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方法文章

心力衰竭患者血浆和粪便代谢物与肾动脉功能及组织病理学的关联

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DOI：

10.3791/68583

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2025年9月9日

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1Department of Cardiology and Institute of Vascular Medicine, Peking University Third Hospital, State Key Laboratory of Vascular Homeostasis and Remodeling, Peking University, 2Institute of Cardiovascular Sciences, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center; State Key Laboratory of Vascular Homeostasis and Remodeling, Peking University, 3Beijing Key Laboratory of Cardiovascular Receptors Research, 4Research Unit of Medical Science Research Management/Basic and Clinical Research of Metabolic Cardiovascular Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences, Haihe Laboratory of Cell Ecosystem, 5Department of Cardiology, State Key Laboratory of Complex Severe and Rare Diseases, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, 6Department of Urology, Peking University First Hospital; Institute of Urology, Peking University; Beijing Key Laboratory of Urogenital Diseases (Male) Molecular Diagnosis and Treatment Center, National Urological Cancer Center, 7Institute of Cardiovascular Diseases, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, 8Research Center for Cardiopulmonary Rehabilitation, University of Health and Rehabilitation Sciences Qingdao Hospital (Qingdao Municipal Hospital), School of Health and Life Sciences, University of Health and Rehabilitation Sciences

* These authors contributed equally

本文内容

摘要

本文介绍了一种用于阐明心肾综合征中由心脏代谢物驱动的肾血管功能障碍的多模态研究平台的建立方案。

摘要

肠道微生物群及其相关的宿主-微生物共代谢物 increasingly 被认为是系统性代谢平衡和心肾轴的关键调节因子，尤其是在心肾综合征的背景下。尽管临床证据表明心脏功能障碍可能引发或加重肾脏的病理改变，但介导心肾轴的关键代谢信号分子及其潜在机制仍不明确。本研究建立了一种新型的系统性研究平台，整合心代谢特征与肾脏血管功能分析，包括：（1）心力衰竭患者血浆/粪便代谢物的分离与提取；（2） 离体 肾脏血管分离与原代培养技术；（3）一种多模态评估框架，用于研究心肾代谢相互作用，整合了血管功能检测、肾血管损伤标志物的分子生化检测以及组织病理学分析。与健康对照相比，心力衰竭患者来源的代谢物损害了肾血管功能并诱导了炎症反应，凸显其作为心肾综合征功能性生物标志物的潜力。本研究未聚焦于特定代谢物，因此未来需借助LC-MS/MS和NMR等分析技术，进一步鉴定和验证发挥致病作用的具体代谢物类型。该平台的应用表明，心脏疾病相关代谢物可损害肾血管功能与稳态。这些发现揭示了驱动心肾相互作用的代谢机制，并提供了一种转化研究工具，用于识别新的生物标志物和治疗靶点。

引言

心肾综合征（Cardiorenal Syndrome, CRS）是一种复杂的病理状态，其特征是心脏与肾脏之间相互损害。这两个器官之间复杂的相互依赖关系最早由 Robert Bright 于 1836 年描述，他系统地记录了晚期肾脏疾病相关的心脏显著结构改变1。CRS 的患病率与心血管疾病（CVD）和慢性肾脏病（CKD）的共存密切相关。研究表明，约 30% 的心力衰竭患者同时患有 CKD，而 CKD 患者中 44%–51% 的死亡直接归因于心血管事件2。

CRS 的管理面临若干重大挑战。首先，临床诊疗仍处于碎片化状态，缺乏多学科协作和早期预警机制，常导致在失代偿期干预延迟3。其次，当前的治疗策略面临一种矛盾困境：传统疗法（如利尿剂和肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）抑制剂）可缓解心力衰竭症状4；然而，长期或高剂量使用可能激活 RAAS 和交感神经系统（SNS），加重肾脏缺氧和纤维化，最终导致利尿剂抵抗和肾功能恶化5。类似地，尽管血管紧张素转换酶抑制剂（ACEIs）和血管紧张素受体阻滞剂（ARBs）可减轻心肾损伤，但因其可能引起血清肌酐升高或高钾血症，临床应用常受限，仅有 30%–40% 的患者能够耐受长期治疗6。

