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方法文章

基于BRET的G蛋白生物传感器用于活细胞中G蛋白偶联受体活性的检测

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DOI：

10.3791/68463

⸱

2025年11月7日

 ,  ,  ,  , 
1CNRS, Bordeaux INP, CBMN, UMR 5248, University of Bordeaux, 2Department of Pharmaceutical Chemistry, Philipps-University Marburg

本文内容

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摘要

本方案描述了基于BRET的生物传感器在G蛋白偶联受体配体刺激下，对活体HEK293细胞中G蛋白活化进行实时检测的应用。本文以β2-肾上腺素能受体和1型大麻素受体为例，展示了该传感器在多种G蛋白亚型及不同G蛋白偶联受体中的检测效率。

摘要

G蛋白偶联受体（GPCRs）是最大的跨膜受体家族，在细胞信号转导中发挥关键作用，可将胞外刺激转化为胞内反应。GPCR的激活会引起构象变化，从而使其能够与异源三聚体G蛋白相互作用。受体激活后，G蛋白α 亚基发生GDP-GTP交换，从而与G蛋白解离βγ 二聚体并触发下游信号级联反应。为研究G蛋白偶联受体（GPCR）介导的G蛋白激活，基于生物发光共振能量转移（bioluminescence resonance energy transfer, BRET）的生物传感器是一种高度敏感且非侵入性的方法。Schihada等人开发的基于G蛋白的三顺反子活性传感器（G-CASE生物传感器）通过检测异源三聚体的解离来间接反映激活状态，可在单质粒转染条件下实现对GPCR活性的实时监测，从而克服了共转染策略的局限性。相较于基于荧光的技术，BRET检测具有背景噪声低、光漂白效应弱以及灵敏度更高等优势。在本实验方案中，基于BRET的G-CASE生物传感器被应用于活细胞体系，并在96孔板中进行检测。具体而言，我们评估了β2-肾上腺素能受体（β2-AR）和1型大麻素受体（CB1R）在G蛋白激活方面的活性。通过瞬时转染β2-AR的HEK 293T野生型细胞以及稳定表达CB1R的HEK293T细胞，验证了Gs 和 Gi3 G-CASE生物传感器已得到验证。本方案支持该方法在药理学研究和高通量GPCR筛选中的应用，以更深入地理解配体激活特定信号通路的能力，例如 通过 偏向性信号转导，从而促进新型治疗化合物的发现。

引言

G蛋白偶联受体（GPCR）是最大的跨膜受体超家族，负责将胞外刺激信号转导为胞内信号级联反应，从而引发特定的生物学响应。GPCR是关键的药理学靶点，约30%的上市药物作用于GPCR1。GPCR配体结合会诱导受体发生构象变化，促进其与异源三聚体G蛋白和/或GPCR激酶（GRKs）及β-阻遏蛋白（β-arrestins）相互作用，从而启动下游信号传导或受体内化过程2。

异源三聚体G蛋白是G蛋白偶联受体（GPCR）信号转导的主要细胞内媒介，由三个亚基组成：Gα、Gβ和Gγ。根据Gα亚型的不同，这些异源三聚体可分为四类——Gi/o、Gs、Gq和G12/13，每类激活不同的信号通路：Gi/o亚型抑制腺苷酸环化酶，而Gs亚型则刺激其活性，Gq亚型激活磷脂酶C-β，G12/13亚型则调控Rho家族GTP酶。

GPCR 的激活会引发其构象重排，从而在亚秒级动力学时间内快速招募 G 蛋白。该过程诱导 G 蛋白发生构象变化，促进 Gα 亚基中的 GDP-GTP 交换。GTP 的结合进一步改变 Gα 亚基的构象，导致其与 Gβγ 二聚体解离，进而实现信号传递。因此，G 蛋白通过调控多种效应蛋白（如腺苷酸环化酶或离子通道）来调节细胞反应的特异性和时间动力学，发挥关键作用3,4,5。

