在此,我们演示如何将原代海马神经元的转染与活细胞共聚焦成像相结合,以分析病理蛋白诱导的轴突运输变化,并鉴定介导这些效应的分子机制通路。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 0.4% 台盼蓝 | Gibco | 15250-061 | |
| 1.7 mL 微量离心管 | DOT | RN1700-GMT | |
| 2.5% 胰蛋白酶 | Gibco | 15090-046 | |
| 3 mL 带 21 G 针头的注射器 | Fisher | 14-826-84 | |
| 10 mL 塑料注射器 | Fisher | 14-823-2A | |
| 14 G 针头 | Fisher | 14-817-203 | |
| 15 G 针头 | Medline | SWD200029Z | |
| 16 G 针头 | Fisher | 14-817-104 | |
| 18 G 针头 | Fisher | 14-840-97 | |
| 22 G 针头 | Fisher | 14-840-90 | |
| 32% 多聚甲醛 | Fisher | 50-980-495 | |
| AlexaFluor 647 山羊抗兔 IgG (H+L) | Invitrogen | A21244 | RRID:AB_2535813 |
| 两性霉素 B | Gibco | 15290-026 | |
| Arruga 微型胚胎囊钳,弯型;4" | Roboz | RS-5163 | 高压灭菌 |
| B-27 补充剂 (50x),无血清 | Gibco | A3582801 | |
| BioCoat 24 孔多聚赖氨酸培养板 | Fisher | 08-774-124 | |
| 硼酸 | Sigma | B6768-1KG | |
| 氯化钙 | Sigma | C7902 | |
| Castroviejo 3 1/2" 长 8 x 0.15 mm 角度尖头剪刀 | Roboz | RS-5658 | 高压灭菌 |
| 细胞计数装置 | 自动或手动 | ||
| 配备活细胞培养室附件的共聚焦显微镜 | |||
| 共聚焦成像软件 | |||
| D-(+)-葡萄糖 | Sigma | G7528 | |
| DNase I (Worthington) | Fisher | NC9185812 | |
| 杜氏磷酸盐缓冲液 | Gibco | 14200-075 | |
| EGTA | Fisher | O2783-100 | |
| Fatal-Plus 溶液 | Vortech Pharmaceuticals, LTD | NDC 0298-9373-68 | 戊巴比妥钠;也可使用其他经批准的安乐死方法 |
| 胎牛血清 | Invitrogen | 16000044 | |
| 庆大霉素试剂溶液 | Gibco | 15710-072 | |
| GlutaMAX | Gibco | 35050-061 | 谷氨酰胺替代物 |
| 汉克氏平衡盐溶液 | Gibco | 24020-117 | |
| ImageJ 版本 1.51n | ImageJ | Life-Line 版本 2017 年 5 月 30 日:https://imagej.net/software/fiji/downloads | |
| KymoAnalyzer (版本 1.01) | Encalada 实验室 | 软件包包含全部 6 个宏:https://www.encalada.scripps.edu/kymoanalyzer | |
| Lipofectamine 3000 | Invitrogen | 100022050 | 需与 P3000 转染增强试剂共同使用 |
| 氯化镁 | Fisher | AC223211000 | |
| MES 一水合物 | Sigma | M8250 | |
| 微型解剖剪刀 3.5" 直型尖/尖 | Roboz | RS-5910 | 高压灭菌 |
| Neurobasal Plus 培养基 | Gibco | A3582901 | |
| Neurofascin (A12/18) 小鼠 IgG2a | 加州大学戴维斯分校/美国国立卫生研究院 NeuroMab | 75-172 | RRID:AB_2282826;250 ng/mL;适用于大鼠神经元,不适用于小鼠神经元 |
| Neurofascin 186 (D6G60) 兔 IgG | Cell Signaling | 15034 | RRID:AB_2773024;500 ng/mL;适用于小鼠神经元,尚未在大鼠神经元中测试 |
| 新生小牛血清 | Gibco | 16010-167 | |
| Opti-MEM | Gibco | 31985-062 | |
| P3000 | Invitrogen | 100022057 | |
| 培养皿,100 x 10 mm 玻璃 | Fisher | 08-748B | 用于解剖;高压灭菌 |
| 培养皿,100 x 20 mm 玻璃 | Fisher | 08-748D | 用于放置子宫角;高压灭菌 |
| 多聚-D-赖氨酸 | Sigma | P7886-100MG | |
| 聚丙烯锥形离心管 (15 mL) | Fisher | 14-955-238 | |
| 聚丙烯锥形离心管 (50 mL) | Fisher | 14-955-238 | |
| 氯化钾 | Fisher | P217-500 | |
| 乙酸钠 | Sigma | S5636 | |
| 十水合四硼酸钠 | VWR | MK745706 | |
| 直刃手术剪,钝/尖 | Fisher | 13-810-2 | 高压灭菌 |
| 注射器滤器,0.22 µm | VWR | 514-1263 | |
| 齿状拇指敷料钳,4.5" | Roboz | RS-8100 | 高压灭菌 |
| µ-Slide 4 孔玻璃底培养皿 | Ibidi | 80427 |
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