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方法文章

小鼠肺腺癌异种移植模型的构建及基于MAPK通路评价XY汤的治疗效果

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DOI：

10.3791/68023

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2025年4月25日

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

本文内容

摘要

本研究表明，XY汤剂通过调控MAPK通路对肺腺癌发挥治疗作用。

摘要

肺腺癌在全球范围内的发病率不断上升，促使人们探索并开发有效的治疗方法。近年来，中药复方如消癥汤（XY decoction）在治疗肺腺癌方面的治疗潜力日益受到关注。中药治疗肺腺癌的作用机制正在逐步被阐明。本研究利用动物模型探讨消癥汤治疗肺腺癌的疗效。采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UHPLC-QE-MS）在正、负离子模式下对小鼠体内入血的消癥汤化学成分进行分离与分析，随后通过实验验证所得结果。 体内 实验结果显示肿瘤体积减小、病理改变改善以及细胞凋亡增加。结果共鉴定出十五种在服用XY汤剂后吸收入血的成分：水苏糖、槲皮素-3-O-β-吡喃葡萄糖基-7-O-α-吡喃鼠李糖苷、贝母素乙（Imperialine）、斯皮诺素B（Spinosin B）、贝母素甲（Peimine）、黄酮母核+3O, 2MeO, O-己糖、苦鬼臼毒素（Picropodophyllotoxin）、(2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-二羟基-2-[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-羟基-17-(2-羟基-6-甲基庚-5-烯-2-基)-4,4,8,10,14-五甲基-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-十二氢-1H-环戊[a]菲-3-基]氧基-6-(羟甲基)四氢吡喃-3-基]氧基-6-(羟甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇、木犀草素（Tricin）、人参皂苷Rg1（Ginsenoside Rg1）、(20R)-人参皂苷Rh1（(20R)-Ginsenoside Rh1）、酸枣仁皂苷B（Jujuboside B）、梓醇（Aucubin）、人参皂苷Rg3（Ginsenoside Rg3）以及β-常树脂酸（beta-Elemonic acid）。动物实验表明，XY汤剂能够以剂量依赖的方式抑制肿瘤生长、改善病理变化并促进肿瘤细胞凋亡。其作用机制可能与MAPK信号通路中p-JNK和p-P38蛋白表达上调以及p-ERK蛋白表达下调有关。综上所述，XY汤剂具有调控MAPK信号通路、发挥肺腺癌治疗作用的潜力。

引言

全球肺癌发病率正在上升，占所有恶性肿瘤的18%，是导致癌症相关死亡的重要原因1,2。非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌中最常见的类型，其中腺癌为主要的病理类型3。由于其症状隐匿，NSCLC 常在晚期才被诊断，因而死亡率较高4,5。IV 期 NSCLC 患者的五年生存率仅为5%6，即使是可手术切除的早期 NSCLC，其五年生存率也仅为50%7。

目前，肺腺癌的治疗包括手术、放疗、化疗、免疫治疗和靶向治疗。此外，中医药在肺腺癌治疗中的作用正日益受到认可和重视8。中医药具有悠久的历史，在多种肿瘤性疾病的治疗中已展现出有效的治疗效果9,10。中医药将人体视为一个整体，其治疗原则注重恢复脏腑气机的运行（气指维持生命活动的能量，可促进血液和体液循环，有助于增强非小细胞肺癌患者的免疫力并减轻炎症反应），以恢复整体平衡，抑制肿瘤进展。

中药不仅以低毒性、多靶点和高效性治疗肿瘤疾病11，还可促进放化疗所致损伤的修复，从而延长生存期12。

液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）将液相色谱与质谱相结合，实现对复杂化合物混合物中各组分的分离与检测13。LC-MS具有高分辨率、高灵敏度和高特异性，可用于分离和鉴定中药汤剂中的多种化学成分。当与血清药物化学相结合时，可分离和检测口服后进入血液的活性成分14,15，从而利用LC-MS预测和分析药物可能的作用机制。该方法有助于阐明中药汤剂的化学组成及药理活性成分，为其药理作用和临床应用的深入研究提供重要数据，在中药研究中具有广泛应用价值16,17。