本方案概述了在活细胞中通过G蛋白偶联受体（GPCR）配体刺激后，利用基于生物发光共振能量转移（BRET）的生物传感器检测G蛋白激活或失活的方法。受早期G蛋白生物传感器研究6,7,8,9的启发，Schihada等人提出的G-CASE（G蛋白三顺反子活性传感器）系统10，基于标记的Gα与Gβγ亚基之间的BRET信号，仅需单质粒转染即可实现检测，操作更为简便。该特性提高了检测灵敏度，并避免了共转染编码异源三聚体G蛋白三个亚基（Gα、Gβ和Gγ）的多个质粒所带来的技术难题。这些传感器目前已通过商业途径向学术研究机构提供（见材料表）。

与荧光共振能量转移（FRET）相比，生物发光共振能量转移（BRET）具有显著优势。在BRET中，能量转移发生在生物发光供体与荧光受体之间，无需外部光源激发。这种内在的生物发光特性减少了FRET中常见的问题，如自发荧光和光散射，从而降低了背景信号，提高了检测的灵敏度6,7,11。

BRET无需外部激发，可最大限度地减少光漂白和光毒性效应，从而与FRET相比具有更低的背景信号。因此，BRET检测通常表现出更高的灵敏度，能够检测G蛋白对组成型活性GPCR的激活。BRET检测的高灵敏度有助于发现细微的生物相互作用，在药理学研究中尤为重要，因为在这些研究中精确测量受体活性至关重要。

这些生物传感器可转化为在96孔或384孔板中进行的高通量筛选，正如Scott-Dennis等人最近所证明的那样，他们已开发出一种基于膜的384孔检测方法，利用这些生物传感器分析大麻素受体CB1R和CB2R的活性12。本文描述了在活细胞的96孔板中使用这些生物传感器的方法，通过检测β2-肾上腺素受体（β2-AR）的活性来验证，该受体是A类典型G蛋白偶联受体（GPCR），可结合Gs蛋白；同时还检测了同属A类G蛋白偶联受体的CB1R，其可激活Gi/o家族蛋白。本研究验证了两种G-CASE生物传感器的应用：在HEK 293T细胞中分别使用Gs和Gi3生物传感器，GPCR为瞬时表达（β2-AR）或稳定表达（CB1R）。

需要注意的是，该实验可在多种细胞系中进行，表明该技术在不同细胞环境中的广泛适用性和稳健性。这确保了该方法可应用于多种实验模型，使其成为在不同生理和药理条件下研究G蛋白偶联受体（GPCR）信号转导的有力工具。图1展示了基于生物发光共振能量转移（BRET）的G蛋白活性传感器的工作原理。

GPCR激活示意图；BRET生物传感器测量G蛋白偶联；分子相互作用研究。
图1：基于BRET的G蛋白活性传感器原理。G蛋白传感器由三个亚基组成：Gα、天然Gβ和Gγ。Gα亚基与小而明亮的NanoLuciferase（Nluc）融合，而Gγ亚基则在其N端标记了环状重排的Venus（cpVenus173）。编码这些工程化G蛋白亚基的基因被组合到同一个质粒中。配体与GPCR结合后诱导GPCR发生构象变化，促进G蛋白的招募及其随后的解离，并伴随GTP水解。这种解离破坏了两个组分之间的能量转移，导致BRET信号下降。请点击此处查看该图的放大版本。

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方案

本研究中使用的试剂和设备列于材料表中。

1. 培养板接种（第1天）

注意：所有细胞培养操作均须在无菌的层流罩内进行，以维持无菌条件。使用白色孔板并配以透明平底，以便观察细胞生长和存活情况。请使用完整的白色孔板，避免在步骤 3.2.1 中使用贴纸。

