我们提出一种用于分析纵向研究中用户自定义感兴趣区域(ROI)的方法 体内 大鼠桡骨缺损模型。该方法实现了不同支架材料之间的比较分析,此前由于显微计算机断层扫描(µCT)扫描视野、样本取向以及支架本底存在的差异,此类比较受到限制。
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我们提出一种用于分析纵向研究中用户自定义感兴趣区域(ROI)的方法 体内 大鼠桡骨缺损模型。该方法实现了不同支架材料之间的比较分析,此前由于显微计算机断层扫描(µCT)扫描视野、样本取向以及支架本底存在的差异,此类比较受到限制。
骨体积的微型计算机断层扫描(µCT)成像分析是纵向体内研究中评估骨再生潜力与结果所必需的定量工具。现有的骨组织分割方法利用可视化软件对整体骨组织进行µCT分割,并对复杂的解剖结构进行配准。这些分割方案为分割、配准和分析提供了稳健且高精度的方法,但在用户自定义感兴趣区域(ROI)分析方面存在局限性。本文提出了一种扩展上述方法的实验方案,可实现围绕临界尺寸骨缺损区域的用户自定义ROI骨体积分析。该围绕缺损区域的用户自定义ROI可在时间序列上进行分析,适用于体内纵向研究。在此,我们分析了三例各自植入聚己内酯(PCL)对照支架的大鼠样本的µCT图像。三名使用者(2名有经验者和1名新手)在0周和6周时间点对模型进行分析,以展示在纵向研究过程中测量围绕临界尺寸缺损的ROI的能力。
临界尺寸骨缺损在骨科治疗管理中构成重大的临床挑战。根据 ASTM F2721 标准,临界尺寸缺损是指长度为所关注骨骼直径 1.5 至 2 倍的骨缺损1。传统上,此类缺损的修复依赖自体移植和同种异体移植,但受限于手术费用、继发手术的相关风险以及所需骨移植物的体积2。目前的骨再生技术主要集中于使用同种异体和异种来源的支架材料,通过优化其力学性能、生物相容性、生物活性、促血管生成潜力及降解特性,以实现骨传导和骨诱导效应3,4,5。研究的生物材料广泛涵盖生物陶瓷、生物聚合物、金属及其他复合材料6。这些生物材料的不同形式均在体外(in vitro)和体内(in vivo)进行测试,以评估其作为骨再生支架的潜力。
µCT 是用于评估啮齿类动物模型骨形态、结构及微结构的非侵入性、高精度成像的金标准7,8,9。该成像技术已被用于描述骨折愈合模型中骨再生的纵向、in vivo 进展过程10。已有方法被开发用于标准化从 µCT 扫描中对皮质骨和松质骨进行定量分析9。研究人员已开发出半自动化的分割工作流程,利用 commercially available 可视化软件对具有复杂解剖结构的完整骨骼进行分割11。这些方法使得不同经验水平的用户均能采用简便、易操作的方式获得标准化且可重复的结果。然而,这些方法在针对用户自定义 ROI 的研究能力方面仍存在局限性。
在此,我们介绍一种在现有方法基础上改进的实验方案,可实现对围绕骨缺损临界尺寸区域的用户自定义感兴趣区域(ROI)骨体积进行纵向分析 体内 使用可视化软件对大鼠模型进行分析。在纵向研究的各周之间建立一致的配准和感兴趣区域(ROI)选择方法,对于开发可靠的实验方案至关重要。将最初的时间点作为基线,用于后续各周数据的配准,以确保三维实体模型方向的一致性。在此配准基础上,可从叠加的实体模型中选取对应的µCT图像切片,覆盖临界尺寸缺损区域。通过切片位置以及区域内切片数量的比较,进一步验证ROI的一致性。随后各周可复制基线模型所选的ROI,从而实现可比较的定量分析。
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本研究在经聚己内酯(PCL)基支架处理的成年雌性查尔斯河SASCO-SD大鼠桡骨3 mm临界缺损模型中,分别于第0周和第6周采集了纵向的µCT图像。所有动物实验均依照罗切斯特大学动物资源委员会(UCAR)批准的方案进行。µCT图像采集使用Scanco Medical VivaCT 40完成。
