucine）是一种蓝色染料，可用于指示肠道屏障完整性的丧失。当肠道屏障完整时，蓝色染料局限于肠腔内；而当屏障完整性被破坏时，染料会渗漏至体腔中。教师可利用体视显微镜或普通显微镜展示这些生理和生化变化，也可引导学生提出科学问题，并利用上述染色方法进行假设的构建与验证。本实验方案描述了学生可轻松操作的两种针对C. elegans的染色技术。

引言

高中阶段的生物科学教学一直面临持续的挑战。值得注意的是，技术的获取与应用已在教与学过程中带来了重要进展，然而，诸如人工智能聊天机器人等工具由于提供了易于获得（有时却是错误的）回答，使得理性思考和证据寻求变得更加困难¹。因此，在课堂教学中采用以探究式学习为导向的科学方法并结合实践性实验，是培养学生或激发学生批判性思维、创造力和技术能力的重要策略²。

在此背景下，自由生活的线虫 秀丽隐杆线虫 已成功用于教学实验³ 因其具有特定优势：它不是寄生生物，且 大肠杆菌 用于喂养的生物安全等级为1级，因此生物危害几乎为零；其运动方式优雅且可量化，便于学生观察；此外，该生物体透明，既可直接观察器官，也可用染料染色以指示生物分子的存在或生理变化的发生⁴因此，可以在课堂上对与生物化学和生理变化（如衰老）相关的简单假设进行假说提出和实验验证。

糖原是一种储存性碳水化合物，由葡萄糖分子通过葡萄糖基残基以(1→4)-α糖苷键形成线性连接，并在分支点处通过(1→6)-α糖苷键连接而成的长链且高度分支的结构，对肌肉收缩、细胞分化以及血糖稳态维持具有重要作用⁵。进食后，胰岛素激活糖原合酶，促进糖原的合成。在运动或禁食期间，肾上腺素或胰高血糖素分别激活糖原磷酸化酶，从而降解多糖，为肌细胞提供葡萄糖-6-磷酸，或释放游离葡萄糖以防止低血糖^6,7。在多种生理和病理生理条件下，包括癌症，糖原水平的变化会影响细胞分化、信号转导、氧化还原调节以及干细胞特性⁸。在C. elegans中，糖原主要存在于咽部肌肉、表皮、肠道、神经元以及体壁肌中⁹。可使用卢戈氏碘液测定糖原含量，因为碘可与糖原的螺旋结构结合形成碘-糖原复合物，产生明显的蓝黑色或棕黑色，该方法已成功用于显示C. elegans中的糖原含量¹⁰。已有研究表明，高葡萄糖饮食引起的糖原积累可缩短线虫寿命，从而加速衰老过程^11,12。此外，代谢紊乱、其他激素以及外源性物质的暴露也会影响糖原代谢^13,14。因此，对C. elegans中糖原含量的研究具有重要意义，因为多种因素可能干扰其代谢，进而激发课堂上围绕运动、饮食、疾病和衰老等跨学科主题展开的基础生物化学讨论。

衰老是由细胞损伤引起的时间依赖性功能衰退。这种损伤可能与氧化应激、端粒缩短、蛋白质稳态失衡、炎症，甚至不溶性聚葡萄糖体的积累等多种因素相关¹⁵。衰老的一个重要特征是肠道完整性的下降，这与生物体生命周期中出现的多种慢性疾病密切相关¹⁶。肠道稳态的维持依赖于肠道上皮的完整性，该完整性由连接相邻上皮细胞的连接蛋白构成的物理屏障提供支持。当上皮受损时，肠腔内容物会渗漏至间质中¹⁷。基于这一机制，smurf实验已被用于在多种动物模型中检测肠道完整性，因为这种蓝色染料——二钠盐依柔红苷（Erioglaucine disodium salt）无法穿过完整的肠道膜，而保留在肠腔内¹⁸。当线虫感染病原体、暴露于某些有毒物质或衰老导致间质完整性受损时，染料便会穿透屏障并在整个虫体内扩散，使线虫全身呈现蓝色。该检测方法可用于探讨衰老生理学，并通过将线虫暴露于不同条件下，研究能够加速或延缓这一过程的影响因素。本文所述的实验方案将详细描述这两种基于染料的方法，这些方法易于在课堂中实施，有助于激发学生提出并验证与生物化学和生理学相关的假设。