  1. 酶标板包被
    注意：可使用预包被板以跳过此步骤。
    1. 将约 6 mL 经无菌过滤的聚-L-赖氨酸（PLL）溶液（0.01%）倒入多通道储液槽中。使用多通道移液器，向 96 孔白色酶标板的每孔加入 60 µL PLL 溶液。
    2. 将酶标板置于避光处，孵育 20 分钟。
    3. 在孵育期间，按照步骤 1.2.1–1.2.3 的描述开始细胞制备。
    4. 用多通道移液器吸除 PLL 溶液，并将溶液转移至 15 mL 离心管中，于 4 °C 保存。
    5. 用 DPBS 洗涤酶标板三次，以去除未结合的 PLL，避免其可能导致细胞降解。
  2. 细胞制备与接种
    1. 在含 10% 胎牛血清（FBS）、100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素的杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）中，于 37 °C、5% CO2 条件下培养 HEK293 细胞。
      注意：在培养基中添加 FBS 是为了提供细胞正常存活所需的营养物质和生长因子。
    2. 吸除培养基，并用 2 mL DPBS 冲洗细胞。
    3. 加入 0.5 mL 胰蛋白酶，于 37 °C 孵育 3–5 分钟，以使细胞脱落。
    4. 向培养瓶中加入 4.5 mL DMEM 以中和胰蛋白酶，然后反复吹打使细胞完全脱落并重悬。
    5. 将脱落的细胞转移至 15 mL 离心管中，在室温（RT）下以 1000 × g 离心 5 分钟。
    6. 弃去上清液，将细胞沉淀重悬于 2 mL DMEM 中。
    7. 使用 Malassez 血细胞计数板对细胞进行计数，配制 9 mL 浓度为 300,000 个细胞/mL 的细胞悬液。将其加入多通道储液槽中，使用多通道移液器每孔加入 100 µL 进行接种（最终密度为 30,000 个细胞/孔）。
    8. 将酶标板置于 37 °C、5% CO2 条件下孵育约 24 小时。
      注意：为实现高效转染，细胞汇合度应达到约 70%–80%。

2. 质粒转染（第2天）

注意：细胞转染可在第1天进行，即在悬浮细胞铺板前的步骤1.2.7中完成，数据采集则在第3天进行。

  1. 将所需质粒 DNA（例如，在 HEK wt 细胞中加入 5 µg β2-肾上腺素能受体和 5 µg Gs(short)-CASE，或在 HEK CB1 细胞中仅加入 10 µg Gi3-CASE）10 µg 与 20 µL 脂质体转染试剂（Lipofectamine）分别加入含有 500 µL Opti-MEM 培养基的离心管中。室温孵育 5 分钟。
    1. 作为阴性对照，将 β2-肾上腺素能受体替换为相同浓度的空载体质粒 pcDNA 3.1。将上述两种溶液合并至同一管中并混匀，得到转染混合液（总体积 1 mL）。
  2. 将转染混合液于室温孵育 20 分钟。
  3. 从步骤 2.2 中取 10 µL 转染混合液逐滴加入每孔，并轻轻前后摇动培养板以确保充分混匀。
    注意：每孔最终 DNA 浓度为 100 ng。
  4. 将微孔板置于 37 °C、5% CO2 的加湿培养箱中孵育 24 小时。