注意:本方案的主要步骤分为 µCT 图像分割、配准、感兴趣区域(ROI)选择与裁剪,以及分析与可视化(图 1)。µCT 图像分割方案改编自 Kenney 等人(2022)11。

图1:总体工作流程示意图。 本实验方案的主要步骤分为图像分割、模型配准、感兴趣区域(ROI)选择和体积分析。请点击此处查看该图的放大版本。
1. µCT 图像分割
2. 电泳胶图比对
3. ROI 选择与裁剪
注意:首先完成感兴趣区域(ROI)裁剪,以确定围绕临界尺寸骨折的切片编号。一旦确定了这些切片编号,可根据需要在同一时间点用于尺骨。在此过程中,裁剪一旦应用于模型,便无法撤销。
4. 分析与可视化
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为展示积极结果,研究了三种不同大鼠模型的µCT图像,每种模型均经聚己内酯(PCL)支架处理。对多个时间点的纵向研究进行分析时,需先将采集的三维模型进行配准,然后选择并裁剪至感兴趣区域(ROI)。为展示该方法在多周时间内的应用效果,分别在第0周和第6周采集的三维模型通过共同区域进行了配准(图2)。

图2:各周次实体模型的对齐。 使用图像配准向导以第0周作为基准方向,进行各周次之间的代表性实体模型对齐。该配准过程为半自动化,通过应用...
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量化骨体积变化对于纵向研究骨再生潜力及治疗效果至关重要 体内 研究。本方案在已有的显微计算机断层扫描(µCT)图像分割方法基础上建立11,为指定用户自定义的兴趣区域(ROI)提供了一种系统化方法。该技术在分析骨支架植入物有效性方面起到了关键作用 体内 大鼠研究。通过拓展已有实验方案11,该方法在图像分割中具有良好的稳健性和可重复性,为后续的配准和裁剪技术提供了基础。采用双因素方差分析(Two-way ANOVA)结合Tukey多重比较检验分析,仅在PCL2支架上显示出经验丰富的用户与新手用户之间存在显著差异。此外,尽管在经验丰富的用户与新手用户之间观察到显著性差异,但这一差异主要由一名新手用户所得的单一结果驱动。虽然这些结果表明软件使用熟练程度对结果准确性具有一定影响,但结果也可能受到样本特异性形态的干扰。PCL5支架上,经验丰富的用户1和用户2与新手用户的结果表现出更为接近的一致性(p值为 >0.9999 和 0.8658)。尽管在 PCL2 组中观察到一些局限性,但为进一步说明该过程的可靠性,进...
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作者声明无利益冲突。
我们感谢罗切斯特大学生物力学与多模态组织成像中心的Mark Kenney在当前流程培训以及本流程开发过程中的讨论,同时感谢Lindsay Schnur提供的帮助。本研究得到了美国国立卫生研究院/国家关节与肌肉骨骼疾病研究所(NIH/NIAMS)资助:H.A.A.(项目编号R01AR07061、P50AR072000和P30AR069655)以及V.Z.Z(项目编号T32GM007356、T32GM152318和T32AR076950)。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| Amira 3D | FEI SAS,隶属于赛默飞世尔科技 | v2024.1 | 用于微计算机断层扫描(microCT)图像分割的程序。 |
| Graph Pad Prism | GraphPad Software LLC | v10.0.3 (217) | 用于图表制作的程序。 |
| R 统计软件 | 统计计算 R 基金会 | v4.4.0(2024-04-24) | 用于执行ICC分析的程序。 |
| Scanco Medical VivaCT 40 | Scanco Medical | NA | 用于采集显微CT图像的显微CT扫描仪。 |
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