实验方案的第一部分展示了其在C. elegans模型中定性和定量分析糖原含量的适用性¹⁰。 第二部分实验方案的目的是评估C. elegans肠道的完整性。该技术通过评估肠道膜的完整性来监测C. elegans的衰老过程。此外，该方法还可用于评估某种物质是否加速或延缓衰老，以及判断任何物质是否对肠屏障具有毒性作用¹⁹。

本研究所用的 C. elegans 品系为Bristol N2野生型。然而，该实验步骤也可使用具有相似生长速率的品系进行重复；或者根据设备更换的需求（前提是所替换设备具有相同或类似功能），或根据所用菌株的特性对方法进行相应调整，因为某些菌株具有特定的培养和/或敏感性要求；相关信息可从 Caenorhabditis 遗传学中心（CGC）或WormBase网站获取。这些调整不应影响该方法的可重复性。

方案

注意：Escherichia coli OP50（E. coli OP50）菌株和Bristol N2野生型菌株可从美国明尼苏达大学的秀丽隐杆线虫遗传资源中心（CGC）获取，或由C. elegans实验室赠送。为确保研究人员安全，必须使用个人防护装备。尽管次氯酸钠和氢氧化钠等试剂的浓度较低，但仍需佩戴文中强调的推荐防护装备，以最大限度降低接触这些化学品可能带来的风险。