鉴于这些挑战，迫切需要识别有效的早期生物标志物，并更深入地理解心肾综合征（CRS）的发病机制，以促进发现新的治疗靶点。然而，目前在识别可干预的心肾相互作用介质方面存在局限性——特别是那些直接将心脏功能障碍与肾脏血管损伤关联起来的疾病特异性代谢物——这阻碍了满足这些未被满足的临床需求的进展。新兴证据表明，与心脏疾病相关的代谢物可能通过重编程肾脏血管稳态，既作为诊断生物标志物，又作为CRS的机制驱动因素，但它们在启动或放大肾脏损伤过程中的时空作用仍不清楚7,8,9。最近的研究表明，鞘氨醇类（ceramides）等内源性代谢物可在心肾条件下主动加剧血管炎症和重塑，凸显了代谢物感知在血管病理中的广泛意义10。

在心肾综合征（CRS）累及的肾脏结构中，血管系统日益被认为是损伤的首要且早期靶点。肾脏微循环中的内皮功能障碍——表现为一氧化氮生物利用度降低、氧化应激以及促炎性和促血栓性介质表达升高——可导致微血管稀疏、血管通透性增加和局部缺氧11。与此同时，对调节动脉张力和顺应性至关重要的血管平滑肌细胞（VSMCs）在CRS中也易受到代谢紊乱的影响。越来越多的证据表明，疾病相关代谢物可破坏VSMC的收缩功能，促进不良重塑，并导致血管僵硬度增加和肾灌注受损。尽管VSMCs具有关键作用，但在当前的CRS模型中，由平滑肌介导的血管功能障碍机制仍缺乏充分研究8,12。这些病理生理变化不仅加剧肾脏损伤，还会促进不良的神经激素激活和全身血流动力学紊乱，进一步损害心脏功能，推动CRS的持续进展13。因此，靶向肾脏血管损伤为深入理解CRS早期发病机制提供了具有机制意义的切入点，也为探究心肾代谢相互作用提供了一个合理的研究方向。

为解决这些空白，本研究优先系统性地鉴定与心力衰竭相关的代谢物，并验证其作为心肾综合征（CRS）进展核心调控因子的功能。本工作通过阐明这些代谢物如何诱导肾血管功能障碍、激活炎症级联反应以及损害组织修复机制，弥合了观察性生物标志物发现与发病机制研究之间的关键脱节。目前用于研究CRS的传统模型——包括动物模型、体外细胞培养和诱导性多能干细胞（iPSC）来源的类器官——均存在各自局限性14。动物模型因种间差异而限制了其临床相关性。体外培养缺乏器官层面的整合性，而尽管iPSC来源的类器官能够模拟心肌细胞与肾小管上皮细胞之间的相互作用，但仍处于功能不成熟状态，且仅限于早期发育阶段15。此外，现有的血管类器官系统主要由内皮单层或原始微血管构成，缺乏可收缩的平滑肌层以及评估血管水平对代谢损伤反应所必需的功能性读出指标16。

相比之下，我们的平台采用人源性心脏代谢物以及 离体 人类肾血管系统，可实现生理相关且结构完整的 离体 人肾动脉，从而在血管界面实现对心肾代谢相互作用的生理相关且机制明确的分析。该方法在模拟心肾综合征进展背后的心肾器官间代谢通讯方面具有独特优势。我们开创性的心肾整合研究平台融合了三项核心技术：心力衰竭来源的血浆/粪便代谢物的代谢组学分析、 离体 肾血管隔离/培养系统，以及多模态功能-分子-组织病理学评估。该平台的每个组成部分均经过优化，以确保可重复性和转化相关性，包括使用 200 µL 血浆或 0.1 每份样品含 g 粪便材料，将 2 mm 人肾动脉段在 37 °C、5% CO₂ 条件下孵育2 长达24小时，并通过基于定量实时聚合酶链式反应（qRT-PCR）的方法检测血管损伤标志物。该系统不仅解析了代谢物特征的诊断潜力，还直接揭示了其在慢性肾病-心脏综合征（CRS）病理过程中的因果作用，从而通过分子水平上跨器官代谢失调的图谱绘制，实现治疗靶点的识别。通过连接机制性发现与临床转化，这一双焦点研究范式将CRS的管理从被动的症状控制转变为基于生物标志物的主动干预。

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方案

本研究中采用的实验方案和病例方法已获得北京大学第一医院泌尿外科（伦理审查编号：2023yan500-002）和北京协和医院（批准号：I-23PJ585）的伦理批准，严格遵循《赫尔辛基宣言》中所规定的伦理原则。本研究纳入自2019年7月起在北京协和医院（PUMCH）住院的男性或女性患者，且均由至少两名经验丰富的心脏病学专家诊断为心力衰竭（HF）。共有四名心力衰竭患者（HF1–HF4）被纳入研究，用于血浆和粪便代谢物的提取。所有受试者在参与研究前均签署了书面知情同意书。实验仪器和试剂详见材料表。

