一种结合使用的草药灌肠配方 Sanguisorba officinalis, 白及,以及 Acacia catechu 采用LC-MS/MS分析、S100β分子对接、DSS结肠炎模型及LPS/IFN-γ激活的肠胶质细胞进行评价。该配方可作用于S100β,抑制胶质细胞活化,并降低p-NF-κB/iNOS表达,表明具有改善作用 通过 S100β-RAGE-NF-κB 轴
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一种结合使用的草药灌肠配方 Sanguisorba officinalis, 白及,以及 Acacia catechu 采用LC-MS/MS分析、S100β分子对接、DSS结肠炎模型及LPS/IFN-γ激活的肠胶质细胞进行评价。该配方可作用于S100β,抑制胶质细胞活化,并降低p-NF-κB/iNOS表达,表明具有改善作用 通过 S100β-RAGE-NF-κB 轴
肠胶质细胞(EGCs)的活化参与溃疡性结肠炎(UC)的发病机制。本研究探讨了中药灌肠剂 dibai 灌肠液(DBE)——一种由多种草药组成的灌肠制剂—— 地榆, 白及,以及儿茶提取物调节EGC诱导的炎症。通过LC-MS/MS分析DBE的成分并筛选关键化合物,将其与S100β进行分子对接。在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎模型中,通过体重变化、结肠长度、组织病理学评分及细胞因子水平(ELISA)评估其疗效。胶质细胞活化标志物通过免疫组织化学、免疫荧光共定位、定量PCR(qPCR)和免疫印迹法进行检测。一项 体外 采用CRL-2690肠胶质细胞模型,以脂多糖联合干扰素-γ激活细胞,并以含DBE的大鼠血清(15%)作为干预条件。分子对接预测多种DBE成分与S100β具有较强的结合能力。DSS处理可上调TNF-α和IL-1β表达,破坏紧密连接结构,并在mRNA和蛋白水平均升高S100β/GFAP表达,符合胶质细胞过度激活的特征;DBE显著逆转了上述变化。 体外DBE降低了S100β、RAGE、iNOS(NOS2)以及磷酸化的NF-κB p65。综上所述,DBE似乎通过抑制肠胶质细胞活化并下调S100β/RAGE/NF-κB/iNOS信号轴,从而保护黏膜完整性,缓解溃疡性结肠炎。
溃疡性结肠炎(UC)是炎症性肠病(IBD)的主要亚型之一,其特征为结肠黏膜的慢性炎症,自1990年以来全球疾病负担持续上升,UC在新发IBD病例中占相当大的比例1,2。典型临床表现包括腹痛和血性腹泻,可导致显著的躯体与心理痛苦,并带来高昂的治疗费用3。尽管治疗手段已有所扩展,但长期使用抑制全身免疫的免疫调节剂和生物制剂会增加淋巴瘤和机会性感染的风险,且部分患者仍表现为难治性或不耐受4。目前普遍认为UC是一种免疫介导的疾病,黏膜免疫稳态的破坏在其发病机制中起核心作用5。然而,越来越多的证据表明,仅靠黏膜免疫机制不足以解释IBD的所有特征;肠神经系统(ENS)参与肠道炎症过程,从而将IBD的疾病概念扩展至神经性炎症6。
肠胶质细胞(EGCs)在成年哺乳动物中数量超过肠神经元,现已被认为是肠道稳态和炎症的关键调控者7,8肠胶质细胞通过释放GDNF、TGF-β1、S100β和15d-PGJ2等介质调节上皮屏障功能,从而影响通透性和黏膜完整性9在这些介质中,S100β可激活包括RAGE/NF-κB通路在内的下游级联反应,导致屏障损伤和炎症放大10,11肠胶质细胞还通过调控巨噬细胞表型和内脏敏感性来调节免疫反应 通过 连接蛋白-43 和 M-CSF,并通过抑制 T 细胞发挥抑制作用 体外,强调EGC活化是溃疡性结肠炎中一个可干预的治疗靶点12,13.