1. 糖原含量

1. 测试平板的制备
   1. 准备六个 60 mm × 15 mm NGM 琼脂平板²⁰ （10 mL 线虫生长培养基琼脂，NGM，制备方法如下所述） 补充表1每种线虫品系分别处理，并在室温下干燥1天。保持培养皿封闭，以防污染。
   2. 加入 200 µL 的 E. coli 每株使用4个60 mm × 15 mm NGM平板，在超净工作台中每板接种OD600约为0.600的OP50液体培养物。接种后将平板盖好，于37 °C孵育1天，再使用。
      注意：准备六块平板（步骤 1.1），但仅接种其中 4 块 E. coli OP50细菌。将剩余的两块平板置于4°C下保存，以备后续将线虫置于饥饿条件时使用。该分析可设置重复。
   3. 在测试当天，向每种菌株的两个（6 mm × 15 mm）NGM 琼脂平板中各加入 200 µL 0.025 M D-葡萄糖，这些平板此前已接种 E. coli OP50 细菌。在超净工作台中于室温下让平板晾干。
      注意：已接种大肠杆菌OP50的NGM琼脂平板 E. coli OP50细菌也可在酒精灯附近干燥，作为使用超净工作台的替代方法。
2. 同步化
   1. 同步前约3天，从维持用NGM琼脂平板上转移3-4块（3 cm × 3 cm）菌块至 秀丽隐杆线虫 布里斯托尔N2（野生型）在不同发育阶段（每份约500条线虫）转移至已接种的大培养皿（150 mm × 90 mm） E. coli OP50 菌株
   2. 将含有线虫的新培养板置于20 °C的受控环境中，并保持湿度 >95% 湿度下培养 3 天（72 小时，使大多数线虫发育至产卵成虫阶段）。
      注意：生长温度可能需要根据具体情况调整 秀丽隐杆线虫 正在使用的菌株
   3. 使用巴斯德吸管，从已准备好的平板中用蒸馏水收集线虫₂O，并转移至50 mL离心管中。
   4. 等待线虫在重力作用下沉淀（约15分钟），然后移除上清液。重复此过程3次以去除细菌。最后一次洗涤后，将体积调整至5 mL。
   5. 加入10 mL漂白液 （补充表1） 用手剧烈振荡约6分钟。
   6. 振荡结束后，立即用M9缓冲液将各管补至50 mL刻度。
   7. 以 1400 x 离心 g 3分钟，弃去上清液至5 mL，再加入45 mL M9缓冲液。重复此步骤4次。
   8. 最后一次洗涤后，将体积减少至15 mL，并在受控温度（20 °C）和湿度条件下维持>95%）约14小时。
      注意：同步化过程可通过通过产卵获取卵来替代：将约20条成年怀卵线虫转移至已接种200 µL大肠杆菌菌液的NGM平板（6 mm × 15 mm）中 E. coli OP50。让线虫产卵1天。之后移除孕虫，并等待卵孵化。
3. 线虫的制备
   1. 使用自动移液器将10 µL同步化线虫（步骤1.2.8）加入载玻片，计数线虫数量。计算为获得500–1000条线虫/µL所需移取的体积。
   2. 将500–1000条L1期同步化线虫（步骤1.2.8）转移至NGM琼脂平板（150 mm × 90 mm， 补充表1接种有 E. coli 以OP50细菌作为食物来源，直至其在20 °C下发育至幼虫第四阶段（L4）。
      注意：可以使用自动移液器转移线虫。若无自动移液器，可使用玻璃巴斯德移液管，并利用微量离心管标签或带刻度的玻璃移液管控制体积。
   3. 同步化48小时后²⁰：用M9缓冲液从平板上收集L4幼虫（补充表1），借助塑料巴斯德吸管转移至一个洁净的50 mL锥形管中，用新鲜M9缓冲液洗涤3次，或重复洗涤直至所有残留物去除 E. coli OP50 细菌被完全去除（在室温下）。
      注意：清洗步骤非常重要，因为部分线虫在操作过程中会经历饥饿状态。
4. 运行检测
   1. 从先前制备的每个新NGM琼脂平板（60 mm × 15 mm）中转移500–1000条L4期线虫（步骤1.3.1），置于20 °C培养48小时，直至实验当天。该方案将产生以下三个实验组，每组设两个重复图1):
      A-（饥饿）：线虫将在无食物的常规NGM琼脂平板上生长 E. coli OP50细菌；
      B-（常规）：线虫将在接种有常规NGM琼脂平板上生长 E. coli OP50细菌
      C-（高葡萄糖）：线虫将在接种有细菌的NGM琼脂平板上生长 E. coli OP50 细菌并含有 0.025 M D-葡萄糖。
   2. 在测试日（48小时后）：收集线虫，并用M9缓冲液短暂清洗三次（步骤1.2.2和1.2.3）
      注意：在此步骤中，制备添加 D-葡萄糖的 NGM 琼脂平板（步骤 1.3），并将其放置一旁，待添加线虫时使用。
      1. 碘染色：使用新鲜的M9缓冲液配制5%（v/v）卢戈氏碘溶液（碘/碘化钾溶液）。
         注意：卢戈氏碘液可从本地试剂供应商或药店获取，因此初始浓度可能有所不同。如有必要，需进行计算以配制5%（v/v）的溶液。
   3. 将每组约100 µL洗涤后的线虫（步骤4.2）转移至含有稀释卢戈氏碘液（5% v/v）的1.5 mL微量离心管中。使用自动移液器以1:5的比例将100 µL线虫转移至400 µL卢戈氏碘液中，随后在混合器上轻轻振荡5分钟。
      注意：若无混合器，可小心用手振荡微量离心管。
   4. 5 分钟后，将含有线虫和卢戈氏碘液的 1.5 mL 微量离心管在 1400 x g 3 分钟。
      注意：如果对L4阶段或更晚阶段的线虫进行此检测，可利用重力沉降代替离心。将微量离心管敞口置于实验台的管架上静置10分钟，直至所有线虫沉降至管底。
   5. 移去上清液，用1.0 mL新鲜M9缓冲液洗涤线虫。重复洗涤直至溶液中残留的碘完全去除（至少3次）。
   6. 最后一次洗涤步骤后，除去上清液，仅保留约100 µL的残留液体。用此残留液轻轻重悬线虫，并用于显微镜观察。
   7. 将约 50 µL 重悬的线虫溶液转移至显微镜载玻片上，盖上盖玻片。使用体视显微镜（1.5 倍）观察明场图像。
      注意：若无体视显微镜，可使用普通显微镜，并通过适配器连接手机摄像头（放大倍数3.4倍）拍摄图像。为避免因光线、亮度或曝光不同而产生误差，必须保持所有照片的手机摄像头设置一致。
5. 数据检查
   1. 定量数据：根据线虫的碘染色结果计算糖原含量。
      1. 从体视显微镜获取的图像中保存每组至少包含10条线虫的图片，格式为.jpeg文件，用于后续处理。请下载免费的ImageJ软件进行此操作。详细步骤见 补充文件1，补充图1，补充图2.
      2. 使用 ImageJ 软件打开 .jpeg 图像（可从 https://imagej.nih.gov/ij/download.html 免费下载）。点击分段线 并勾勒出线虫的轮廓（每次一条线虫）。点击 分析，然后选择 测量 以获得染色定量结果。数据将以表格中的平均值（Mean）形式展示。平均值表示根据每只线虫单位面积的染色密度计算得出的数据。
   2. 定性数据：使用体视显微镜获取各组线虫的图像，并对染色情况进行目视比较。如有需要，可建立评分系统以分析染色程度：0 分为无色；1 分为轻度染色；2 分为中度染色；3 分为重度染色。使用体视显微镜，通过手动计数器对每组至少约 10 条线虫进行人工计数。