3. 数据采集（第3天）

  1. 配体准备
    注意：Hank's 平衡盐溶液（HBSS）缓冲液：NaCl 140 mM，氯化钾 5 mM，氯化钙 1 mM，七水合硫酸镁 0.4 mM，六水合氯化镁 0.5 mM，二水合磷酸氢二钠 0.3 mM，磷酸二氢钾 0.4 mM，D-葡萄糖（右旋糖）6 mM，碳酸氢钠 4 mM，pH 7.4，经 0.22 µm 滤膜过滤。
    1. 在适合各配体溶解的溶剂中，配制尽可能高浓度的储备液（在本方案中，异丙肾上腺素溶于 mQ H2O，WIN-55.212-2 溶于 DMSO）。
      注意：配体储备液的浓度需根据配体的溶解度及其已知解离常数（Kd）进行调整。
    2. 从该储备液中，用相应的溶解溶剂配制围绕配体 Kd 值的系列稀释液，每份体积为 10 µL。将此系列稀释液储存于 -20 °C。
      注意：根据配体的不同，该系列稀释液在发生降解前可冻融最多十次。同时配制仅含配体溶解溶剂的溶液，用于设置溶剂对照组（在本方案中为 H2O 或 DMSO）。
    3. 对每种配体浓度及溶剂对照组，取 1.3 µL 加入至总体积 130 µL 的 HBSS 中，进行 1/100 稀释。最终体系中溶剂浓度为 1%。
      注意：此最终稀释系列用于实验时，每孔加入 10 µL 以达到 100 µL 总体积，此时各孔中溶剂终浓度为 0.1%。130 µL 体积对应填充一块 96 孔板一行所需的量：(10 × 12) ± 10%。每一行对应不同配体浓度，最后一行为溶剂对照。
    4. 从原液配制 980 µL 的 Furimazine 1/100 稀释液（将 9.8 µL Furimazine 加入 970.2 µL HBSS，总体积为 980 µL）。
      注意：Furimazine 溶液需新鲜配制，并静置孵育至少 3 分钟，然后在检测前立即加入。不宜过早配制，因其信号在室温下半衰期约为 120 分钟。为克服此限制，可使用长效 Furimazine 衍生物，如 vivazine 和 endurazine，这些底物可维持稳定的 BRET 信号长达 48 小时。
  2. 板读数
    注意：使用多功能酶标仪。根据研究条件和重复次数调整检测参数。此处数据采集分为三次读数，每次读取 4 列，共 32 孔。所有读数均采用顶部光学检测，并加盖透明封板膜以防止缓冲液蒸发。每次读数前需调整检测增益。本研究中增益固定为 3600。可通过酶标仪配备的自动进样器或注射系统实现配体的自动化添加，避免手动操作。
    1. 移除 96 孔板前 4 列的培养基，每孔用 100 µL HBSS 清洗一次，再加入 80 µL HBSS。在板底面贴上白色标签，以增强荧光和/或生物发光信号的检测。
    2. 记录 G 蛋白发光光谱：将 96 孔板放入酶标仪中，使用 535/30 nm 单色器检测 cpVenus173 的发射光，并在 500 至 600 nm 范围内以 2 nm 分辨率测量发光信号。
      注意：此步骤为对照，用于确认 cpVenus173 激发后有荧光发射。
    3. 记录 G 蛋白发光光谱：使用 450/40 nm 单色器检测 Nluc 发射强度，并在 400 至 600 nm 范围内以 5 nm 分辨率测量发光信号。
      注意：此步骤为对照，用于确认在加入 Nluc 底物 Furimazine 前无生物发光信号产生。
    4. 将板从酶标仪中取出，使用多通道移液器向每孔加入 10 µL 前一步骤（3.1.4）配制的 Furimazine 溶液。
    5. 重复步骤 3.2.3。
      注意：此步骤为对照，用于确认加入 Furimazine 后产生生物发光信号。检测后应立即进行步骤 3.2.6，以避免因 Furimazine 消耗和/或降解导致信号变化。BRET 信号的变化可能由 Furimazine 消耗和/或降解，以及激动剂刺激后发生的调控过程（如信号终止机制）引起。为克服此限制，可使用 GRK 抑制剂（CMPD101）、内吞抑制剂（dynasore），或使用基因编辑技术敲除 GRK 或 arrestin 的细胞模型。
    6. 记录 G 蛋白基础 BRET 值：在加入 GPCR 配体前，分别使用 450/40 nm 和 535/30 nm 单色器检测 Nluc 和 cpVenus173 的发射强度。进行 3 个循环，每个循环 60 秒，检测间隔时间为 0.30 秒（总读数时间为 3 分钟）。
      注意：将检测间隔时间延长至 0.90 秒通常可显著提高信噪比，但会大幅延长读数时间。实验者应根据具体应用需求权衡时间分辨率与信噪比的重要性。
    7. 将板从酶标仪中取出，使用多通道移液器向每列各孔分别加入 10 µL 前一步骤（3.1）配制的 GPCR 配体系列稀释液。其余三列按相同方法操作。
    8. 记录 G 蛋白配体诱导的 BRET 信号：分别使用 450/40 nm 和 535/30 nm 单色器检测 Nluc 和 cpVenus173 的发射强度。进行 16 个循环，每个循环 60 秒，检测间隔时间为 0.30 秒（总读数时间为 16 分钟）。
      注意：设置检测参数时应按列顺序读取各孔。重复孔之间的检测时间差为 2.4 秒。
    9. 对接下来的四列重复步骤 3.2. 共两次。