1. 血浆和粪便样本处理—极性代谢物提取

  1. 样本采集
    1. 使用无菌的预冷收集管收集所有血浆和粪便样本，并在采集后立即用液氮速冻。将样本储存于 -80 °C 直至处理。
    2. 为确保代谢物稳定性，所有样本应在一次冻融循环内完成处理，且样本采集至提取之间的时间间隔不得超过 2 周。
      注：采取这些措施旨在最大限度减少代谢物降解，并确保下游代谢组学分析的可重复性。
    3. 分别按照步骤 1.3 或 1.4 的方案从粪便和血浆样本中提取代谢物。
  2. 研究人群
    1. 记录所有参与者的基线血压测量值及其用药史。
    2. 在任何急性临床恶化发生前采集患者样本，排除患有主要代谢性合并症（如糖尿病、原发性高血压）的个体，以尽量减少代谢组学分析中的混杂因素（补充表 S1）。
    3. 采用标准程序获取每位受试者的临床信息。
  3. 血浆提取
    1. 将原始血清在 14,000 × g 条件下离心 10 分钟（4–8 °C）。将上清液转移至新的 1.5 mL 微量离心管中。
    2. 加入预冷（-80 °C）的 HPLC 级甲醇，使甲醇终浓度达到 80%（v/v）。轻轻颠倒混匀，并在 -80 °C 下孵育 6–8 小时。
    3. 在 14,000 × g 条件下离心 10 分钟（4–8 °C）。将甲醇上清液转移至新管中，用于代谢组学分析。
      ​注：样本采集后应在 2 小时内放入 -80 °C 冰箱，并尽量减少冻融循环次数，以确保代谢物稳定性。
  4. 粪便提取
    1. 向 1.5 mL 微量离心管中的新鲜或冷冻粪便样本中加入 500 µL 预冷（-80 °C）的 HPLC 级甲醇。在干冰上使用微型研杵或组织匀浆器匀浆 1–2 分钟，随后涡旋振荡（4–8 °C 下 1 分钟），并在 -80 °C 下孵育 4 小时。
    2. 使用冷藏离心机在 14,000 × g 条件下离心 10 分钟（4–8 °C）。将上清液转移至新的 1.5 mL 微量离心管中；储存于 -80 °C，直至进行步骤 1.4.4。
    3. 用 400 µL 预冷（-80 °C）的 HPLC 级甲醇重悬沉淀。充分涡旋振荡（4–8 °C 下 1 分钟），并在 -80 °C 下孵育 30 分钟。
    4. 重复离心（14,000 × g，10 分钟，4–8 °C）。合并两次提取的上清液。
    5. 进行最终澄清离心（14,000 × g，10 分钟，4–8 °C）。将纯化的上清液转移至无菌的 1.5 mL 管中，用于后续分析。
      注：粪便样本采集后应在 2 小时内放入 -80 °C 冰箱，并尽量减少冻融循环次数，以确保代谢物稳定性。

2. 肾动脉分离

  1. 受试者筛选与组织采集
    1. 对接受肾癌根治性肾切除术的患者进行筛选。仅纳入年龄 ≥ 18 岁且无代谢合并症（如原发性高血压、糖尿病）的患者。术中采集距离肿瘤边缘至少 3 cm 的组织学正常肾实质。
    2. 将获取的标本立即浸入充氧的 Krebs-Henseleit 缓冲液（4 °C，pH 7.4；成分单位为 mM：119.0 NaCl，4.7 KCl，2.5 CaCl2，1.0 MgCl2，25.0 NaHCO3，1.2 KH2PO4，11.0 葡萄糖）中。在手术后 6 小时内完成组织分离操作。
  2. 肾组织制备
    1. 在 4 °C 的 Krebs 缓冲液中进行冠状面切片，以获得包含完整肾门结构的半肾组织标本。使用体视显微镜系统（40 倍放大）进行显微解剖，暴露肾弓状动脉分支并识别弓状动脉。
  3. 微血管解剖
    1. 使用显微角膜剪逐层去除血管周围外膜组织，实现动脉节段的精确分离。
    2. 保留直径约为 500 µm 的动脉节段。
    3. 使用显微镊进行无张力操作，以最大限度减少内皮剪切应力。在低温条件（4 °C）下进行解剖操作，并每 15 分钟更换一次 Krebs 缓冲液，以维持生理 pH 和离子稳态。
      注：明确量化动脉尺寸与缓冲液成分、从标本获取（4 °C）到处理（4 °C）全过程的温度控制，以及在标本采集后 6 小时内完成全部微血管解剖操作，可确保组织活力与功能完整性的最优化。