图 1：C. elegans 中总糖原含量检测的示意图。本实验中用于进行糖原含量检测的实验流程示意图。请点击此处查看该图的放大版本。

2. 肠道通透性的评估

1. 线虫的制备
   1. 在同步化后约14小时（步骤1.2.8），将500–1000条处于第一幼虫期（L1）的线虫（步骤1.3.1及注释）转移至先前准备好的每个新的NGM琼脂平板（60 mm × 15 mm），并在20 °C下培养至实验当天。该时间安排将产生以下两个实验组：图2):
      A-（年轻）：线虫将在接种了细菌的NGM琼脂平板上生长 E. coli OP50 直至幼虫 4 期（L4）；
      B-（旧）：线虫将在接种了细菌的NGM琼脂平板上生长 E. coli OP50 直至第 7 天^th 成年日
      注意：线虫需培养至第7天^th 成年后的每一天都必须用M9缓冲液清洗，并转移至新的NGM琼脂平板（60 mm × 15 mm）上，每板加入200 µL E. coli OP50 细菌先前已接种用于食物补充及子代清除。较年轻的蠕虫在倾注过程中会漂浮，可通过移除上清液进行分离。蓝染蠕虫的比例随年龄增长而增加。然而，肠道通透性的评估可根据研究目的在任何阶段和年龄进行。
2. 运行检测
   1. 在测试当天，收集L4期线虫（步骤2.1.1之后2天）以及成虫期线虫于第7天^th 天（现在处于第9天）^th 天）用M9缓冲液（补充表1）并转移至已标记的1.5 mL离心管中。
   2. 以 1400 x 离心 g 3分钟，去除上清液，加入1.0 mL M9，轻轻混匀。重复此步骤3次以去除细菌。最后一次洗涤后，将体积调至500 µL。
   3. 使用自动移液器，将10 µL蠕虫沉淀液加入载玻片上，计数蠕虫数量。计算为获得100条蠕虫/µL所需移取的体积。
   4. Smurf染色：配制25%的赤藓红二钠盐（Erioglaucine disodium salt）补充表1) 溶液，使用蒸馏水配制。如有必要，可使用涡旋振荡器以促进溶解。
   5. 在新近已鉴定的微量离心管中，使用自动移液器加入含有100条线虫的体积，100 µL 25% 洒精蓝二钠盐溶液，200 µL E. coli OP50 并用 M9 缓冲液补足至终体积 500 µL。
      注意：亮蓝二钠的体积， E. coli 且线虫数量是固定的。M9缓冲液体积可变，可用于将最终体积调至500 µL。
   6. 在室温下，于混匀仪中避光振荡孵育3小时。
      注意：若无混匀仪，可每隔15分钟用手轻轻振荡微量离心管。
   7. 孵育3小时后，将1.5 mL微量离心管在1400 x g 3 分钟后，移除 1.0 mL 上清液，并用 1.0 mL M9 缓冲液洗涤线虫。
   8. 重复洗涤，直至溶液中的亮蓝FCF二钠盐完全去除。最后一次洗涤后，除去上清液，仅留下约250 µL的残留液体。用此残留液小心重悬线虫，并进行显微镜分析。
   9. 将重悬的线虫溶液中的约50条线虫转移至显微镜载玻片上，并加盖盖玻片。将载玻片置于-20 °C冰箱中孵育10分钟，以麻痹线虫。
      注意：另一种使蠕虫麻痹的方法是加入 10 µL 盐酸左旋咪唑溶液（10 mM； 补充表1) 并用盖玻片覆盖。
   10. 使用体视显微镜（1.5倍）在明场下观察并计数线虫的总数及完全染色的线虫数量。可通过连接适配器的手机相机（3.4倍）获取图像。为避免光线/亮度/曝光带来的误差，必须保持所有照片的手机相机设置一致。
3. 数据检查
   1. 定性数据：使用体视显微镜获取每组（L4 和 7）的图像^th 成虫期当天，通过肉眼比较线虫的染色情况。
   2. 使用体视显微镜计数蠕虫总数及蓝染蠕虫（smurf 蠕虫）数量。
   3. 以年轻线虫（L4期，作为对照组）和老年线虫（7天龄）中蓝染线虫的百分比表示结果^th 成年日
      A × X = 100 (%) × B
      X = 100 × B / A
      其中，A = 蠕虫总数
      B = 蓝斑蠕虫数量

