勘误:RNA干扰技术在松材线虫 Bursaphelenchus xylophilus 中的应用

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2024年4月16日

本文内容

摘要

已发布以下文章的更正声明: RNA干扰技术在松材线虫 Bursaphelenchus xylophilus 中的应用。摘要和实验方案部分已更新。

方案

已发布更正:  RNA干扰技术在松材线虫 Bursaphelenchus xylophilus 中的应用。摘要部分来自:

本文概述了一种针对松材线虫(B. xylophilus)ppm-1基因的RNA干扰新方案,该基因已被报道在其他致病性线虫的发育和繁殖过程中发挥关键作用。为进行RNA干扰,通过聚合酶链式反应(PCR)将T7启动子连接至目标片段的5′端,并通过体外转录合成双链RNA(dsRNA)。随后,通过将线虫浸泡在含有合成神经刺激剂的dsRNA溶液中实现dsRNA递送。将同步化的松材线虫幼虫(约20,000条)洗涤后,置于含dsRNA(0.8 µg/mL)的浸泡缓冲液中,在25 °C避光条件下孵育24小时。

到 

本文概述了一种针对松材线虫(B. xylophilus)ppm-1基因的RNA干扰新方案,该基因已被报道在其他致病性线虫的发育和繁殖过程中发挥关键作用。在RNA干扰实验中,通过聚合酶链式反应(PCR)将T7启动子连接至目标片段的5′端,并通过体外转录合成双链RNA(dsRNA)。随后,通过将线虫浸泡在含有合成神经刺激剂的dsRNA溶液中实现dsRNA递送。将同步化的松材线虫幼虫(约20,000条)洗涤后,置于含dsRNA(0.8 µg/μL)的浸泡缓冲液中,在25 °C避光条件下孵育24小时。

方案部分来自

3. 通过浸泡法进行RNAi

  1. 将4 µL的5倍浸泡缓冲液(0.05%明胶,5.5 mM KH2PO4,2.1 mM NaCl,4.7 mM NH4Cl,3 mM亚精胺)与dsRNA及ddH2O混合,使总体积为20 µL,RNA终浓度为0.8 µg/mL。

3. 通过浸泡法进行RNAi

  1. 将4 µL的5倍浸泡缓冲液(0.05%明胶,5.5 mM KH2PO4,2.1 mM NaCl,4.7 mM NH4Cl,3 mM亚精胺)与dsRNA及ddH2O混合,使总体积为20 µL,RNA终浓度为0.8 µg/μL。

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