MAPK 信号通路在肺癌的发生、发展、转移和侵袭过程中发挥着关键作用，其中 Erk、p38 和 JNK 是重要的亚家族。研究表明，中药汤剂可影响 MAPK 通路中蛋白的表达18。小薏（XY）汤剂源自一贯煎，由中国中医科学院长春中医药大学第一附属医院用于肺腺癌的治疗（图 1），临床疗效确切。然而，其治疗机制尚不明确。

本研究采用超高效液相色谱串联Q-Exactive轨道阱质谱技术（UHPLC-QE-MS）阐明XY汤剂抗肺腺癌的潜在治疗机制，并通过实验验证其作用效果 体内 研究。

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方案

所有动物实验均经长春中医药大学动物伦理委员会批准（伦理编号：2024008）。6周龄雄性C57BL/6小鼠（20 ± 2 g），在特定病原体阴性（SPF）条件下饲养，在温湿度恒定的受控环境中表现出典型的生理活动模式。它们具有 随意摄取 可自由获取食物和水，并维持在12小时光照/12小时黑暗的循环条件下。本研究中所用试剂与设备的详细信息见下文 材料表

1. XY汤剂水提物的制备

  1. 将人参 Panax ginseng C.A. Mey（Renshen，15 g）、乌龟 Chinemys reevesii (Gray)（Guiban，30 g）和中华鳖 Trionyx sinensis Wiegmann（Biejia，30 g）放入煎药锅中，加入1000 mL去离子水，在室温下浸泡30分钟。
  2. 将步骤1.1中的三种药材煮沸1小时。同时，将地黄 Rehmannia glutinosa Libosch（Dihuang，30 g）、天花粉 Trichosanthes kirilowii Maxim.（Tianhuafen，30 g）、薏苡仁 Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf（Yiyiren，20 g）、白芍 Paeonia lactiflora Pall.（Baishao，30 g）、乳香 Boswellia carterii Birdw.（Ruxiang，7 g）、没药 Commiphora myrrha Engl.（Moyao，7 g）、仙鹤草 Agrimonia pilosa Ledeb.（Xianhecao，20 g）、益智仁 Alpinia oxyphylla Miq.（Yizhiren，20 g）、酸枣仁 Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge)（Suanzaoren，30 g）、川楝子 Melia toosendan Sieb. et Zucc.（Chuanlianzi，5 g）、浙贝母 Fritillaria thunbergii Miq.（Zhebeimu，15 g）、知母 Anemarrhena asphodeloides Bge.（Zhimu，10 g）、桔梗 Platycodon grandiflorum (Jacq.)（Jiegeng，10 g）、远志 Polygala tenuifolia Willd.（Yuanzhi，15 g）以及芦根 Phragmites communis Trin.（Lugen，30 g）在另一容器中用去离子水浸泡30分钟。浸泡完成后，将其全部转移至步骤1.1的煎药锅中。
  3. 将步骤1.1和步骤1.2中的全部18味药材煮沸30分钟。倒出药液，再加入1000 mL去离子水，再次煮沸30分钟。重复此煎煮过程共三次，分别收集三次的药液，然后将所有药液合并并充分混匀。
  4. 将混合药液通过400目筛网布过滤。将滤液在减压条件下浓缩，随后将浓缩后的药液转移至冷却设备中进行后续处理。
  5. 将浓缩药液倒入冻干托盘中，放入真空冷冻干燥机的预冻室进行预冻。预冻完成后，将托盘转移至升华干燥室以除去水分。
  6. 在较高温度下除去残留水分。使用粉碎机将冻干后的中药提取物粉碎，得到细粉状的XY冻干汤剂粉末（图2）。