溃疡性结肠炎(UC)领域对传统中医药(TCM)的研究日益增多,在临床和实验研究中均显示出良好的应用前景14,15。地榆(Sanguisorba officinalis)与白及(Bletilla striata)的经典配伍,联合儿茶(Acacia catechu),在历代本草文献中早有用于治疗痢疾类疾病的记载,并被收录于《中国药典》,适用于止血、镇痛及促进伤口愈合。现代研究表明,这些药用植物具有抗菌、抗炎、抗氧化和抗溃疡等活性,其中儿茶(A. catechu)还表现出神经保护作用,其主要成分为儿茶素16,17。相较于传统的全身性免疫抑制治疗,靶向EGC介导的神经免疫通路的药物制剂可能通过独特的作用机制实现协同疗效,同时潜在减少与全身免疫相关的不良反应风险18,19。
本研究评估地榆、白及与儿茶联合制剂(DBE)是否通过抑制肠胶质细胞(EGC)活化来缓解溃疡性结肠炎(UC)。采用整合研究方法:通过非靶向液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析确定主要成分,针对S100β进行分子对接,利用葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎模型进行验证,并在EGC中开展机制实验。该研究强调了一种在既往UC治疗中较少被关注的神经免疫机制——S100β/RAGE/NF-κB/iNOS通路,并为剂量选择、制剂优化及后续转化研究提供了实际指导意义。
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所有动物实验均经北京中医药大学动物伦理委员会批准 [BUCM-2023-0912],并依照机构及国家关于实验动物护理与使用的指南进行。本研究未涉及人类受试者。
所用试剂与设备详见材料表。
1. 试剂与材料
实验全程使用分析纯溶剂和分子生物学级试剂。所有商业信息,包括生产厂家、目录编号和软件许可详情,均在材料表(xlsx)中提供。所有配制用水均为去离子过滤水。所有缓冲液均新鲜配制,或按照下述条件储存。
2. 仪器设备与软件设置
使用配备四极杆飞行时间质谱仪的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)系统;带水平转子的冷冻离心机;维持在 37 °C、5% CO₂ 和 ≥95% 相对湿度条件下的 CO₂ 培养箱;酶标仪(450 nm);实时荧光定量 PCR 仪;电泳及印迹装置;以及配备固定激发/发射滤光片的荧光显微镜。仪器控制和数据分析分别采用 MassLynx v4.2 软件处理色谱和质谱数据,采用 AutoDock 4.2 及 AutoDockTools 1.5.7 进行分子对接分析。图像分析使用 ImageJ/Fiji v1.53 软件完成。
3. 白地灌肠液(DBE)的制备
将地榆(50 g)、白及(50 g)和儿茶(20 g)组成的中药混合物粗碎后,加入1,200 mL去离子水,在室温下浸泡30分钟,以确保充分水合。浸泡后的混合物在持续剧烈沸腾条件下煎煮30分钟,期间不时搅拌以防止粘连。趁热将煎液通过无菌多层医用纱布过滤至无菌玻璃器皿中,以去除不溶性杂质。滤液在不超过45 °C的水浴中减压浓缩,直至获得相当于终浓度为1.98 g/mL的浓缩液(高剂量原液)。通过无菌去离子水稀释,分别配制浓度为0.99 g/mL和0.50 g/mL的中、低剂量工作液,每种溶液终体积均为100 mL。各溶液均在无菌条件下经0.22 µm滤膜过滤,分装至带标签的无菌容器中,于4 °C保存,最多可保存七天。使用前轻轻混匀;溶液外观应为澄清至微乳光,无可见颗粒物。
4. DBE的UPLC-MS/MS分析
准确称取每种药材成分的粉末50 mg,加入1.0 mL 80%(v/v)甲醇,在室温下超声振荡提取30 min。超声处理后,提取液恢复至室温,于4 °C、15,000 × g 离心10 min,上清液经0.22 µm滤膜过滤至自动进样瓶中。色谱分离在反相色谱柱(2.1 × 100 mm,1.8 µm;极性封端C18型)上进行,柱温维持在35 °C;色谱柱品牌/型号及目录号见材料表。流动相A:含0.1%甲酸的水溶液;流动相B:乙腈。流速:0.30 mL/min;进样量:10 µL。梯度洗脱程序:0–2 min,5% B;2–20 min,5→95% B;20–23 min,95% B;23.0–23.1 min,95→5% B;5% B条件下再平衡至26 min(完整梯度程序见表1)。
