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研究文章

健脾生血汤缓解环磷酰胺诱导小鼠骨髓抑制的作用机制

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DOI：

10.3791/69542

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2026年1月2日

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan University of Chinese Medicine, 2Department of Traditional Chinese Medicine /Integrative Oncology, Hunan Cancer Hospital/The Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University

本文内容

摘要

本方案系统阐明了健脾生血汤通过整合网络药理学与动物实验方法，缓解环磷酰胺诱导的骨髓抑制的作用机制，揭示其多靶点作用机制及作为辅助治疗的潜力。

摘要

本研究旨在通过网络药理学和动物实验探讨健脾生血汤（JPSXD）缓解化疗所致骨髓抑制的作用机制。为此，分析了JPSXD的关键成分及其作用靶点，并构建了蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）和“药-成分-靶点”网络。通过基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析确定了主要信号通路。采用环磷酰胺（CTX）建立60只C57/BL6小鼠的骨髓抑制模型，给予不同剂量的JPSXD干预7天。检测外周血细胞计数、细胞因子（血小板生成素[TPO]、促红细胞生成素[EPO]、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子[GM-CSF]）、胸腺指数、骨髓形态学、CD34+细胞以及AKT1、JAK2和EGFR的表达水平。网络分析共筛选出172种化合物和454个靶点，其中PI3K-Akt和JAK-STAT通路最为显著。体内实验结果显示，CTX显著降低白细胞计数及信号蛋白水平，而JPSXD可恢复血细胞水平，上调AKT1、JAK2和EGFR表达，并改善胸腺指数（p < 0.05）。中、高剂量JPSXD可提高TPO、EPO、GM-CSF水平及CD34+细胞数量，并改善骨髓结构，其中高剂量组效果最为显著。综上所述，JPSXD通过多靶点、多通路调控机制缓解骨髓抑制，支持其作为化疗所致白细胞减少症辅助治疗药物的潜在应用价值。

引言

化疗是治疗多种恶性肿瘤的基石，主要通过抑制癌细胞的增殖与存活1,2，从而延长患者的生存期。然而，由于化疗药物对正常组织缺乏选择性，常常会对健康细胞和组织造成严重损伤，导致一系列不良反应3。其中最常见且严重的副作用之一是骨髓抑制，其特征是血细胞生成减少，包括白细胞（WBCs）、红细胞（RBCs）和血小板（PLTs）2,4。骨髓抑制会严重损害免疫防御系统，增加感染、出血、贫血及其他并发症的风险，同时显著降低患者的生活质量，甚至可能危及生命5。因此，缓解和预防化疗引起的骨髓抑制对于提高患者对化疗的耐受性及总体生存率至关重要。

目前，临床上治疗骨髓抑制主要采用造血生长因子，如粒细胞集落刺激因子 [G-CSF]、促红细胞生成素 [EPO] 以及输血疗法6,7。然而，这些方法通常存在成本高、潜在副作用以及疗效有限等问题。因此，探索更安全、更有效的预防和缓解骨髓抑制的方法仍是当前研究的重点。近年来，中医药（TCM）在癌症治疗及管理化疗所致不良反应方面受到广泛关注8,9。许多中药方剂被认为具有补益和免疫调节作用，例如生血宝合剂10、地黄生白片11 和人参皂苷类化合物12，这些药物不仅能保护正常细胞、减轻毒性副作用，还可增强抗肿瘤疗效。

健脾生血汤（JPSXD）是一个经典的中医方剂，体现了补气养血的治疗原则13。该方剂是在四君子汤联合二至丸基础上进行的精妙化裁，通过多种药材的协同作用，针对气血两虚证进行调理14。该方由人参（Ren Shen）、黄芪（Huang Qi）、淫羊藿（Yin Yang Huo）、白术（Bai Zhu）、山药（Shan Yao）、丹参（Dan Shen）、熟地黄（Shu Di Huang）、菟丝子（Tu Si Zi）、枸杞子（Gou Qi Zi）、女贞子（Nv Zhen Zi）、当归（Dang Gui）、炒麦芽（Chao Mai Ya）、炒鸡内金（Chao Ji Nei Jin）、陈皮（Chen Pi）、薏苡仁（Yi Yi Ren）以及多种其他药材组成。每味药材在方中承担特定作用，遵循中医“君、臣、佐、使”的配伍原则，以确保药效的协调性和靶向性。

