该方案以骨肉瘤小鼠模型中益气解毒汤的煎剂配制及灌胃技术为例，提供了详细的标准化操作流程。方案阐述了动物保护措施，提升了研究数据的可靠性，为探究中药煎剂方剂的治疗效果及分子作用机制提供了有效的研究策略。 体内.
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摘要
摘要
汤剂是中药最常用的剂型，在临床应用中已有数千年历史，通常通过口服给药，具有起效快、易吸收以及根据患者具体证候进行个体化治疗的特点。汤剂的质量直接关系到中药的临床疗效，因此，汤剂制备过程的标准化对于避免因主观因素导致的煎煮质量差异具有重要意义。同时，由于临床试验存在局限性，医学研究中常采用携带人类疾病的小型动物（如小鼠）作为模型，以探讨不同干预措施（包括中药汤剂）的治疗效果及其综合作用机制。 因此，作为一种重要的经口给药方式，熟练的灌胃技术对于避免潜在的食管损伤和药物溢出尤为关键，可确保每只模型动物接受等量的药物，从而获得准确的实验结果。此外，规范的汤剂制备方法与熟练的灌胃操作策略对于保护动物福利、减少动物使用数量也至关重要。本文以益气解毒汤在骨肉瘤小鼠模型中的应用为例，报道了一套详细的汤剂制备与灌胃技术标准化流程，并通过肿瘤体积评估其疗效。该方案将最大限度地保护实验动物，提高研究数据的可靠性，为今后研究中药汤剂的治疗效果及其分子机制提供有效的技术策略。 体内.
引言
汤剂是中药最常用的剂型，也是液态药物制剂1,2。中药汤剂的制备方法是将药材加水浸泡后煎煮，再经过滤除去药渣而成。
由于汤剂处方可根据临床需要进行个体化调整，尤其符合中医循证治疗的特点，这种剂型 通过 经口给药在临床实践中已应用数千年，具有特定且不可替代的优势3,4汤剂的质量与临床疗效直接相关。 因此，汤剂处方必须依据标准化煎煮方法的原则进行制备，以确保有效成分得到最大程度的提取和保护3同时，饮片是临床使用中药材的主要形式；处方用饮片的质量标准和生产方法必须符合《中华人民共和国药典》的规定。2此外， prescribed decoction-ready medicines 必须用冷水浸泡至少30分钟，然后在专用药锅中加热煎煮。5研究表明，大部分有效成分可通过煎煮两次提取出来，且 医疗机构中药煎药室管理规范亦规定中药煎煮应进行两次4,6,
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方案
本方案以益气解毒汤为例，详细描述了在骨肉瘤模型小鼠中进行灌胃操作的技术。实验选用4周龄雄性裸鼠（BALB/c nude），饲养于上海中医药大学实验动物中心的SPF级动物房。所有动物实验均经上海中医药大学动物管理与伦理委员会批准，遵循《实验动物伦理准则》（动物伦理批准编号：PZSHUTCM2304060007），并严格依照国际有关实验动物的管理要求进行。
1. 材料
- 准备以下材料：中草药（人参 42 g、Hedyotis diffusa 52.5 g、黄芩 31.5 g）、1 mL 注射器和 12G/55 mm 弯头灌胃针（图 1）。
2. 剂量确定
- 按以下方法计算每日剂量：标准体重为60 kg的成人的每日剂量为人参12 g， Hedyotis diffusa 15 g，黄芩9 g，共计36 g饮片，即0.6 g饮片/kg体重。参照成人体重60 kg与小鼠体重25 g之间的体表面积换算，等效剂量为12倍，低剂量为6倍，高剂量为24倍11，以及我们的初步数据，在本研究中对小鼠采用20倍剂量比例的益气解毒汤，因此小鼠给药剂量为12 g煎煮药材/kg体重。
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结果
益气解毒汤对骨肉瘤生长的抑制作用 在体 在胫骨内异种移植骨肉瘤小鼠模型中评估了疗效，该模型通过将143B骨肉瘤细胞注射至裸鼠胫骨内构建。从注射143B细胞的第二天开始，对益气解毒方组小鼠进行灌胃给药，持续28天；对照组小鼠给予生理盐水。所有小鼠在28天后处死。结果显示，与对照组相比，益气解毒方组小鼠的肿瘤体积显著减小（图5).