质谱分析采用电喷雾离子化,正/负离子模式切换,并结合低能量和高能量(MSE)扫描的数据非依赖性采集模式。质荷比范围:m/z 100–1,500;毛细管电压:2.0 kV;采样锥电压:20 V;离子源温度:120 °C;去溶剂化温度:360 °C;锥孔气体流速:50 L/h;去溶剂化气体流速:600 L/h。高能量模式采用20–50 eV的梯度碰撞能量。数据使用MassLynx v4.2软件处理,包含锁质量校正及标准峰检测参数。已鉴定的105种组分(分子式、实测m/z值、保留时间及置信度评分)的完整列表见补充表1。
5. 分子对接
采用 AutoDock 4.2 软件,在诱导契合模型下进行分子对接。S100β 的三维结构(PDB 编号:3HCM)通过去除结晶水分子、添加极性氢原子并分配 Kollman 电荷进行预处理。构建代表 DBE 特征性成分的配体结构,在生理 pH 条件下质子化,并进行能量最小化。结合位点由天然配体的坐标定义;在对接过程中,将天然配体周围 6 Å 范围内的氨基酸残基设为柔性。网格盒覆盖整个结合口袋,网格间距为 0.375 Å。拉马克遗传算法参数设置如下:种群大小为 150;最多进行 2.5 × 10⁶ 次能量评估;每种配体独立运行 100 次。根据预测的结合自由能对最终构象进行排序,并按均方根偏差(RMSD)进行聚类;可视化分析相互作用模式(氢键、疏水接触、π-π 相互作用),以确认其与已知 S100β 复合物的一致性。
6. DSS诱导性结肠炎的动物模型及DBE治疗
雄性C57BL/6J小鼠(8周龄,20–22 g)在22 ± 2 °C、相对湿度50%–60%、12小时光照-黑暗循环条件下适应至少7天,自由摄食和饮水。将动物随机分为六组(每组n = 10):对照组、葡聚糖硫酸钠(DSS)模型组、柳氮磺吡啶(SASP)阳性对照组,以及低、中、高剂量DBE治疗组。负责组织学评分和图像定量的人员对分组情况设盲。
通过在饮水中添加2.0%(w/v)葡聚糖硫酸钠(DSS)连续诱导7天,随后给予1.0% DSS持续3天,再换为普通饮水4天,之后实施安乐死以建立实验性结肠炎模型。每日一次经灌肠给予Dibai灌肠液(DBE),剂量为10 mL/kg,使用柔软导管插入直肠2.5 cm;动物保持垂直体位30分钟以尽量减少药液泄漏。低、中、高剂量组每日DBE剂量分别为12.35、27.4和49.4 g/kg/d;柳氮磺胺吡啶(SASP)以0.5 g/kg/d作为阳性对照给药。每日记录小鼠体重、粪便性状及粪便隐血情况,并据此计算疾病活动指数。实验终点时,小鼠腹腔注射50 mg/kg戊巴比妥钠麻醉;采用肝素化毛细管从眶后窦采集血液;随后通过颈椎脱位实施安乐死。结肠组织自回盲部至直肠完整切除,轻柔拉直后在轻微张力下测量长度。代表性组织段用4%多聚甲醛固定;其余组织迅速置于液氮中速冻,并于−80 °C保存。
7. 含药血清的制备
将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组和DBE组(每组n = 6)。DBE组以12.34 g/kg/天的剂量经口灌胃,每日一次,连续7天;对照组给予等体积的纯化水。末次给药后24小时,动物麻醉,从腹主动脉采集全血。室温静置30分钟使血液凝固后,于4 °C以1,500 × g离心10分钟分离血清。在无菌条件下,血清于56 °C灭活30分钟,并通过0.22 µm滤膜过滤,随后分装至无菌管中,于−80 °C保存。通过检测414 nm附近的吸光度升高判断溶血情况,溶血样本予以剔除。
8. 组织学检查(H&E)
将结肠组织在4%多聚甲醛中固定24小时后,依次经梯度乙醇脱水、二甲苯透明处理,并包埋于石蜡中。切取5 µm厚的切片,经脱蜡、水化后,用苏木精染色5分钟,流水冲洗返蓝5分钟,再用伊红复染2分钟。切片经树脂封片后,用于观察隐窝结构、杯状细胞密度、上皮连续性及炎性细胞浸润情况。代表性病理改变将用箭头或短箭头标示,并在图注中予以说明;比例尺(如200 µm)及预设的视觉判断阈值也将在图注中明确标注。
9. 免疫组织化学(IHC)
石蜡切片在柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)中于95–98 °C加热15–20分钟进行抗原修复,用3%过氧化氢孵育10分钟以淬灭内源性过氧化物酶活性,再用5%正常血清在室温下封闭1小时。一抗在4 °C湿盒中孵育过夜。洗涤后,切片采用链霉亲和素-过氧化物酶检测系统进行处理,以DAB显色2分钟(镜下监控),随后用苏木精复染,脱水并封片。每批实验均设不加一抗的阴性对照。
10. 免疫荧光(IF)分析