四君子汤是中医的基础方剂，以其补气健脾的功效而著称。该方剂广泛用于治疗与气血亏虚相关的病症，如疲劳、食欲不振和免疫力低下。现代药理学研究表明，四君子汤能够增强免疫功能、促进造血功能，并提高机体的自我修复能力15,16。在此基础上，加味四君子汤（JPSXD）添加了其他药材，以进一步增强其补血功效，并针对更为复杂的虚损证候进行调理。例如，熟地黄和当归是主要的补血药材17，而黄芪与人参则协同作用，以增强补气效果，提升整体活力18。

近期研究强调了JPSXD潜在的抗肿瘤作用，表明其多组分、多靶点的作用方式可能抑制肿瘤生长，并增强传统癌症治疗的疗效19,20。该方剂调节免疫反应和改善造血功能的能力，使其在支持接受化疗或放疗的患者方面具有重要价值，这类患者常因治疗而出现气虚血亏的副作用21。此外，处方中包含的丹参和淫羊藿等草药已被证明可改善微循环并增强细胞修复机制，从而有助于该方剂整体治疗效果的发挥22。

现代药理学研究表明，JPSXD 中的每种单味中药均具有与造血功能、抗骨髓抑制、免疫调节、抗氧化以及改善微循环相关的药理活性，为 JPSXD 用于缓解化疗所致骨髓抑制提供了间接的研究依据。表 1 总结了各味中药的主要药理作用及相关参考文献，重点关注涉及造血、抗骨髓抑制、免疫调节以及抗氧化或改善微循环特性方面的研究。JPSXD 中多种成分的复杂协同作用包括各药材之间的协同与拮抗效应，通过靶向多个通路实现整体治疗效果。例如，人参与黄芪配伍可益气，丹参与制地黄合用可养血活血。同时，陈皮与炒麦芽等药材有助于调理消化、防止气滞，确保全方的补益作用能被机体有效吸收和利用23。这种多靶点干预策略符合中医“标本兼治”的治疗理念。

综上所述，JPSXD 是一种配伍合理且具有科学依据的中药复方，体现了气血解毒的中医理论原则。其在增强免疫功能、促进造血以及辅助抗肿瘤治疗方面的潜在应用，使其成为传统医学与现代医学实践中的重要补充。然而，目前仍缺乏高质量的临床证据直接评估 JPSXD 在缓解化疗所致骨髓抑制方面的疗效。未来仍需进一步研究以阐明其潜在作用机制，并优化其临床应用策略。因此，本研究旨在从临床前机制角度为 JPSXD 的潜在治疗作用提供概念验证。

网络药理学因其系统性和整合性特点，已被广泛用于鉴定中药的活性成分并阐明其作用机制24,25。本研究采用网络药理学方法，分析JPSXD在骨髓抑制背景下可能影响的信号通路及关键靶点。此外，建立环磷酰胺（CTX）诱导的骨髓抑制小鼠模型，以评估相关指标并考察JPSXD对骨髓抑制的作用。同时，对网络药理学所预测的关键靶点和通路进行了初步验证。本研究首次系统整合网络药理学与动物实验，阐明JPSXD通过多靶点调控PI3K-AKT等信号通路，从而缓解化疗所致骨髓抑制的分子机制，填补了该复方制剂在造血保护作用机制方面的研究空白。

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方案

所有动物实验均严格遵循《实验动物管理条例》以及湖南省肿瘤医院实验动物中心的伦理准则进行。研究方案已获得湖南省肿瘤医院动物伦理委员会批准（批准号：KNZY-202416）。在研究过程中，研究人员尽一切努力减少动物使用数量并减轻其痛苦。