3. 肾动脉与心脏损伤代谢物的孵育

  1. 血管组织准备：在无菌条件下显微解剖肾动脉，并使用精细的眼科镊子仔细去除附着的血管周围结缔组织。使用无菌显微剪将分离出的肾动脉切成2 mm的节段，用于后续的类器官培养。
  2. 抗生素去污染：用添加了三联抗生素/抗真菌混合液的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤血管节段，每次5分钟，共洗涤3次，以最大限度减少微生物污染，并在代谢物处理前确保无菌状态。
  3. 实验分组：将血管节段随机分配至四个实验组，并转移至24孔培养板中，每孔加入500 µL的DMEM培养基（Dulbecco改良Eagle培养基）。
  4. 代谢物干预
    1. 添加以下四组来源的代谢物：1）健康对照血浆来源代谢物（HC-P）；2）心力衰竭患者血浆来源代谢物（HF-P）；3）健康对照粪便来源代谢物（HC-F）；4）心力衰竭患者粪便来源代谢物（HF-F）。
    2. 将代谢物提取物用甲醇（HPLC级）重悬，每孔加入10 µL提取物至24孔板中，每孔含500 µL DMEM培养基及肾动脉节段（终浓度为2% (v/v)）。对照孔中加入等体积的溶剂（甲醇/PBS混合液）。
  5. 培养条件：将培养板置于加湿培养箱中，在标准细胞培养条件下（37 °C、5% CO2、95%湿度）孵育24小时。

4. 肾动脉环实验

  1. 肾动脉环的悬挂与固定
    1. 钢丝准备：在光学显微镜下，将两根平行的2 cm不锈钢丝（预先在Krebs溶液中平衡，95% O2/5% CO2）穿入动脉腔内，确保两端钢丝伸出长度相等。
    2. 肌动仪安装：开启加热系统和气体供应，以维持生理温度和氧合状态。将钢丝水平固定于温控丝肌动仪浴槽中（内含Krebs溶液，95% O2/5% CO2）。调节旋钮螺丝，保持血管自然松弛状态。
  2. 通过血管特异性标准化确定最佳初始张力
    注：采用标准化程序调整静息张力，以统一基线条件、优化血管反应性并确保可重复性。在进行标准化前，先平衡30分钟。
    1. 从DMT菜单中选择标准化设置，使用以下参数：目镜校准：1 mm/格；目标压力：13.3 kPa；IC1/IC100比值：0.9 C；在线平均：3 s；延迟时间：60 s。
      注：相关背景信息和系统配置详情见参考文献17。
    2. 为标准化血管，选择感兴趣的通道，并将数据填入标准化界面。根据千分尺读数和40 µm的钢丝直径设定组织端点。
    3. 施加被动牵张，等待3分钟。加入60K+以诱导钾介导的收缩，并等待收缩达到平台期。用Krebs溶液冲洗3次，每次5分钟，以清除60K+。通过从轨迹记录的钾诱导力中减去各牵张水平下的被动力，计算主动收缩力。
    4. 重复步骤4.2.3，直至获得最大主动收缩力。将最佳静息张力定义为每条动脉产生最大主动张力的水平，以高K+引起的峰值反应作为参考收缩指标。
    5. 在进一步实验前，使动脉环平衡10分钟。
      注：由于不同个体间血管等级、厚度和来源存在显著差异，需对每条血管单独进行标准化，以确保可重复性。利用丝肌动仪系统的标准化模块，根据每条血管的被动直径和力学特性确定适当的基线张力。在所有样本的功能测试前，均应一致地执行该程序。
  3. 肾动脉环反应性检测
    1. 为研究不同代谢物对血管收缩功能的影响，使用健康志愿者和心力衰竭（HF）患者血浆及粪便提取的代谢物孵育肾动脉12小时后，进行血管收缩功能检测。具体细节参见第3节。
    2. 使用60K+诱导钾介导的收缩。确保每个腔室含有5 mL Krebs溶液。
    3. 为测定苯肾上腺素（Phe）诱导的动脉环浓度依赖性收缩，以半对数递增方式加入Phe，浓度范围为10-9至10-4 M。从最低Phe浓度开始，将其加入腔室，并等待收缩达到稳定状态。
    4. 标记收缩达到稳定时的点（即记录平台期的张力值），然后进行下一浓度。重复此过程，直至完成最终浓度的添加。
    5. 实验结束后，保存数据文件并取出动脉环。用8%乙酸溶液彻底清洗腔室，随后孵育3分钟。
    6. 关闭加热系统和气体供应，在关闭气体前确保所有液体已清除干净。