将石蜡包埋切片脱蜡,并在EDTA缓冲液(pH 8.0)中进行抗原修复。切片冷却后,用3%牛血清白蛋白在室温下封闭非特异性结合位点,持续1小时。随后,切片在4 °C下与抗GFAP(1:500)和S100β(1:200)的一抗孵育过夜,再于室温避光条件下与荧光标记的二抗(1:500)孵育1小时。细胞核用DAPI复染,切片以抗淬灭封片剂封片。所有样本使用相同的物镜、固定的100 ms曝光时间和1.0的探测器增益采集图像。在ImageJ/Fiji v1.53中对像素尺寸校准、背景扣除(滚动球半径50像素)并归一化至DAPI阳性区域后,定量分析平均荧光强度。每组至少分析五个生物学重复样本,每个重复选取三个无重叠的视野。
11. 细胞培养与处理
大鼠肠胶质细胞(编号 CRL-2690)在含 10% 胎牛血清和 1% 青霉素-链霉素的 DMEM 培养基中培养,培养条件为 37 °C、5% CO₂ 的湿润培养箱。细胞身份通过短串联重复序列分析确认,且培养物无支原体污染。实验在第 5 至 15 代细胞中进行。将细胞以每孔 2.0 × 10⁵ 个细胞、每孔 2.0 mL 培养基的密度接种于 6 孔板中,贴壁培养 24 小时。实验分组包括:未处理对照组、溶剂对照组、模型组、DBE 含药血清组和抑制剂组。
为建立模型,将细胞暴露于脂多糖(LPS,1 µg/mL) 加上 IFN-γ (20 ng/mL)作用24小时;相应的IFN-单位为U/mLγ 在中报道 材料表 根据批号特异性效价。对于DBE-血清处理,细胞接受15%(v/v)经热灭活(56℃ °C,30 分钟),0.22 µ含DBE的大鼠血清以m滤器过滤后,加入完全培养基中处理24小时(活力优化所用剂量范围为5%–20%,具体见CCK-8部分说明)。对于抑制剂处理,采用选择性S100β抑制剂β 抑制剂 SBI-4211(10-50 µM;45 µM用于关键检测)处理24小时。对照组使用含相同溶剂(0.1% DMSO(v/v))的培养基,其余成分保持一致。除非另有说明,所有处理均使用预热(37 °C)培养基,细胞冲洗2次× 处理前用PBS洗涤。处理后,细胞用于RNA提取、蛋白质分析和免疫荧光,具体步骤见后续部分。每个条件的生物学重复为n ≥ 5个独立培养。
12. CCK-8 细胞活力检测
将细胞以每孔5 × 10³个细胞、100 µL培养基的密度接种于96孔板中,过夜贴壁。随后更换为含5%、10%、15%或20%(v/v)DBE处理血清的培养基,继续培养24小时。每孔加入10 µL CCK-8试剂,在37 °C孵育1小时。以空白孔(培养基+试剂,无细胞)校正,于450 nm处测定吸光度。细胞活力以对照组(vehicle control)的百分比表示。每个条件至少进行n ≥ 5次生物学重复(独立培养),每次生物学重复设三次技术重复。
13. 组织细胞因子的ELISA检测
将结肠组织在含有蛋白酶抑制剂的磷酸盐缓冲液(PBS,1:9,w/v)中冰上匀浆。匀浆液在4 °C下以12,000 × g离心10分钟,取上清液,按照试剂盒说明书检测IL-1β和TNF-α含量。标准品和样品均设复孔,采用四参数逻辑(4PL)模型拟合标准曲线,要求R² ≥ 0.99;回算的标准品浓度应在标称值的85%–115%范围内方可接受。在条件允许时,于450 nm处读取吸光度,参考波长为620–650 nm。细胞因子浓度按组织重量进行标准化(pg/mg组织)。每组包含不少于5个生物学重复。
14. 定量实时聚合酶链式反应(qPCR)
使用硅胶膜离心柱试剂盒从结肠组织(或相应细胞)中提取总RNA。通过A₂₆₀/A₂₈₀比值为1.8–2.1以及琼脂糖凝胶电泳检测来确认RNA的完整性。以1 µg RNA为起始材料,在去除基因组DNA后合成第一链cDNA。qPCR采用SYBR Green预混液,在校准后的实时荧光定量PCR仪上进行,反应程序如下:95 °C预变性30 s;95 °C变性5 s、60 °C退火延伸30 s,共40个循环;熔解曲线分析:65–95 °C,每0.5 °C/5 s递增。内参基因为GAPDH。在验证引物扩增效率(通过标准曲线斜率确定为90%–110%)后,采用2⁻ΔΔCt法计算相对表达量。实验包含无逆转录酶对照(no-RT)和无模板对照(no-template)。引物序列见表2。每组至少包含5个生物学重复,每个样本进行两次技术重复。
15. 蛋白质印迹分析