2. 含药血清的制备

  1. 将6周龄C57BL/6雄性小鼠（20 ± 2 g）随机分为消瘀（XY）组和对照组。
    注意：小鼠剂量是根据人与小鼠之间的剂量换算系数计算得出的：
    小鼠等效实验剂量（g/kg）= {人体剂量（g/kg）/ 体重（70 kg）} × 9.1
    根据该计算结果，小鼠的给药剂量确定为2.6 g/kg。
  2. 称取0.9152 g冻干XY汤剂粉末，溶于3.2 mL蒸馏水中，配制药物溶液。
    注意：小鼠在口服给药前禁食 12 h。
  3. 向XY组小鼠给予XY汤剂 通过 灌胃给予对照组等体积的去离子水。
  4. 口服给药后2 h，使用戊巴比妥钠（按照机构批准的方案）对小鼠进行麻醉。用镊子摘除眼球采集血样，随后处死小鼠。 通过 CO2 根据伦理准则实施窒息后颈椎脱位处死19.
  5. 让血液样本在室温下静置稳定 90 分钟。以 3450 x g 离心 g 4 °C 下离心 15 分钟以收集上清液。

3. 超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱分析

  1. 取100 mg XY方冻干粉，加入500 µL提取液（甲醇:水 = 4:1），充分混匀，超声处理后，在冰水浴中孵育1 h。
  2. 将混合物在-40 °C下维持1 h，然后在4 °C下以13,800 x g 离心15 min。将上清液经0.22 µm滤膜过滤，再取各上清液100 µL混合，制备质控（QC）样品。
  3. 血浆样品解冻后，分别取对照组血浆样品400 µL和XY组血浆样品400 µL，向每份样品中加入40 µL盐酸（2 mol/L），涡旋震荡1 min，4 °C下静置15 min，重复此步骤四次。
  4. 加入1.6 mL乙腈，涡旋震荡5 min，在4 °C下以13,800 x g离心5 min。取1,800 µL上清液进行氮气吹干。
  5. 用含10 µg/mL内标物的150 µL 80%甲醇溶液重悬干燥样品，涡旋震荡5 min。在4 °C下以13,800 × g离心5 min，取120 µL上清液转移至新的玻璃小瓶中，用于LC-MS分析（图3）。

4. 细胞培养与动物准备

  1. 在含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）的培养皿中接种1 mL Lewis肺癌细胞。将细胞置于37 °C、5% CO₂的可控条件下培养。2.
  2. 当细胞达到 80% 汇合度时，使用 0.25% 胰蛋白酶进行传代。持续传代至细胞状态稳定，然后将细胞浓度调整至 3 x 106 cells/mL
  3. 将制备好的细胞悬液0.1 mL在雄性C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下注射，以建立肺腺癌模型。
    注意：小鼠接种后5天可在腋下触诊到肿瘤组织。
  4. 5天后，将小鼠随机分为五组（每组6只）：模型组（M），不予任何处理；XY方低剂量组（XY-L），1.3 g/kg；XY方中剂量组（XY-Z），2.6 g/kg；XY方高剂量组（XY-H），5.2 g/kg；顺铂组（DDP），给予顺铂处理。20.
  5. 将相应剂量的XY汤剂粉末溶于200 µL蒸馏水中并给予灌胃 通过 灌胃。M组和DDP组给予等体积的蒸馏水 通过 灌胃
  6. 向DDP组给予顺铂 通过 腹腔注射（3 mg/kg），每3天一次。向其他组注射等体积的生理盐水。

5. 肿瘤组织的病理学分析

  1. 21 天后，采用 CO2 窒息法处死所有小鼠，随后进行颈椎脱位（遵循伦理指南），并切除肿瘤组织21。测量肿瘤体积和重量（图 4）。
  2. 将切除的肿瘤组织置于 4% 多聚甲醛中固定 24 小时，然后使用梯度乙醇溶液进行脱水。
  3. 用二甲苯清除脱水后的组织块，再将其浸入熔化的石蜡中包埋。待石蜡凝固形成石蜡块后，使用切片机将组织块切成 5 µm 厚的切片。
  4. 在二甲苯中脱蜡，随后用梯度乙醇溶液进行复水。将切片用苏木精染色 5 分钟，然后用去离子水冲洗。
  5. 用 0.5% 伊红溶液对切片进行复染 1 分钟。在光学显微镜下观察染色切片，并采集图像用于分析。

