本研究评估了蓝狐胆汁对小鼠酒精性肝损伤的保肝作用。蓝狐胆汁含有牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、熊去氧胆酸（UDCA）、胆红素和牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA），可降低肝损伤标志物水平，并通过AGE-RAGE通路、AKT1和PPARG发挥作用，表现出抗炎和抗氧化特性。
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本研究评估了蓝狐胆汁对小鼠酒精性肝损伤的保肝作用。蓝狐胆汁含有牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、熊去氧胆酸（UDCA）、胆红素和牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA），可降低肝损伤标志物水平，并通过AGE-RAGE通路、AKT1和PPARG发挥作用，表现出抗炎和抗氧化特性。
动物胆汁（如熊胆）在传统医学中因其治疗功效已被长期使用。蓝狐胆汁与熊胆类似，在某些传统实践中被认为具有保肝作用。本研究探讨了蓝狐胆汁在小鼠酒精性肝损伤中的成分及其作用。研究从30只蓝狐中采集胆汁，并加工成干燥粉末。采用高效液相色谱法和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术分析蓝狐胆汁的化学成分。利用网络药理学方法鉴定与酒精性肝损伤相关的潜在生物活性成分、作用靶点及信号通路。采用昆明小鼠建立酒精性肝损伤动物模型，并分别给予低剂量和高剂量的蓝狐胆汁粉末干预。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆固醇水平。通过苏木精-伊红染色和丙二醛（MDA）测定法评估肝脏组织病理变化。通过分子对接分析预测活性成分与核心靶点之间的结合亲和力。研究发现，蓝狐胆汁中含有牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、熊去氧胆酸、胆红素和牛磺鹅去氧胆酸。组织病理学分析显示，口服蓝狐胆汁粉末后，主要器官未见明显异常或毒性反应。蓝狐胆汁的核心靶点包括蛋白AKT1、PPARG、IGF1、MMP9和CASP3。在酒精性肝损伤小鼠模型中，蓝狐胆汁治疗可降低血清ALT、AST、胆固醇及MDA水平。网络药理学与分子对接结果提示，蓝狐胆汁的保肝作用可能与晚期糖基化终末产物及其受体（AGE-RAGE）信号通路相关。总体而言，蓝狐胆汁含有与熊胆相似的TUDCA成分，可作用于AKT1和PPARG等蛋白，在酒精性肝损伤的防治中表现出潜在的抗炎与抗氧化作用。
酒精相关性肝病（ALD）涵盖一系列肝脏损伤，其严重程度从无症状的实验室检查异常到伴有肝硬化的晚期肝病不等，最严重的形式可表现为危及生命的终末期肝病，并伴随多器官功能衰竭1。ALD 的患病率包括酒精相关性脂肪性肝病，后者属于相对较轻且可能可逆的 ALD 形式1。酒精性肝炎以炎症为特征，临床表现从无症状的脂肪性肝炎到急性酒精性肝炎不等，后者表现为急性黄疸，可进展为肝衰竭，短期死亡率较高1。酒精及其代谢产物通过多种机制改变脂质代谢并促进脂质积聚（脂肪变性），包括抑制线粒体脂肪酸β-氧化以及刺激脂肪生成2。乙醇上调转铁蛋白受体1的表达，从而增加肝脏对铁的摄取2。酒精和乙醛均可直接损伤肝细胞，导致氧化应激增加、S-腺苷甲硫氨酸再生受抑、损伤相关分子模式（DAMPs）释放、门脉循环中暴露于细菌内毒素以及蛋白质加合物的形成2。由于涉及多种致病通路，ALD 的治疗仍具挑战性3。目前正在研究的未来治疗策略包括经验性使用益生菌、生长因子、抗氧化剂、靶向炎症相关因子的单克隆抗体以及技术增强的行为干预措施。然而，仍需探索更多全面的治疗策略。
越来越多的证据表明，由于动物....
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本研究方案经黑龙江中医药大学动物实验伦理委员会审查并批准（批准号：2023021101）。所有动物实验均遵循ARRIVE指南（动物研究：体内实验报告指南）以及国家和机构有关实验动物护理与使用的相关指南。由于本研究涉及动物实验，不适用知情同意要求。所有动物繁育和取皮操作均严格遵守《中国野生动物驯养繁殖技术管理规定》。本研究已获得中国黑龙江中医药大学动物实验伦理委员会的批准（批准号：2023021101）。
蓝狐胆汁样品制备
蓝狐胆汁资源见材料表。共采集30只蓝狐（Vulpes lagopus）样本，采用电击法实施安乐死，随后取皮并收集胆囊。蓝狐胆囊呈椭圆形，上部较窄，下部膨大。其外表呈深棕色，可见皱褶，囊膜较薄。使用1 mL无菌一次性注射器立即抽取胆汁，胆汁呈深黑色或深绿色。随后将胆囊于37 °C干燥48 h，获得干燥的蓝狐胆汁粉末（图1）。所得胆汁粉末呈黄褐色，具有光泽且质地脆。每枚胆囊平均获得干燥胆汁粉末约0.82 ± 0.30 g。样品制备时，取250 mg干燥胆汁粉末（来自上述蓝狐或熊，见材料表），溶于1 mL色谱级70%甲醇中。溶液经超声处理（40 kHz，300 W），通过0.22 µm滤膜过滤，定容至50 mL（即浓度为5 mg/mL），再稀释至工作浓度0.5 mg/mL，用....
