一种用于现场和实验室条件下诊断人畜共患线虫的简易粪便漂浮法

摘要

本研究描述了一种浮选法的应用，用于鉴定2017年至2021年在墨西哥野外条件下采集的犬类粪便样本中检测到的Toxocara canis和Ancylostoma spp.。

摘要

在野外条件下，诊断具有人畜共患潜力的犬类寄生虫（如Toxocara canis和Ancylostoma caninum）通常较为困难，原因是在墨西哥的农村和郊区难以获得实验室资源。本研究旨在检测2017年至2021年间在墨西哥野外条件下采集的犬类粪便样本中的T. canis和Ancylostoma spp.。样本量计算结果显示，需在全国范围内纳入534只犬作为研究目标。

样本直接从直肠或排便后的地面采集。样本储存于单独的密封塑料袋中，并置于 4 °C 保存。在野外和实验室条件下均配制了饱和氯化钠溶液（比重 [SpG] 1.20）。采集后 3 天内，取 2–4 g 粪便，通过将每份粪便样本悬浮于盐溶液中，采用漂浮法检测寄生虫。粪便与漂浮液混合后，使用金属勺压碎。

达到均匀状态后，将粪便样本通过筛网倒入新的塑料杯中，静置10-15分钟。使用灭菌的接种环从混合物上层取三滴样本。将载玻片置于显微镜下，由经过培训的寄生虫学家鉴定寄生虫。共对1,055只犬的粪便样本进行了显微镜检查。Ancylostoma spp. 阳性样本数为833例（检出率为78.95%），T. canis阳性样本数为222例（检出率为21.04%）。这些结果表明，在实验室和现场条件下，采用粪便寄生虫学检测技术识别墨西哥城乡地区犬类体内的动物源性线虫具有重要意义。

引言

胃肠道寄生虫是影响犬类最常见的健康问题之一¹。据估计，全球约有7亿只家养犬，其中约1.75亿只属于自由活动犬²。犬与人类之间共享的寄生虫种类超过60种，表明犬可能是这些寄生虫对人类传播的感染源³。Toxocara canis 和 Ancylostoma caninum 是两种可感染犬类并意外感染人类宿主的寄生虫。目前已有若干研究探讨这些蠕虫在墨西哥的生存与繁殖区域。Toxocara 在犬类中的流行率在美国、墨西哥、中美洲及加勒比地区差异较大，范围从0%到超过87%⁴。此前已在墨西哥报道过Toxocara canis、Ancylostoma spp. 以及其他犬类寄生虫种类的存在^{5,6,7,8,9,10,11....}

方案

墨西哥国立自治大学批准了犬只的使用与护理。

1. 粪便样本的采集

注意：在兽医或动物主人的协助下对犬只进行操作。

1. 对于野狗（图1A）或紧张的动物，应在排便后立即或排便后不超过10分钟内从地面采集样本。
2. 用水或凡士林润滑外科手套或薄壁聚乙烯袋。若需从直肠采集粪便样本，应佩戴外科手套或薄壁聚乙烯袋。
3. 从每只狗采集至少2 g的粪便（图1B）。
4. 按以下方式标记个体粪便样本：日期、地点（使用Google地图获取全球定位系统[GPS]坐标）、为每只动物分配一个识别编号、狗的大致年龄、性别、品种、室内或室外（野狗）。
5. 用紧实的结扎方式封好装有粪便样本的袋子。若粪便样本在采集后3-4小时内无法进行分析，应将样本袋冷藏（4-8 °C）。

2. 用于现场诊断的饱和盐溶液的制备

注意：如果无法获得或难以使用天平、量具、炉具或燃气来加热水，可使用水、普通食盐、一个塑料制12盎司（355 mL）杯和一个1升装空塑料汽水瓶，轻松制备饱和盐水溶....

结果

本研究描述了用于鉴定犬弓首蛔虫（T. canis）和钩口属（Ancylostoma spp.）的粪便采集及粪便寄生虫学检测方法。采用改良的简易粪便漂浮法检测犬肠道蠕虫卵的依据在于，该技术成本低廉，所用溶液、仪器和材料均价格较低。因此，该方法具有较高的样本处理能力，可在短时间内处理多个样本。此外，简易粪便漂浮法操作简便，且具有相对较高的敏感性。

样本量及动物选择主要基于便利性原则，由动物主人的配合意愿以及接近流浪犬的安全性决定。本研究在2017年开始的4年期间，采用漂浮法检测墨西哥家犬（Canis lupus familiaris）体内Ancylostoma spp. 和 T. canis 的发生情况和感染频率。共采集1,638只犬的粪便样本，并进行显微镜检查。其中1,235只犬对T. canis 和 Ancylostoma spp. 呈阳性。采用漂浮法的目的之一是验证该方法在评估Toxocara 或 Ancylostoma.......

讨论

T. canis 和 Ancylostoma spp. 等线虫可寄生于犬的小肠内，并具有传播给人类的潜在风险。T. canis 在幼犬中引起的临床症状较为严重，表现为生长迟缓、呼吸系统问题或消化道病变²⁸。在成年犬中，感染通常较轻微。诊断主要依赖于在粪便样本中检出特征性虫卵。该病是临床开具驱虫药物治疗犬只的常见指征之一²⁹。了解Toxocara的流行病学时，必须认识到该寄生虫可通过胎盘在出生前由母犬传播给幼犬，也可在分娩后通过哺乳以乳源性感染的方式传播。人类若摄入感染性虫卵即可感染T. canis，传播途径包括接触被污染的土壤或感染犬只的毛发。在此情况下，人类为转续宿主，虽无寄生虫繁殖过程，但虫卵释放出的幼虫仍可能造成损害，尤其在儿童中更为显著³⁰。

犬类感染钩虫Ancylostoma spp. 的途径包括摄入幼虫或幼虫经皮肤侵入。幼.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
3 节 1.2 V AA 可充电电池	Energizer		在零售商店有售
本生灯	Viresa	FER-M224
一次性 12 盎司玻璃杯	Uline Mexico	S-22275	在零售商店有售
载玻片	Velab, Mexico	VEP-P20
接种环	VelaQuin, Mexico	CRM-5010PH
光学显微镜	VelaQuin, Mexico	VE-B2
打火机	Bic	J25	在零售商店有售
一个塑料杯（12 盎司）	Amazon	ASIN B08C2CRHSH	可以是任何厨房用可重复使用的塑料杯
塑料杯 （大小如骰子或尿液样本杯），直径 5.5 cm，高 8.5 cm，共两个	Amazon	Layhit-Containers-ZYHD192919	可以是任何厨房用可重复使用的塑料杯
塑料滤网，直径 10 cm	Ecko	ASIN B00TUAAVWI	可以是任何厨房用塑料滤网
苏打水瓶	Coca-Cola	1 升	在零售商店有售
勺子	Amazon Basics	ASIN B00TUAAVWI	可以是任何厨房用勺子
食盐	La Fina		在零售商店有售