5. 肾动脉组织病理学检查：苏木精-伊红染色

注意：危险试剂和生物废弃物的处置应遵循机构的生物安全和化学卫生规程。具体而言，二甲苯和多聚甲醛应收集于贴有标签且可密封的化学废液容器中，并存放在指定的通风橱区域，随后由经认证的危险废物处理人员进行处置。用于肌动描记器腔室清洁的乙酸必须经中和后，按照标准的酸性废液处理程序进行处置。切勿将上述任何试剂排入实验室下水道。

  1. 用冷 PBS 清洗动脉，并在 4% 多聚甲醛（pH 7.4）中固定过夜。切成 4 µm 连续切片，进行组织学处理。
  2. 将贴附于玻璃载片上的组织切片置于切片烘箱中，60 °C 孵育 1 小时，然后立即转移至二甲苯中。将切片浸入二甲苯（3 次，每次 5 分钟）。
  3. 进行梯度乙醇水化处理：100% 乙醇（2 次，每次 5 分钟）、95% 乙醇（1 次，5 分钟）、90% 乙醇（1 次，5 分钟）、80% 乙醇（1 次，5 分钟）、70% 乙醇（1 次，5 分钟），最后用超纯水冲洗（1 次，5 分钟）。
  4. 用苏木精染液（0.5% w/v）染色 5 分钟，然后在流水下冲洗。
  5. 用 1% 酸性乙醇（盐酸-乙醇）分化 5–10 秒，再在流水下冲洗。
  6. 将切片置于 0.6% 氨水溶液中返蓝，然后在流水下冲洗。
  7. 将切片浸入伊红染液（1% w/v）中染色 2 分钟。
  8. 用 95% 乙醇（2 次，每次 5 分钟）、100% 乙醇（2 次，每次 5 分钟）脱水，并用二甲苯（2 次，每次 5 分钟）透明。
  9. 短暂空气干燥至切片透明，加入封片剂封片，盖上盖玻片，并用中性封固剂密封盖玻片。
  10. 进行明场成像及组织形态计量学评估。

6. 肾损伤相关分子生物标志物的检测

  1. 肾动脉 mRNA 提取
    1. 将液氮中保存的冷冻血管组织加入1 mL RNA提取试剂中，转移至预冷的组织匀浆器中充分匀浆。
    2. 每100 µL提取试剂中加入250 µL氯仿，剧烈涡旋振荡30秒，于25 °C孵育10分钟。
    3. 在 12,000 × g 条件下离心 g （10 分钟，4 °C）离心，将水相转移至新离心管中。
    4. 向水相中加入500 µL异丙醇，倒置混匀，并在25 °C孵育20分钟。
    5. 在 12,000 × g 条件下离心 g （4 °C，10 分钟），弃去上清液。
    6. 用1 mL 75%乙醇洗涤沉淀（2次，每次5分钟），空气干燥RNA沉淀，然后重悬于DEPC-H₂O中2O（0.1% v/v）。
      注意：验证RNA纯度（OD260/OD280 = 1.9-2.0），并确认完整的28S/18S rRNA条带。
  2. cDNA合成
    1. 将 2 µg mRNA 与 1 µL oligo(dT) 引物混合，用 DEPC-H₂O 定容至 8 µL2O（0.1% v/v），70 °C 加热 5 分钟，然后迅速置于冰上冷却 5 分钟。
    2. 在10 µL的2x TS反应混合液中加入1 µL RT/RI酶混合液和1 µL gDNA去除剂，配制逆转录主混合液。将12 µL主混合液加入第6.2.1步的8 µL RNA/引物混合液中，使总反应体积达到20 µL。
    3. 将步骤6.2.2中的混合物在42 °C加热60分钟，然后在85 °C加热5分钟以终止反应。
    4. 将20 µL逆转录反应液加入80 µL无核酸酶的H₂O进行稀释2O，终体积为100 µL（4倍稀释）。将稀释后的cDNA用作定量PCR的模板。
  3. 定量 PCR 分析
    1. 将 2.0 µL cDNA 模板、0.5 µL 正向引物（10 µM）、0.5 µL 反向引物（10 µM）、10 µL SYBR Green 预混液（2x）和 7 µL ddH₂O 混合，配制反应体系。2O.
    2. 使用以下程序进行PCR：初始变性：95 °C/3 min；40个循环：95 °C/30 s、Tm-5 °C/30 s、72 °C/30 s；熔解曲线：65–95 °C（+0.5 °C/5 s）。
    3. 采用2-ΔΔct法分析基因表达。引物序列见下表 补充表 S2.