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蓝狐胆汁中活性成分的鉴定
蓝狐和熊均为食肉动物，具有相似的消化生理和代谢特征20。因此，它们的胆汁成分可能具有相似性。采用上述色谱条件，各化合物均得到良好分离（图2）。本实验中，利用牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）标准品21的保留时间对蓝狐胆汁中的TUDCA进行鉴定（图2）。在保留时间约为10分钟、12分钟和21分钟处出现的色谱峰被鉴定为TUDCA，其保留时间一致（表2），支持蓝狐胆汁中存在TUDCA。蓝狐胆汁与熊胆汁共有10个保留时间一致（相对标准偏差（RSD）<2%）且组分比例相似的色谱峰。
采用UPLC-Q-TOF/MS正离子模式进一步分析蓝狐胆汁，共检测到41个质谱峰（图3）。其中，鉴定了4个峰（表3
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根据2018年世界卫生组织（WHO）发布的《酒精与健康全球状况报告》，中国的人均酒精消费量从2005年的4.1升上升至2016年的7.2升，增幅达76%。长期饮酒所致的酒精性肝病（ALD）仍是肝病相关发病率和死亡率的主要病因之一22。Bo等研究人员在小鼠中建立了四氯化碳（CCl4）诱导的肝损伤模型，观察到蓝狐胆汁可显著降低AST、ALT、总胆固醇（T-CHO）和丙二醛（MDA）水平23。本研究的药理学实验结果与此一致，表明蓝狐胆汁对小鼠酒精性肝病具有治疗作用。
本研究中，以27.4%浓度、40 mL/kg剂量、每日两次、连续给药14天的条件下对蓝狐胆汁粉进行急性毒性评估，结果显示其具有良好的安全性。未观察到明显死亡率、严重毒性反应或长期器官损伤。仅出现轻微且短暂的症状，如俯卧姿势和稀便，可能与胆汁类物质苦寒的性质有关，但这些效应迅速消退，无持久后果。低剂量组（LH组）体重保持稳定，与对照组（CN组）相比无显著差异。大体解剖及组织病理学检查均未发现主要器官存在异常。鉴.......
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作者声明无利益冲突。
本工作得到国家自然科学基金青年科学基金（编号：82204562）的资助。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 0.03M 磷酸二氢钠 | N/A | N/A | HPLC 流动相 A |
| 0.1% 甲酸水溶液 | Fisher Scientific, USA | N/A | UPLC 流动相 |
| 0.22 μm 微孔滤膜 | N/A | N/A | 样品过滤 |
| 4% 多聚甲醛 | N/A | N/A | 组织固定 |
| 色谱级乙腈 | Fisher Scientific, USA | N/A | UPLC 流动相 |
| ALT、AST、T-CHO 检测试剂盒 | 上海源叶生物科技有限公司，中国 | N/A | 血清生化分析 |
| 分析天平 | N/A | N/A | 动物体重测量 |
| 熊去氧胆酸 | 中国食品药品检定研究院 | N/A | HPLC/MS 内标物 |
| 熊胆粉 | 中国食品药品检定研究院，北京 | N/A | 对照品 |
| 胆红素 | 未指明 | N/A | 胆汁中鉴定的活性成分 |
| 蓝狐 | 中国黑龙江绥化狐狸养殖场 | N/A | 胆汁来源 |
| 蓝狐胆粉 | 实验室自制 | N/A | 成分分析样品 |
| C18 HPLC 色谱柱 | Agilent Technologies, USA | ZORBAX SB-C18 (4.6×150 mm, 5 μm) | HPLC 分离 |
| Cytoscape | https://cytoscape.org/ | Version 3.9.1 | 网络可视化与拓扑分析 |
| DAVID | NIH | https://david.ncifcrf.gov/ | GO/KEGG 富集分析 |
| GeneCards | Weizmann 研究所 | https://www.genecards.org/ | 疾病相关基因检索 |
| 苏木精-伊红（H&E） | N/A | N/A | 组织学染色 |
| HPLC 系统 | Agilent Technologies, USA | 1200 Infinity | 胆汁成分分析 |
| 昆明小鼠（SPF 级，18–22g） | 辽宁长生生物技术股份有限公司 | SCXK (辽) 2020-0010 | 酒精性肝损伤模型 |
| 亮氨酸脑啡肽 | Sigma, USA | N/A | 质谱校准标准品（40 fmol/μL） |
| MDA 检测试剂盒 | 上海源叶生物科技有限公司，中国 | N/A | 肝脏氧化应激水平测定 |
| 色谱级甲醇 | Fisher Scientific, USA | N/A | 样品制备溶剂 |
| MOE | Chemical Computing Group | MOE 2022.02 | 分子对接分析 |
| OMIM | NIH | https://omim.org/ | 疾病相关基因检索 |
| 光学显微镜 | N/A | N/A | 组织学观察 |
| PharmMapper | 华东理工大学 | http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/ | 活性成分靶点预测 |
| 磷酸 | N/A | N/A | 流动相 pH 调节 |
| PubChem | NCBI | https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ | 化合物结构检索 |
| RCSB 蛋白质数据库 | https://www.pdbus.org/ | N/A | 蛋白质三维结构来源 |
| 冷冻离心机 | N/A | N/A | 血清与组织分离 |
| 牛磺熊去氧胆酸（TUDCA） | 中国食品药品检定研究院 | N/A | HPLC/MS 内标物 |
| STRING | EMBL | http://version10.string-db.org/ | 蛋白质-蛋白质相互作用分析 |
| UniProt | EMBL-EBI | https://www.uniprot.org/ | 靶点标准化 |
| UPLC-Q-TOF-MS 系统 | Waters, USA | UPLC HSS T3 (100×2.1 mm, 1.8 μm) | 成分鉴定 |
| Venny | CSIC | https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html | 靶点交集可视化 |
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