4. 数据分析

注意：将每次读数的数据分别收集到不同的数据电子表格文件中。

  1. 对照读数
    1. 绘制发射强度随波长变化的曲线。
  2. 基础BRET读数
    1. 对每个孔，计算三次读数的BRET比值。BRET比值定义为受体发射/供体发射。
      BRET比值方程，535/30<sub>em</sub>除以450/40<sub>em</sub>，用于发射分析。
    2. 对每个孔，计算加配体前三次BRET比值的平均值。该值称为配体刺激前的基础BRET比值：Ratiobasal。
    3. 为归一化所有孔的先前BRET比值，对每项三次测量，分别从相应时间点的BRET比值中减去溶剂对照孔计算得到的BRET比值。
      注：所分析的数据对应于加配体前的时间点。由于已知添加配体的孔，因此可相应地识别溶剂对照孔。
  3. G蛋白配体诱导的BRET读数
    1. 对每个孔，按照第4.2.1节所述方法计算每次读数的BRET比值。这些值称为Ratiostim。
    2. 为量化配体诱导的变化，将每个孔的每个Ratiostim以相对于基础值的百分比形式计算ΔBRET。为此，使用第4.2.2节中先前计算得到的相应Ratiobasal。
      BRET变化公式，ΔBRET计算，发光检测的比值分析，方程，教学用途。
    3. 计算ΔBRET(%)以归一化每个孔的ΔBRET值。为此，减去相应溶剂孔的ΔBRET值。
    4. 为在数据表格中可视化ΔBRET动力学，将第4.2.3步中归一化的三个基础BRET读数置于第4.3.3节中计算得到的每个孔对应的ΔBRET(%)值之前。
    5. 将上述数据对读数时间作图，获得动力学曲线。
    6. 当达到平台期时，选取某一特定时间点的ΔBRET(%)值，并将其对所用配体浓度作图，因为每个孔对应不同的配体浓度，从而获得剂量-反应曲线。
      ​注：平台期通常在配体刺激后约5分钟达到。在本方案中，绘制的是配体刺激15分钟后获得的数值。为比较不同实验的数据，应根据激活动力学调整时间点。
    7. 在分析软件中绘制上述数据，并使用基于以下方程的三参数S型剂量-反应拟合进行拟合：
      剂量-反应曲线方程，Y=Bottom+X*(Top-Bottom)/(EC50+X)，公式表示。
      其中，X为所用配体的浓度，Y为ΔBRET(%)值，Top和Bottom代表平台值，EC50为达到最大效应50%所需的配体浓度。由此可获得Emax 和EC50。
    8. 使用非参数Mann-Whitney检验比较对照条件的数据。当p < 0.05时，结果被认为具有显著性。

使用BRET进行G蛋白分析；示意图；细胞接种、转染、光谱记录、荧光。
图2：进行BRET检测的关键步骤。 本方案中所述的三个主要实验步骤（细胞接种、细胞转染和BRET信号采集）的概览，以及数据采集的详细分步指南。实验设置：第1天，将细胞以每孔30,000个细胞的密度接种于经PLL预包被的白色96孔板中，该板具有平坦透明的底部。第2天，用选定的G蛋白传感器与所研究的GPCR或pcDNA3.1质粒共同转染细胞。经过24小时孵育后，在加入配体后通过生物发光和荧光读数检测G蛋白传感器的活性。数据采集：细胞经HBSS洗涤后，向各孔中加入80 µL HBSS，并使用535/30 nm单色器在500 nm至600 nm范围内测量cpVenus173的荧光发射(1)。接着，使用450/40 nm单色器在400 nm至600 nm范围内测量Nluc的生物发光，分别在加入furimazine之前(2)和之后(3)进行。最后，分别使用450/40 nm和535/30 nm单色器，在3分钟内（3个周期，每个周期60秒，测量间隔0.30秒）(4)和16分钟内（16个周期，每个周期60秒，测量间隔0.30秒）(5)测量基础状态及配体诱导的G蛋白活性的BRET信号。请点击此处查看此图的放大版本。

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结果

实验设置与操作的通用示意图详见图2。使用G-CASE生物传感器评估了两种GPCR在配体激活后对Gs或Gi/o家族蛋白的激活情况。首先研究了一个典型的A类GPCR，即在HEK 293T细胞中瞬时转染的β2-肾上腺素受体（β2-AR）。当将激动剂（例如异丙肾上腺素）施加于共表达β2-AR和Gs(short)-CASE蛋白传感器的HEK wt细胞时，观察到BRET信号呈浓度依赖性下降，表明Gs蛋白被激活（图3B）。随着配体浓度增加，ΔBRET值逐渐降低直至达到饱和，配体刺激后约5分钟出现平台期。相比之下，转染空载体pcDNA3.1质粒及Gs(short)-CASE蛋白传感器的HEK wt细胞对异丙肾上腺素刺激表现出微弱且无统计学意义的相反反应（图3B）。在本方案中，绘制的是配体刺激15分钟后获得的数据。为确保结果的一致性和不受时间点选择的影响，应测试其他时间...