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结果

该队列包括两名女性和两名男性，年龄范围为46至73岁（平均年龄：64.0岁）。基线血压测量显示收缩压在109至168 mmHg之间，舒张压在68至115 mmHg之间。所有心力衰竭患者均有记录在案的用药史，包括β受体阻滞剂、他汀类药物和抗血小板药物等常见心脏保护药物，而在肾素-血管紧张素系统抑制剂和利尿剂的使用上存在个体差异。对照组纳入了四名无任何心脏病或心力衰竭相关症状或体征的受试者，其健康状况经医生咨询、体格检查和实验室检测确认。

本研究旨在系统评估心力衰竭患者因心肌损伤产生的循环代谢物所介导的肾损伤病理机制，这些代谢物主要分布于血浆中，并包括源于肠道屏障功能障碍的肠道来源代谢物。为此，我们建立了一个整合了形态学、分子生物学及功能学评价的综合评估体系（图1）。通过检测促炎性细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达水平，评估代谢物诱导的血管炎症反应。这些分子是心血管病理过程中内皮细胞活化和白细胞募集的核心介质。在暴露于心脏来源代谢物后，进一步检测了内皮损...

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讨论

近期关于心肾综合征（CRS）的研究已确定代谢重编程是一种关键的病理机制，其中代谢物可调节肾脏血管稳态7,8,9。尽管血管平滑肌细胞（VSMCs）在调节CRS中的血管张力和顺应性方面发挥着关键作用，本研究提供了直接证据，表明与心脏损伤相关的代谢物会损害血管平滑肌的收缩功能和结构完整性。具体而言，我们的研究结果表明，慢性心力衰竭（CHF）患者体内血浆和肠道来源的代谢物可促进肾动脉中膜层VSMCs的增殖，并损害血管收缩功能。所观察到的中膜层重塑，表现为血管平滑肌细胞密度增加，可能源于代谢应激诱导的慢性炎症。血管收缩功能评估显示，在用心力衰竭（HF）患者血浆和粪便代谢物处理后，肾动脉的收缩反应性降低，提示存在炎症介导的血管功能障碍。

显著上调 IL-1β，IL-6 和 MCP-1 支持存在一个自我持续的炎症环路，而内皮黏附分子ICAM-1和VCAM-1的同时升高则提示内...

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

本工作获得了国家重点研发计划项目资助&中国国家重点研发计划（2021YFF0501401，2018YFA0800501 资助 Y. Z.，2021YFF0501404 资助 Y. L.），国家自然科学基金（82325004 和 92168114 资助 Y. Z.，82300286 资助 J. Z.，92168113 资助 E. D.，82170422 资助 Y. L.），海河实验室细胞生态系统创新基金（HH22KYZX0047 资助 E. D.），中国博士后科学基金（BX20220023，2022M720288 资助 J. Z.），北京市自然科学基金（7252157 资助 J. Z.），北京市自然科学基金（7232096 资助 Y. L.），北京大学第三医院血管稳态与重构国家重点实验室研究项目（北京大学；2024-VHR-SY-07 资助 Y. Z.）。图1使用经授权许可的 Biorender.com 软件绘制。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
DMEM 高糖GibcoCat# 06-1055-57-1-ACS
PBSSolarbioCat# P1010
青霉素-链霉素-两性霉素 BThermo Fisher ScientificCat# 15240062
去氧肾上腺素MCECat#HY-B0769
逆转录系统PromegaCat# A5001
体视显微系统LeicaM80
SYBR Green 荧光定量预混液Thermo Fisher ScientificCat# 4309155
血管张力测定系统DMT620M

参考文献

  1. Cases and observations illustrative of renal disease, accompanied with the secretion of albuminous urine. Med Chir Rev. 25 (49), 23-35 (1836).
  2. Schefold, J. C., Filippatos, G., Hasenfuss, G., Anker, S. D., von Haehling, S. Heart failure and kidney dysfunction: epidemiology, mechanisms and management. Nat Rev Nephrol. 12 (10), 610-623 (2016).
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