图 1：煎煮用耗材。 可用于煎煮的药材包括（A）人参、（
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讨论
中药处方中草药的临床疗效在很大程度上与给药剂量和剂型相关；因此，在临床实践中建立标准化的煎煮方法和熟练的给药流程十分必要，同时也可提高实验结果的可靠性。
本研究首先提供了一套针对临床实践中中医药常用中药饮片标准化煎煮的详细方案，有助于指导人们科学地煎煮药物，实际提升汤剂的质量以及中药的临床疗效；因此，一旦实现标准化，将提高中药在临床应用中疗效的准确性和一致性。
灌胃法作为一种口服给药方式，已广泛应用于临床前研究，并适用于多种实验动物，包括小鼠、大鼠和兔子，具有操作简便、剂量控制准确以及能够模拟临床给药途径等优点13。然而，若在未麻醉的情况下将动物固定于不正确的位置，动物可能会剧烈挣扎，这不仅威胁研究人员的健康安全，还可能降低实验的可靠性。因此，建立标准化的灌胃操作方法至关重要，可有效减少此类风险，避免药液误入气管或造成食管损伤，进而导致动物死亡和实验失败。
本研究选择灌胃途径将汤剂配方给予骨肉瘤模型小鼠，因为该方法可精确控制.......
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披露
作者声明无任何利益冲突。
致谢
本研究工作得到了以下资助：（1）国家自然科学基金（81973877 和 82174408）；（2）国家重点研发计划&中国国家重点研发计划（2020YFE0201600）、上海市优先建设研究重点中心项目（2022ZZ01009）、上海市医院中药制剂产业转化协同创新中心项目、上海中医药大学校内预算科研项目（2021LK047）
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 143B 细胞系 | ATCC | CRL-8303 | 骨肉瘤细胞系 |
| 麻醉机 | 深圳瑞沃德生命科技有限公司 | R500IP | 小鼠麻醉设备 |
| 自动细胞计数仪 | 上海司莫生物技术有限公司 | IC1000 | 细胞计数 |
| BALB/c 裸鼠 | 上海斯莱克实验动物有限责任公司 | 雄性 | 实验动物 |
| 积雪草 | 上海养和堂中药饮片有限公司 | 20230606 | 可煎煮中药饮片 |
| 基底膜基质 | 上海优宁生物科技有限公司 | 356234, BD, Matrigel | 重悬细胞 |
| 离心管（15 mL） | 上海悦年生物科技有限公司 | 430790, Corning | 离心细胞 |
| 弯头灌胃针（12 号/55 mm） | 瑞沃德生命科学有限公司 | C21014-12 | 胃灌注装置组件 |
| 纱布 | 海氏海诺集团有限公司 | LC45 | 药液过滤 |
| 人参 | 上海万仕诚药业有限公司 | 20220704-2 | 可煎煮中药饮片 |
| 白花蛇舌草 | 上海养和堂中药饮片有限公司 | 2023071107 | 可煎煮中药饮片 |
| 异氟烷 | 深圳瑞沃德生命科技有限公司 | VETEASY | 小鼠麻醉 |
| 微量注射器 | 上海高鸽工贸有限公司 | 0-50 μL | 向胫骨内精确注射细胞 |
| 磷酸盐缓冲液 | 碧云天生物技术 | ST447 | 洗涤人骨肉瘤细胞 |
| 橡胶圈 | 上海恒飞生物科技有限公司 | XPJ | 固定纱布于量杯上 |
| 注射器（1 mL） | 上海密莎瓦医疗工业有限公司 | SBM0040 | 胃灌注装置组件 |
| 胰蛋白酶（0.25%） | 上海悦年生物科技有限公司 | 25200056, Gibco | 细胞胰酶处理 |
参考文献
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12(2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specifi....
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