6. 肿瘤组织的免疫组织化学分析

  1. 按照步骤 5.2-5.4 中所述程序进行脱蜡和复水。
  2. 将切片在室温下用内源性过氧化物酶阻断剂孵育 15 分钟。用山羊血清孵育切片以阻断非特异性结合。
  3. 加入一抗：Ki-67（1:600）和 Caspase-3（1:100）。4 °C 过夜孵育。用 PBS 缓冲液洗涤后，加入通用型二抗（1:500），37 °C 孵育 30 分钟。
  4. 加入 DAB 溶液显色。用苏木精溶液对切片进行复染。
  5. 对染色后的切片进行脱水、透明和封片处理。在光学显微镜下观察蛋白表达情况，并采集图像用于分析。

7. 蛋白质印迹分析

  1. 使用组织破碎仪匀浆肿瘤组织。提取总蛋白，并使用二辛可宁酸（BCA）蛋白定量试剂盒测定其浓度（参见材料表）。
  2. 进行蛋白定量，随后进行SDS-PAGE电泳并将蛋白转移至膜上。
  3. 将膜与一抗在4 °C孵育过夜：P38（1:2000）、p-P38（1:1000）、ERK（1:20000）、p-ERK（1:500）、JNK（1:2000）、p-JNK（1:5000）、β-actin（1:200）（参见材料表）。
  4. 次日，将膜在室温下与辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗孵育1.5小时，使用增强化学发光（ECL）系统检测蛋白条带。
    注意：使用ImageJ软件对蛋白条带强度进行定量分析。

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结果

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱法（UHPLC-QE-MS）对对照组和XY组的XY粉末溶液及血清样本进行分析，结果显示色谱峰分离良好。正离子模式和负离子模式的总离子流图见图3。根据保留时间、采集模式及质谱碎片信息，鉴定了XY汤剂的化学成分。通过比较空白组与口服XY汤剂组血清中的成分与XY粉末溶液的成分，共鉴定出15种入血成分（表1）。

肿瘤体积折线图显示，经XY汤灌胃21天后，与M组相比，小鼠的肿瘤体积减小，并呈现剂量依赖性效应（图4）。采用H&E染色观察肿瘤组织病理学变化（图5）。M组中，肿瘤细胞排列密集，增殖活跃，病理性核分裂象丰富。随着XY汤剂量的增加，肿瘤细胞排列逐渐稀疏，细胞间间隙增大。肿瘤组织中可见不同程度的坏...

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讨论

癌症发病率每年持续上升，引起了临床和科研领域的广泛关注22,23。近期研究表明，中医药在治疗肺癌方面具有显著疗效24,25,26。例如，麦门冬汤可增强自然杀伤细胞（NK细胞）的数量和活性，从而抑制肺癌转移27。类似地，麻黄附子细辛汤通过调控多条信号通路实现对肺癌的治疗作用28。本研究采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）分析结合体内实验，预测小续命汤（XY decoction）对肺腺癌治疗作用的潜在机制。

LC-MS 分析鉴定了 15 种入血成分。其中，木犀草素和鬼臼毒素丙酮缩酮已被证明可抑制耐药性，并降低 p-PRKCA、SPHK1、SPHK2 和 EGFR 的表达水平...