动物准备
共获取60只10周龄雄性C57/BL6小鼠，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司（许可证号：SCXK [湘] 2021-0002）。所有小鼠均饲养于湖南省肿瘤医院实验动物中心，环境条件严格控制：温度：23 ± 2 °C，湿度：50% ± 10%，光照/黑暗周期为12小时（8:30–20:30）。小鼠可自由获取 随意摄取 可自由获取食物和水。实验前，小鼠通过连续3天、每天5分钟的日常抓取操作进行环境适应。适应期结束后，根据体重将全部60只小鼠进行分层，并利用计算机生成的随机数字表随机分为6组（每组n = 10）：空白对照组、模型组、生理盐水（NS）对照组、高剂量JPSXD组（40 mg/kg）、中剂量JPSXD组（30 mg/kg）和低剂量JPSXD组（20 mg/kg）。随机化过程确保各组间平均体重无显著差异（p < 0.05） > 0.05）。随机化序列由未参与后续实验操作的研究人员生成并实施，以尽量减少偏倚。

材料准备
安全与废弃物处理：本研究涉及环磷酰胺（CTX），一种高毒性的化疗药物。所有操作均严格遵循《危险化学品安全管理条例》及生物安全二级实验室标准进行。具体预防措施包括所有人员穿戴一次性防护服、丁腈手套、N95 呼吸器和防护护目镜。CTX 的配制和给药操作均在 II 级生物安全柜内进行。CTX 注射液的配制在通风橱中使用专用仪器完成，以防止气溶胶的产生。被 CTX 污染的锐器及物品（如注射器和手套）应丢弃至防穿刺的锐器盒中。其他被污染的材料（如垫料、动物组织）需浸入 10% 次氯酸钠溶液中 24 小时以灭活，随后由有资质的医疗废物处理机构进行焚烧处理。若发生 CTX 泄漏，应立即用吸水棉覆盖泄漏区域，并用 1% 硫代硫酸钠溶液中和，随后向安全主管报告该事件。

药品与试剂：CTX 注射液购自德国 Baxter Oncology GmbH 公司（批号：HJ20160467）。JPSXD 由湖南省肿瘤医院中医科制备，由15味传统中药组成—— Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Epimedium brevicornum, Atractylodes macrocephala, Dioscorea opposita, Salvia miltiorrhiza, Rehmannia glutinosa, Cuscuta chinensis, Lycium barbarum, Ligustrum lucidum, Angelica sinensis、炒麦芽、鸡内金、陈皮和薏苡仁，按经典配伍比例组合20。该汤剂浓缩至终浓度为 3 kg/L（即 3 g/mL）。灌胃前，用生理盐水（NS）将浓缩液稀释至各剂量组所需浓度：高剂量组为 4 mg/mL（40 mg/kg），中剂量组为 3 mg/mL（30 mg/kg），低剂量组为 2 mg/mL（20 mg/kg）26。灌胃体积按每10 g体重给予0.1 mL计算，每只小鼠最终给药体积为0.2–0.25 mL（基于20–25 g的体重范围）27。

ELISA试剂盒：使用市售的小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、促红细胞生成素（EPO）和血小板生成素（TPO）ELISA试剂盒。血清样本在检测前用PBS缓冲液（pH 7.4）按1:5稀释。标准品每孔加入100 µL进行复溶。

二抗：将HRP标记的山羊抗兔IgG用含5%脱脂奶粉和0.05% Tween-20的TBST缓冲液按1:5000比例稀释（终浓度为0.04 µg/mL）。该溶液需新鲜配制，并在室温下孵育1小时。

Western blot 使用的一抗：GAPDH（兔多克隆抗体）、AKT（兔多克隆抗体）、JAK2（兔单克隆抗体）和 EGFR（鼠单克隆抗体）。所有抗体均用含 5% BSA 的 TBST 缓冲液稀释：GAPDH（1:1000）、AKT（1:1000）、JAK2（1:800）和 EGFR（1:800）。每张膜的孵育体积为 100 µL。

组织固定液：通过将多聚甲醛（PFA）粉末溶解于磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）中，配制4% PFA溶液。组织固定24小时。

苏木精-伊红（H&E）染色液：根据标准病理学方案配制苏木精溶液（0.1% Harris 苏木精）和伊红 Y 溶液（0.5%）28。苏木精染色时间为 5 分钟，伊红染色时间为 3 分钟。