图2整体肠道通透性检测示意图 秀丽隐杆线虫. (A) 秀丽隐杆线虫 制备。 (B) 用亮蓝二钠盐染色。 请点击此处以查看此图的放大版本。

结果

糖原含量检测为筛选多种测试条件提供了一种可靠且快速的方法，例如比较不同菌株对糖原合成或降解影响的研究。在本研究中，L4期线虫被分为三种不同的测试条件：禁食组、喂养组和葡萄糖富集组。该检测重复进行了三次，每次检测中每种条件均设置两个重复；代表性图像如下所示 图3每次检测后，使用体视显微镜观察经卢戈氏碘溶液染色的线虫，并对各组线虫的染色情况进行定性比较。在视觉观察上，禁食组（饥饿）线虫的染色强度较喂食组线虫弱 E. coli OP50（普通）以及喂食以下食物的 E. coli OP50 和 D-葡萄糖（高葡萄糖）。此外，以大肠杆菌 OP50 和 D-葡萄糖（高葡萄糖）喂养的线虫表现出最强的染色信号。

图 3：糖原含量检测的代表性图像。 通过碘染色法评估 C. elegans 中的糖原水平。显微图像显示了分别在（A）饥饿、（B）正常或（C）高葡萄糖条件下处理 48 小时的代表性 C. elegans 蠕虫。染色过程按照步骤 1.4 所述方法进行：将蠕虫浸入卢戈氏碘液/M9 缓冲液（1%）中染色 5 分钟。 请点击此处查看该图的放大版本。

肠道通透性实验结果显示出具有完整肠道的幼虫（L4）与老年虫（7^th 成年后的某一天）因衰老导致肠道膜受损（图4）。肠道的 秀丽隐杆线虫 是健康至关重要的组织，因其在消化和代谢中发挥关键作用，并作为应激反应和衰老调控的信号中心²¹在幼年蠕虫中，肠道的 秀丽隐杆线虫 由一层强韧的屏障构成，可防止肠道内容物泄漏。然而，随着这些蠕虫老化，肠道屏障功能逐渐减弱，对破坏的敏感性增加，这是由于细胞和微绒毛进行性退化以及衰老肠道内细菌积聚所致^21,22当年轻时 秀丽隐杆线虫 摄入染料二钠盐埃里奥蓝后，线虫的肠道被染色（图4A）。另一方面，可以观察到老年蠕虫出现染料外渗现象，染料渗透至蠕虫全身，表明肠道膜结构受损（图4B).

图4代表性图像 秀丽隐杆线虫 使用二钠盐埃里奥格劳辛染色。 显微图像显示 秀丽隐杆线虫 完整肠道（L4阶段）的线虫与肠道破裂的线虫（7^th 成虫期当天）。按照步骤2.2.4，将线虫浸入25%的赤藓红二钠盐溶液中染色3小时。 请点击此处以查看此图的放大版本。

补充图1：用于选择秀丽隐杆线虫（C. elegans）轮廓的ImageJ截图。 请点击此处下载该文件。

补充图2：用于计算平均值的ImageJ截图。 请点击此处下载该文件。

补充表 1：培养基、缓冲液和培养物配方。 本实验方案中使用的不同培养基、缓冲液和培养物的成分。请点击此处下载该文件。

补充文件 1：用于定量线虫糖原含量的 ImageJ 软件详细说明。请点击此处下载该文件。

讨论

综上所述，本实验方案利用卢戈氏碘染色法对单个秀丽隐杆线虫（C. elegans）的糖原含量进行定性评估：这是一种操作简便、结果可靠且快速的检测方法。卢戈氏碘染色是一种无标记且非侵入性的技术，可在亚细胞分辨率下获取分子数据，从而实现对单条线虫体内糖原含量变化的监测¹⁰。此外，该方法因所需设备极少而具有显著的成本优势。仅需使用显微镜或体视显微镜即可采集图像，且只要保持所有照片的光照/亮度/曝光设置一致，甚至可以使用手机摄像头轻松完成成像。同时，通过某些操作步骤的优化可进一步提升本方案的效果。例如，可使用酒精灯和重力沉降替代更复杂的实验设备（如超净工作台和离心机）。这些替代方案使该方法更加经济实惠，并便于广大研究人员使用。除科研人员外，教育工作者也可将该检测方法应用于学校教学，以直观展示与糖原储存及其生物合成相关的生理变化。