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讨论

本实验方案描述了使用BRET生物传感器实时测量活细胞中G蛋白在特异性配体刺激GPCR后激活情况的方法。该方法基于生物发光供体-受体能量转移原理，能够检测受体激活后异源三聚体G蛋白的构象变化及其解离过程，为研究GPCR信号转导提供了可靠且灵敏的平台。本方案可适用于多种GPCR家族，包括B类和C类GPCR以及孤儿GPCR10,12。本文以A类GPCR中的β2-AR和CB1R为例报告了实验结果。

G蛋白偶联受体（GPCR）在其相应激动剂的刺激下会招募G蛋白，最终导致其解离为两个亚基：一侧为Gα，另一侧为必需的Gβγ二聚体。在本实验方案中，可通过检测与不同G蛋白组分相连的BRET配对分子所介导的G蛋白解离过程，来监测GPCR的激活状态。

实验结果表明，基于BRET的G-CASE生物传感器在配体刺激β2-AR或CB1R后，可有效检测Gs或Gi

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

HEK-CB1 细胞由 M. Guzman（西班牙马德里康普顿斯大学）惠赠，β2-肾上腺素能受体质粒由 D. Perrais（法国波尔多神经科学跨学科研究所 IINS）惠赠。Gi3-CASE 和 Gs(short)-CASE 由 Gunnar Schulte 惠赠（Addgene 质粒 # 168122；Addgene 质粒 # 168124）。部分示意图使用 BioRender.com 制作。本研究得到法国高等教育与研究部以及法国国家科研署（ANR）PolyFADO（ANR-21-CE44-0019）、AlzCaBan（ANR-24-CE44-4647）和 SCHIZOLIP（ANR-22-CE44-0034）项目的资助。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
高级96孔培养板，白色，带透明平底，带盖，Greiner bio-oneDutscher655983
BrightMax ClearLine 白色封膜Dutscher760245
ClarioSTAR LVFBMG Labtech
二甲基亚砜（DMSO）SigmaD4540
不含氯化钙和氯化镁的改良型DPBS，液体，经无菌过滤，适用于细胞培养Sigma D8537
Dulbecco’s 改良 Eagle’s 培养基（DMEM）GlutaMAXSigmaD0822使用前在37 °C 水浴中预热
胎牛血清（FBS）Sigma F9665
Galphai3-Nluc-Gbeta1-Ggamma2-VenusAddgene168122https://www.addgene.org/Gunnar_Schulte/
由Gunnar Schulte惠赠
Galphas（短亚型）-Nluc-Gbeta3-Ggamma1-VenusAddgene168124https://www.addgene.org/Gunnar_Schulte/
由Gunnar Schulte惠赠
稳定表达CB1R的HEK-293T细胞（HEK CB1）由M. Guzman（西班牙马德里康普顿斯大学）惠赠
野生型HEK-293T细胞（HEK wt）
异丙肾上腺素SigmaI6504溶于H2O中，储存于–20 °C
Lipofectamine 2000Invitrogen 11668019
Opti-MEM I 低血清培养基，含GlutaMAX补充剂Fischer11564506
pcDNA3 Flag β2-肾上腺素受体 C端标签载体（pcDNA3 Flag beta-2-adrenergic-receptor tag FLAG C-ter）由D. Perrais（IINS，波尔多）惠赠
pcDNA3.1-(空载体)-TAGAddgene138209
青霉素/链霉素Sigma P4333
聚-L-赖氨酸溶液（PLL）SigmaRNBL7086
胰蛋白酶-EDTA Sigma T3924
WIN-55,212-2Cayman Chemicals10009023溶于DMSO中，储存于–20 °C

参考文献

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Formal Correction: Erratum: BRET-based G Protein Biosensors for Measuring G Protein-Coupled Receptor Activity in Live Cells
Posted by JoVE Editors on 3/31/2026. Citeable Link.

This corrects the article 10.3791/68463

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GPCR BRET G 96 HEK293T 2 CB1
基于BRET的G蛋白生物传感器用于活细胞中G蛋白偶联受体活性的检测
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