免疫荧光封闭缓冲液：使用含10% 小牛血清和1% BSA的PBS缓冲液进行封闭，孵育30分钟。

免疫荧光抗体稀释缓冲液：免疫荧光用一抗（CD34+、TPO、EPO、GM-CSF）按厂家推荐的稀释比例（1:200）用含1% BSA的PBS缓冲液稀释，终浓度为2.5 µg/mL。每张组织切片的孵育体积为50 µL。

动物模型的构建
将60只小鼠随机分为六组（每组n = 10）：空白对照组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和NS对照组。除空白对照组外，其余各组小鼠均于连续3天内每日1次腹腔注射CTX（20 mg/kg），以建立骨髓抑制模型。所有模型小鼠在末次注射后24小时均表现为白细胞（WBC）< 1.8 × 109/L、血小板（PLT）< 85 × 10⁹/L，以及骨髓有核细胞数减少>55%。该方案与已建立的CTX诱导骨髓抑制模型一致29,30。注射后，每日观察小鼠的一般状况，包括活动能力、毛发外观及体重变化。自造模开始至实验结束，每天在同一时间使用电子天平记录小鼠体重。体重变化率按以下公式计算：（末次体重 / 初始体重）× 100%，用于评估小鼠的一般生理状态及JPSXD可能的保护作用。注射后，小鼠饲养于独立通风笼具（IVCs）中，每个笼具均明确标记为CTX污染。垫料每2天更换一次，所有使用过的垫料均按照上述危险废物处理规程进行处置。

经口胃内给药
高剂量、中剂量和低剂量组小鼠通过灌胃分别给予40 mg/kg、30 mg/kg和20 mg/kg剂量的JPSXD。生理盐水对照组给予等体积的生理盐水（NS）。灌胃液分别配制成4 mg/mL、3 mg/mL和2 mg/mL的浓度，给药体积为每10 g体重0.1 mL。所有小鼠每日灌胃2次，连续给药7天。生理盐水对照组每只小鼠给予0.2–0.25 mL生理盐水。空白组和模型组小鼠不给予任何处理。灌胃过程中无咳嗽或挣扎现象表明给药操作正确。

血液采集与血清制备
第3天rd CTX注射后第2天，从尾静脉采集0.2 mL血液，使用全自动血细胞分析仪检测外周血细胞计数，以评估模型建立是否成功。JPSXD灌胃给药末次后24小时，随机选取各组小鼠（每组n = 10），自眶后窦采集血液。部分血液用于全血细胞计数分析，其余血液经离心处理制备血清。样品以3,000 × g 4 °C下离心15分钟。收集上清液（澄清的淡黄色上层）作为血清，分装后于-80 °C保存，用于后续ELISA检测及肝肾功能检查。血清层与血细胞层界限清晰，无溶血或浑浊现象。检测的血液学参数包括白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血小板计数（PLT）和血红蛋白（Hb）水平。

肝肾功能评估
采用全自动生化分析仪检测血清肝功能指标——丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）——以及肾功能指标——血尿素氮（BUN）和肌酐（Cre）。所有操作均按照仪器的标准操作程序进行。具体步骤为：取100 µL血清与相应的检测试剂盒（ALT、AST、BUN和Cre）混合，在37 °C孵育5分钟，于340 nm波长处测定吸光度。每个样本均设复孔检测，取平均值用于分析。

器官指数计算
在最后一次灌胃给予JPSXD后24小时，采用逐步充满二氧化碳（CO2）吸入法（流速：20%舱室体积/分钟）对小鼠实施安乐死，并以颈椎脱位作为辅助方法31。安乐死后立即通过腹部正中切口无菌取出肝脏、肾脏、脾脏和胸腺。将器官轻柔地剥离周围结缔组织和脂肪组织，然后用冰冻的生理盐水（NS）冲洗以去除残留血液。在标准压力下（轻压3次），使用预先称重的滤纸将器官吸干，并立即在室温（22 ± 1°C）下用校准的电子天平（精度：±0.1 mg）称重。