尽管传统的酶学检测方法可以定量糖原水平，但卢戈氏碘染色法在评估秀丽隐杆线虫（C. elegans）体内糖原储存方面展现出高灵敏度、准确性、低成本以及高通量的潜力。在本研究中，数据揭示了三种不同条件下染色程度的明显差异，提示喂养条件与染色强度之间可能存在相关性。换句话说，这表明不同喂养组间的糖原含量存在差异，因为染色强度与糖原含量呈正比。基于这些初步观察和证据，学生可以进一步探究和验证不同食物、饮料或化学试剂等各类因素是否也会影响线虫体内的糖原含量。

这种方法的一个缺点源于其依赖人工操作和主观判断。染色评估具有主观性，评分基于视觉观察，可能导致不同分析人员之间存在差异，从而在结果解读中引入波动。

本报告还展示了对肠道完整性的评估 秀丽隐杆线虫 使用染料赤藓红二钠盐。可借此评估肠道屏障功能的丧失情况 秀丽隐杆线虫 通过喂食一种无法经表皮吸收的蓝色染料来处理线虫。该检测可用于观察染料是否从肠道泄漏，此检测被称为“蓝精灵检测”（smurf test），因为动物会变得像卡通中的蓝精灵一样呈蓝色。²³该方法此前已被应用于 黑腹果蝇 和 斑马鱼 采用类似方法进行肠道评估^24,25。在 秀丽隐杆线虫 我们采用了与二钠盐亮蓝相同的该技术原理，该方法被认为是一种简单且可重复的技术，用于验证肠道完整性 秀丽隐杆线虫^19,26.

该方案可用于评估线虫衰老的诱导或延缓，以及验证物质在肠道中的潜在毒性 秀丽隐杆线虫 以简便快速的方式进行，无需使用复杂设备，使该方法具有经济可行性^19,27除了在科学研究中的应用外，教师还可将该检测方法用于教育机构的教学目的，以探究肠道通透性的变化 秀丽隐杆线虫通过一个简单的实验，可以研究关于衰老的假设以及化学试剂对线虫肠道屏障的影响。

该实验可根据研究目的调整使用其他 C. elegans 品系和幼虫阶段，前提是所替换的品系具有相同或类似功能，以保持方法的可重复性。为获得成功的分析结果，按照方案所述，对老化线虫进行 3 小时的染色至关重要。随后，洗去多余染料的步骤是该方法中的关键环节，必须小心操作，避免线虫随上清液被一同移除。在评估物质效应时，该方案的一个局限性在于难以找到一种易于获取且可有效裂解线虫肠道膜的阳性对照。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1.5 mL 微量离心管	本地供应商	-
37度培养箱	KS 4000i	97014-816
50 mL 一次性塑料离心管	本地供应商	-
6 cm 培养皿	本地供应商	-
细菌学用琼脂	丁â云母石í云母 Contemporânea Ltda.	9002-18-0
秀丽隐杆线虫 Bristol N2（野生型）	美国明尼苏达秀丽隐杆线虫遗传中心（CGC，美国明尼苏达州）	-
CaCl₂	丁â云母石í云母 Contemporânea Ltda.	10035-04-8
胆固醇	Sigma-Aldrich 巴西有限公司	57-88-5
D-(+)-葡萄糖无水物	霓虹	50-99-7
蒸馏水	本地供应商	-
二钠盐亮蓝	Sigma-Aldrich 巴西有限公司	3844-45-9
大肠杆菌 OP50	美国明尼苏达州秀丽隐杆线虫遗传中心（CGC）	-
超净工作台	Mylabor
培养箱	北美松下医疗公司，MIR-254-PA	-
KH2PO4	丁â云母石í云母当代ânea Ltda.	7778-77-0
盐酸左旋咪唑	RIPERCOL L 150F	-
卢戈氏碘液	Sigma-Aldrich 巴西有限公司	L6146
MgSO4	合成	S1063-01-AH
微型离心机	Centrifuge 5425R Eppendorf SE，德国
Na2HPO4	丁â云母 Quí云母 Contemporânea Ltda.	7558-79-4
NaCl	丁â云母石í云母当代ânea Ltda.	7647-14-5
制霉菌素	Sigma-Aldrich 巴西有限公司	N6261
蛋白胨细菌学	êxodo científica	91079-38-8
体视显微镜	Leica S8 Apo 体视显微镜 (Sã巴西圣保罗
硫酸链霉素	Estreptomax	-