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

本工作由吉林省科学技术发展计划项目（YDZJ202301ZYTS459）资助。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
乙腈CNW Technologies5/8/1975
2-氯-L-苯丙氨酸上海恒博生物科技有限公司103616-89-3
氢氧化铵溶液国药集团化学试剂有限公司#2028
抗体-β-actinAbcamab8228
抗-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) 抗体Abcamab4819
抗-ERK1/ERK2 抗体Abcamab184699
抗-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) 抗体Abcamab76572
抗-JNK1/JNK2/JNK3 抗体Abcamab208035
抗-Ki67 抗体Cell Signaling TechnologyGB121141
抗-p38 (磷酸化 T180) 抗体Abcamab178867
抗-p38 alpha/MAPK14 抗体Abcamab170099
BCA 蛋白浓度检测试剂盒博仕德生物技术公司17E17B46
牛血清白蛋白 (BSA)DAKOBIOFROXX
广谱磷酸酶抑制剂 (100x)博仕德生物技术公司AR1183
C57bl/6 小鼠辽宁长生生物技术股份有限公司SCXK2021-0006
色谱柱WatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm 2.1*100 mm
顺铂国药集团化学试剂有限公司232120
柠檬酸盐 (pH 6.0) 抗原修复液武汉百乾度生物科技有限公司B2010
盖玻片江苏世泰实验器材有限公司10212432C
冷冻切片机冷台武汉俊杰电子有限公司JB-L5
DAB 显色试剂盒江苏世泰实验器材有限公司2005289
脱色摇床北京六一仪器厂WD-9405A
脱水机武汉俊杰电子有限公司JJ-12J
干燥烘箱上海惠泰仪器制造有限公司DHG-9140A
DMEM 高糖培养基（Dulbecco 改良 Eagle 培养基）Gibco8121587
EDTA (pH 8.0) 抗原修复液武汉百乾度生物科技有限公司B2001
EDTA (pH 9.0) 抗原修复液武汉百乾度生物科技有限公司B2002
电泳缓冲液NCM 生物科技20230801
包埋机武汉俊杰电子有限公司JB-P5
伊红国药集团化学试剂有限公司212954
乙醇国药集团化学试剂有限公司493511
胎牛血清Gibco2166090RP
甲酸SIGMA64-18-6
GraphPad Prism 软件GraphPad software, LLC版本 9.0.0
苏木精国药集团化学试剂有限公司H3136
高效液相色谱仪Agilent1260 Infinity II Prime
高速冷冻离心机Thermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
高分辨质谱仪Thermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP 标记山羊抗小鼠二抗SeraCare5220-0341
HRP 标记山羊抗兔二抗SeraCare5220-0336
HRP 标记山羊抗兔/小鼠通用二抗DAKOK5007
HRP 标记山羊抗大鼠二抗SeraCare5220-0364
HRP 标记兔抗山羊二抗SeraCare5220-0362
盐酸国药集团化学试剂有限公司H9892
过氧化氢国药集团化学试剂有限公司B12555
高敏 ECL 化学发光试剂盒NCM BiotechP10300
ImageJ 软件美国国立卫生研究院v1.8.0
成像系统尼康（日本）NIKON DS-U3
Lewis 肺癌细胞国药集团化学试剂有限公司90020104
网筛布百洁100110779650
金属加热温控仪佰万电子科技有限公司HG221-X3
甲醇阿拉丁M116118
微量移液器大龙仪器有限公司KE0003087/KA0056573
载玻片江苏世泰实验器材有限公司10212432C
切片机上海徕卡仪器有限公司RM2016
微波炉格兰仕微波电器有限公司P70D20TL-P4
中性树胶国药集团化学试剂有限公司10004160
光学显微镜尼康（日本）Nikon Eclipse CI
烘箱上海惠泰仪器制造有限公司DHG-9140A
PAGE 胶快速制备试剂盒碧云天PL566B-5
多聚甲醛国药集团化学试剂有限公司8.18715
磷酸盐缓冲液 (1x)Gibco8120485
预染蛋白 Marker (10-180 kDa)北京赛维尔创新生物科技有限公司SW176-02
蛋白上样缓冲液 (5X)博仕德生物技术有限公司AR1112
研磨仪尚志桥有限公司DFT-100A
PVDF 膜 (0.45 μm)北京赛维尔创新生物科技有限公司SW120-01
快速转膜液北京赛维尔创新生物科技有限公司SW171-02
RIPA 裂解液博仕德生物技术有限公司AR0105
TBS 缓冲液NCM Biotech23HA0102
组织漂浮工作站浙江省金华科迪仪器设备有限公司KD-P
转膜缓冲液NCM Biotech23CA2000
胰蛋白酶 (0.25%, 1x)HyCloneJ210045
超声波细胞破碎仪宁波新艺超声设备有限公司JY92-IIDN
正置光学显微镜尼康（日本）Nikon Eclipse CI
真空冷冻干燥机兰净有限公司HD-LG20D
涡旋混合器麒麟贝尔XW-80A
二甲苯国药集团化学试剂有限公司214736

参考文献

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

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