所有操作均在预冷的不锈钢托盘上进行，以尽量减少自溶。器官指数计算公式为器官重量（mg）除以体重（g），用于评估JPSXD对主要器官的影响。每种组织的一部分保留用于Western blot分析，其余样品则用4%多聚甲醛固定，用于后续组织学评估。

ELISA
根据制造商说明书，使用 ELISA 试剂盒测定血清中 TPO、EPO 和 GM-CSF 的浓度。所有离心步骤（包括样本洗涤和试剂重悬）均在室温下以 1,000 × g 离心 5 分钟进行。洗涤步骤使用 PBST 缓冲液（含 0.05% Tween-20 的 PBS），每孔加入 300 µL 洗涤液，重复洗涤 3 次。洗涤后，各孔底部无残留液体。显色反应后可见明显的蓝色沉淀。反应终止后，使用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度。

苏木精-伊红（H&E）染色
安乐死后，取胸腺和股骨。称量胸腺重量以计算胸腺指数（胸腺重量 [mg]/体重 [g]）。称重后，部分胸腺用于 Western blot 分析，其余部分连同股骨一起用 4% 多聚甲醛（PFA）固定。股骨样本经梯度乙醇脱水（70%、80%、95% 和 100%，每级 1 小时）。充分脱水的标志是组织呈均匀白色，无软化或变形。将石蜡包埋的组织块使用装有高精度碳化钨刀片（H31 型）的旋转式切片机切成 4 µm 厚的切片。切片漂浮于含 0.5% 明胶溶液的 40 °C 水浴中以消除皱褶，随后贴附于载玻片上。所有切片在光学显微镜下均显示完整形态、边缘平滑、透光均匀，表明切片质量良好。进行苏木精-伊红（H&E）染色，随后使用水溶性封片剂封片28。染色后，在倒置显微镜下观察，细胞核呈蓝色，细胞质呈粉红色，细胞结构清晰可辨。采用软件进行组织形态学分析。对每张 H&E 染色切片，在 200 倍放大下随机选取三个视野。在手动划定感兴趣区域后，软件自动计算单位面积内的有核细胞数量，结果以均值 ± 标准差（x̄ ± s）表示。

Western blot
胸腺组织（50 ± 2 mg/样本）在预冷的RIPA裂解液中进行匀浆，每1 mL裂解液含1×蛋白酶抑制剂混合物，组织与裂解液体积比精确控制为100 mg组织/1 mL裂解液，使用配备无RNase研杵的电动研磨器操作。匀浆过程在冰上进行，共15次脉冲（每次1秒脉冲，间隔2秒），随后在冰上孵育30分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次。匀浆液于4 °C、12,000 × g 离心20分钟，收集上清液用于蛋白定量。上清液呈澄清透明状，无沉淀或脂质层。采用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，标准曲线范围为0–2000 µg/mL。通过Western blot检测胸腺组织中AKT1、JAK2和EGFR的表达水平，以内参蛋白GAPDH作为对照。电泳及转膜完成后，蛋白分子量标记物（10–200 kDa）显示条带清晰，目标蛋白条带位置与预期分子量一致（AKT1：60 kDa，JAK2：130 kDa，EGFR：170 kDa，GAPDH：37 kDa）。

使用软件对 Western 印迹条带进行光密度分析。分析前，通过肉眼检查条带，确认无拖尾或扩散现象。分析步骤包括：导入图像后，手动选择目标条带区域，由软件自动进行边缘检测，随后利用条带邻近区域进行局部背景扣除，以校正灰度值。然后计算目标蛋白与内参之间的灰度值比值，用于相对定量。所使用的归一化公式为：

目的蛋白相对表达量 = （目的条带灰度值 − 局部背景）/ （内参对照灰度值 − 局部背景）

免疫组织化学
对股骨切片进行免疫组织化学染色。切片用0.1% Triton X-100处理10分钟以增加通透性，随后封闭30分钟。一抗于4 °C孵育过夜，二抗于室温孵育1小时。染色后，在光学显微镜下观察到清晰的阳性信号，背景低，无非特异性染色。切片使用含DAPI的抗荧光淬灭封片剂封片，DAPI将细胞核染成蓝色。随后评估CD34+、TPO、EPO和GM-CSF的表达情况。免疫组织化学图像采用数字病理学软件（版本2.1.0）进行分析。分析前确认图像无过曝或信号降解现象。分析步骤32包括：

