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研究文章

干旱胁迫下表达拟南芥DREB1A的转基因甘蔗光合作用增强及水分利用效率提高

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DOI:

10.3791/67861

2025年10月3日

本文内容

摘要

本研究评估了转录因子 Arabidopsis DREB1A 介导的转基因甘蔗抗旱性。在胁迫条件下,观察到光合作用增强、水分利用效率提高以及生物量积累增加。其中,DR-21 株系表现出最高的 DREB1A 表达水平,显著提升了抗旱能力。该研究结果揭示了相关分子机制,为在水资源有限地区培育抗逆性强的甘蔗品种提供了潜在策略。

摘要

干旱胁迫严重限制了甘蔗的生产力,因此需要培育抗逆性强的品种以实现农业的可持续发展。本研究旨在通过导入由胁迫诱导型 rd29A 启动子调控的 Arabidopsis DREB1A 基因,提高甘蔗的抗旱性。通过粒子轰击介导的转化方法获得了转基因甘蔗株系,并在受控条件和干旱胁迫条件下,通过分子、生理及农艺性状评估对其进行了系统分析。

分子分析证实了外源基因的稳定整合,转基因株系中DREB1A的表达量相较于野生型植株最高增加了10倍。生理学评估显示,在60%田间持水量(FC)的干旱胁迫条件下,转基因株系的光合速率(PN)比非转基因对照高224–270%,气孔导度(gs)提高84–167%,相对含水量(RWC)提升25–31%。此外,转基因甘蔗叶片表现出更优的渗透调节能力和水分利用效率。农艺性状评价进一步表明,植株生长和生产力显著改善。在干旱胁迫(60% FC)下,转基因株系的茎秆高度增加76–109%,茎秆直径增大71–86%;地上部生物量增加39–87%,根系生物量提高65–103%。

此外,在60%田间持水量(FC)条件下,转基因植株的糖度(Brix值)——反映蔗糖积累的指标——提高了36–55%。这些结果明确了DREB1A基因表达、生理抗逆性增强与干旱条件下农艺性状改善之间的显著相关性。DREB1A表达型转基因甘蔗在干旱胁迫下维持较高光合作用活性、更优的水分利用效率以及更多的生物量积累,凸显了其作为培育抗旱甘蔗品种遗传策略的潜力。本研究为解析干旱耐受性的分子机制提供了新的见解,并为保障水资源匮乏地区甘蔗的可持续种植提供了有前景的途径。

引言

甘蔗(Saccharum officinarum L.)是巴基斯坦第二大经济作物,主要因其富含蔗糖而被广泛种植。然而,由于周期性缺水,其产量往往难以达到最佳水平1,2。甘蔗属于禾本科(Poaceae)植物,归类于黍亚科(Panicoideae)中的PACCAD分支3。该分支的植物通常被称为暖季型禾草,具有C4光合作用系统4。甘蔗的主要CO2固定途径为C4光合作用,其光呼吸作用极低5。与C3禾草相比,C4禾草(如甘蔗)能够固定更多的CO2,产生更高的蔗糖含量,并表现出更优的氮素利用效率(NUE)和水分利用效率(WUE)6,7,8。然而,甘蔗对土壤水分的需求较高9,10,<....

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方案

生成 rd29A: DREB1A 表达载体(图1)
全长 DREB1A 开放阅读框(ORF,651 bp)从 拟南芥 L. 使用包含基因特异性引物的cDNA BamH我与 EcoRI型限制性位点:正向5/-GGCGGATCCATGAACTCATTTTCTGCT-3/ 和反向 5/-GGCGAATTCTTAATAACTCCATAACGA-3/同样地, rd29A 启动子(499 bp)从 拟南芥 使用含引物的基因组 DNA Kpn我与 BamHI位点:正向5/-GCGGGTACCCCTATTAGAACGATTAAGGAG-3/ 和反向 5/-GGCGGATCCGGTGGTTCCTCTGTTTGATCC-3/PCR 反应体系为 25 µL,包含 2.5 µL 10x PCR 缓冲液、1.5 mM MgCl₂2,每种dNTP 0.2 mM,每种引物0.4 µM,Taq DNA聚....

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结果

甘蔗转基因株系的分子表征
构建了 rd29A:DREB1A 表达盒,并将其克隆至可在植物中表达的双元载体 pGA482 中(图1),随后利用基因枪介导的转化技术将该载体导入甘蔗基因组,成功获得了转基因甘蔗幼苗(如图2所述)。通过扩增分别特异于nptII标记基因和DREB1A基因的750 bp和651 bp片段,确认了外源基因在甘蔗株系中的存在。在野生型甘蔗植株中未检测到这些片段(图3A、B)。经PCR确认的转基因甘蔗植株(T0代)与野生型植株一同在温室中培养至成熟。选取5个转基因株系(Dr-2、Dr-4、Dr-7、Dr-20和Dr-21)进行水分胁迫处理,并比较转基因植株与野生型植株在水分胁迫条件下DREB1A基因的相对表达模式。所有转基因株系的DREB1A相对表达水平均显著.......

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讨论

由于全球干旱易发地区的持续扩大,培育植物的水分胁迫耐受性至关重要。作为一种潜在可行的生物技术途径,我们研究了DREB1A在转基因甘蔗品系中对水分胁迫耐受性的作用。已有研究报道,DREB1A转录因子能够诱导多个赋予非生物胁迫耐受性的基因表达28,38,39,40,41。在此基础上,我们进一步探究了拟南芥DREB1A基因在转基因甘蔗品系中赋予干旱耐受性的作用。

在不同水分胁迫水平下生长时,表达DREB1A的甘蔗植株比野生型植株具有更高的生长速率。所有遭受水分胁迫的转基因植株表型正常,与野生型植株相似。与我们的研究结果类似,许多报道表明,在rd29A启动子驱动下,DRE.......

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披露

作者声明无任何利益冲突。

致谢

阿卜杜勒拉赫曼·宾特·努拉公主大学研究人员支持项目编号(PNURSP2025R39),阿卜杜勒拉赫曼·宾特·努拉公主大学,利雅得 沙特 阿拉伯半岛

数据可用性:
所有数据均在本文中提供。

....

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
克隆载体 pTZ57R/TFermentas, 立陶宛维尔纽斯
红外气体交换分析仪Bio-Rad, 美国加利福尼亚州
渗透压仪Bio-Rad, 美国加利福尼亚州
PCR 仪Bio-Rad, 美国加利福尼亚州
PDS-1000/He 基因枪ThermoFisher Scientific Inc, 美国
实时荧光定量 PCR 仪ThermoFisher Scientific Inc, 美国
RevertAid cDNA 合成试剂盒CI-340, CID Bio-Science, Inc., 美国
Scholander 型压力室Skye Instruments, 英国伯明翰兰德林多威尔斯
TRIzol 试剂Wescor-5500, 美国犹他州洛根

参考文献

  1. Ali, S., et al. Climate change and its impact on the yield of major food crops: evidence from Pakistan. Foods. 6 (6), 39(2017).
  2. Farooq, N., Gheewala, S. H. Water use and deprivation potential for sugarcane cultivation in ....

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重印与许可

标签

DREB1A