模型选择：采用预训练的骨髓分割模型（基于U-Net）自动识别组织区域33。
阈值设定：根据阴性对照组确定阳性信号阈值。显色强度超过背景均值三个标准差的区域被判定为阳性。
ROI定义：软件将每个视野自动划分为500 × 500 µm的网格区域，并计算单位面积内的阳性细胞数量（阳性细胞数/视野面积）。
数据导出：系统自动生成阳性细胞密度的统计报告。

统计学分析
采用 SPSS 软件（版本 22.0）进行统计学分析。数据以 x̄ ± s 表示。组间比较前，使用 Shapiro-Wilk 检验评估数据的正态性，并采用 Levene 检验评估方差齐性。若数据符合正态分布（p > 0.05）且方差齐性（p > 0.05），则采用单因素方差分析（one-way ANOVA）进行组间比较。事后多重比较采用最小显著差异法（LSD 法）；为控制 I 类错误，所有事后检验的 P 值均采用 Bonferroni 校正，校正后 p < 0.05 被认为具有统计学显著性。

若数据不符合正态性或方差齐性假设（任一检验的 p ≤ 0.05），则采用Kruskal-Wallis检验，并在事后分析中使用Dunn检验，同时进行Bonferroni校正。所有统计图表和可视化结果均使用GraphPad Prism（版本9.0）生成。显著性水平设定为 α = 0.05。所有报告的 p 值均为经过校正的值。使用Grubbs检验（α = 0.05）识别异常值，仅当其明显归因于实验误差时予以剔除。其余所有数据均纳入最终分析。结果以 x̄ ± s 表示。

网络药理学方法
本研究采用网络药理学方法，探讨JPSXD缓解化疗所致骨髓抑制的潜在作用机制。首先，从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP，https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）中获取JPSXD的化学成分及其对应的作用靶点。筛选标准设定如下：口服生物利用度（OB）≥30%，类药性（DL）≥0.18。对于TCMSP数据库中未收录的化合物，采用SwissTargetPrediction平台（https://www.swisstargetprediction.ch/）进行靶点预测。

为确保所选化合物涵盖九味生脉散（JPSXD）的主要生物活性成分，参考了《中华人民共和国药典》34。具体而言，通过查阅各味药材的“鉴别”和“含量测定”部分，确定了人参皂苷、黄芪甲苷Ⅳ、淫羊藿苷和丹酚酸等标志性成分。这些成分通常作为质量控制的标志物35，具有明确的化学结构和定量要求。为保证准确性，进一步核对了药典的“凡例”和“附录”，以确认命名规范及分析方法（如高效液相色谱法，HPLC）。分析结果证实，筛选标准（口服生物利用度 OB ≥30%，药物相似性 DL ≥0.18）能够有效捕获该方剂的核心化合物36，包括药典规定的多种关键成分，如人参皂苷Rg1和Rb1（来自Panax ginseng）、黄芪甲苷Ⅳ（来自Astragalus membranaceus）以及淫羊藿苷（来自Epimedium brevicornum），表明所选化合物具有代表性，涵盖了九味生脉散益气养血功效的主要活性成分。

随后，从 GeneCards 数据库（https://www.genecards.org/）中检索与骨髓抑制相关的基因靶点，并将结果下载至电子表格中。选择相关性评分 ≥44 的基因进行进一步分析。使用维恩图可视化药物靶点与疾病相关基因的交集，并将重叠基因导入 STRING 数据库（https://string-db.org/）。设定物种为人类，相互作用来源限定为实验和数据库，最低所需相互作用评分 > 0.7。随后对所得的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络进行拓扑特征分析，以鉴定核心靶点，并利用 Cytoscape 3.10.2 进行可视化。

基于鉴定出的核心靶点，利用DAVID数据库（https://david.ncifcrf.gov/）进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。参数设置为：Count ≥5，EASE评分≥0.05，且p值<0.01。通过Microbiological Letter平台（http://www.bioinfo-cloud.org/）对富集结果进行可视化。通路分析进一步阐明了所涉及的关键信号通路和调控标志物，从而揭示了JPSXD缓解化疗诱导的骨髓抑制的潜在作用机制。

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结果

网络药理学分析
活性化合物与靶点的鉴定
我们首先根据文献确定了JPSXD中每种草药的主要标志化合物 t以确保全面筛选34具体而言，通过查阅相关草药的药典条目（例如， Panax ginseng, 黄芪, 当归），我们整理了该方剂中全部15种草药成分的官方标志物成分清单。其中包括：人参皂苷Rg1、Re和Rb1（来自 人参)；黄芪甲苷 IV（来自 黄芪）；淫羊藿苷（来自 淫羊藿）；丹酚酸B（来自 丹参）；梓醇（来自 地黄)；藁本内酯（来自 当归）；白术内酯（来自 白术)；薯蓣皂苷元（来自 Dioscorea opposita）；cuscatin（来自 Cuscuta chinensis）；枸杞多糖（来自 枸杞）；女贞子苷（来自 女贞子）；麦芽糖（...

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讨论

随着全球癌症发病率不断上升，医学界面临着双重挑战：不仅需要治疗癌症本身，还需管理其相关副作用，其中骨髓抑制是一种尤为常见且严重的不良反应43。本研究结合网络药理学与动物实验，系统探讨了加味四物汤（JPSXD）在缓解环磷酰胺（CTX）诱导的小鼠骨髓抑制中的作用及潜在机制。结果表明，JPSXD可能通过多靶点、多通路的调控机制改善骨髓抑制症状，凸显了中药在利用多种成分和靶点方面的独特优势。

网络药理学分析鉴定了JPSXD中的关键化合物，包括山柰酚（kaempferol）、五味子乙素（Gomisin B）、甘草异黄酮A（Licoagrocarpin）和甘草异黄酮B（Licoagroisoflavone）。既往研究表明，这些化合物具有多种药理活性，包括抗炎、抗氧化及促造血作用44,45,46，使其成为治疗骨髓抑制进一步实验验证的潜在候选物质。鉴于骨髓抑制的复杂...

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披露

作者声明不存在利益冲突。

致谢

本研究由湖南省中医药管理局资助，项目编号A2023053，项目名称为“中西医结合聚焦DCA模式干预预防老年胃肠道恶性肿瘤患者术后感染”。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
4% 多聚甲醛（PFA）Sigma-AldrichP6148
AKT（全型）兔单克隆抗体Cell Signaling Technology#4691
自动酶标洗板机BioTek (Agilent)ELx405
BC-2800vet 全自动血液细胞分析仪MindrayBC-2800vet
冷冻切片机Thermo Fisher ScientificCryoStar NX50
环磷酰胺注射液Baxter Oncology GmbHN/A（批号：HJ20160467）
E100 显微镜NikonE100
EGFR 抗体（A-10）Santa Cruz Biotechnologysc-373746
组织包埋机LeicaEG1150
小鼠 EPO 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒R&D SystemsMEP00B
GAPDH 兔多克隆抗体Proteintech10494-1-AP
小鼠 GM-CSF 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒R&D SystemsMMC00B
辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 IgGJackson ImmunoResearch111-035-003
苏木精-伊红（H&E）染色试剂盒Sigma-AldrichHT10
高速冷冻离心机Thermo Fisher ScientificSorvall ST 16R
高通量组织研磨仪ServicebioKZ-II
免疫组化笔Vector LaboratoriesH-4000
JAK2 兔单克隆抗体Abcamab108596
健脾生血汤（JPSXD）湖南省肿瘤医院药房定制配方
酶标仪BioTek (Agilent)Synergy H1
生理盐水Baxter2B1324X
轮转式切片机LeicaRM2016
组织处理机LeicaASP300S
小鼠 TPO 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒R&D SystemsMTP00B
涡旋混合器ServicebioMX-F

参考文献

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