使用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液提取结肠组织(或细胞)中的蛋白质,并通过BCA法进行定量。取等量蛋白(每泳道30 µg)变性后,在4-20%梯度SDS-PAGE凝胶上电泳分离,随后转移至PVDF膜(对于≤20 kDa的目标蛋白使用0.2 µm孔径,其余使用0.45 µm)。膜在室温下用5%脱脂牛奶封闭2小时,然后在4 °C与以下一抗孵育过夜:GFAP(1:1,000)、S100β(1:1,000)、iNOS(1:1,000)、NF-κB p65(1:1,000)、磷酸化NF-κB p65(Ser536,1:1,000)、Occludin(1:1,000)、Claudin-1(1:1,000)和GAPDH(1:5,000)。室温下孵育HRP标记的二抗(1:5,000)1小时。使用ECL显影试剂显色,曝光时间控制在线性动态范围(10-90秒)内。转膜效率通过封闭前的可逆膜染色进行验证。使用ImageJ/Fiji v1.53软件在扣除背景后对条带强度进行定量,并以GAPDH为内参进行归一化。预期分子量分别为:GFAP ~49 kDa,S100β ~10-12 kDa,NF-κB p65 ~65 kDa,iNOS ~130 kDa,Occludin ~65 kDa,Claudin-1 ~22 kDa,GAPDH ~36-37 kDa。每次分析均包含不少于5个生物学重复。
16. 统计分析
数据使用 GraphPad Prism 8.0 进行分析,以均值 ± 标准误(SEM)表示。对于多组比较,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)后接 Tukey 事后检验;对于成对比较,在适用情况下采用非配对双尾 Student t 检验。对于时间过程或双因素设计(例如,处理 × 剂量或处理 × 时间),采用双因素方差分析(two-way ANOVA),若适用则使用重复测量,并根据图注说明进行 Tukey 或 Dunnett 校正。在进行参数检验前,使用 Shapiro-Wilk 检验和 Levene 检验评估数据的正态性与方差齐性;当假设条件不满足时,对数据进行对数转换或采用适当的非参数检验(Kruskal-Wallis 检验后接 Dunn 事后检验;成对比较采用 Mann-Whitney U 检验)。精确的 p 值和效应量指标(ANOVA 采用 η²,t 检验采用 Cohen's d)在图注中适用时予以报告。双侧 p < 0.05 被认为具有统计学显著性。图注中使用以下符号表示显著性水平:*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001 与对照组比较;#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001 与 DSS 组比较;ns,无显著性差异。
17. 预期结果与质量控制
DSS 预期会缩短结肠长度,升高疾病活动指数,并诱导组织学损伤(隐窝结构紊乱、杯状细胞减少、上皮糜烂)。DBE 治疗应呈剂量依赖性地改善这些指标,并降低肠胶质细胞活化标志物。Western 印迹应显示上述分子量处的条带,DSS 组信号增强,而 DBE 或 SBI-4211 处理后信号减弱;曝光应保持在线性动态范围内。GFAP 和 S100β 的免疫荧光应显示 DSS 组平均荧光强度升高,DBE 治疗后强度降低。LC-MS/MS 色谱图应显示稳定的保留时间(漂移 ≤ 0.2 分钟)和参考离子质量精度在 ±5 ppm 以内,并呈现关键成分的特征碎片离子。阴性对照(如省略一抗)应无特异性信号。成像采集参数(物镜、曝光时间、增益、伽马值)必须在各组间保持一致,以确保定量比较的有效性。
18. 故障排除说明
DBE 溶液中出现浑浊或颗粒物表明过滤不充分或发生沉淀;应重复 0.22 µm 滤膜过滤,并确认 pH 值在 6.5–7.5 范围内。DSS 处理期间若出现过高死亡率或严重体重减轻,提示造模过度;应降低 DSS 浓度,核实批次分子量,并每日更换 DSS 溶液。免疫荧光定量结果不一致通常源于曝光条件波动;应固定曝光时间和增益参数,并在每批次中包含参考玻片用于校准。Western 印迹条带过弱可能由上样量不足或转膜效率低引起;应验证蛋白质定量结果,选择合适的凝胶浓度或梯度,并通过可逆膜染色确认转膜效果。ELISA 标准曲线拟合不佳(R² < 0.99 或标准品回算值超出 85–115%)时,需重新制作标准曲线并对稀释样本重新检测。若 qPCR 扩增引物效率不在 90–110% 范围内,应在分析前重新优化退火温度或引物浓度。
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DBE组分的鉴定及含药血清的制备
LC-MS/MS 鉴定出 DBE 中 105 种独特的化学成分,质量误差 < 10 ppm。鉴定结果通过分子式、同位素分布模式和碎片匹配得到确认。主要成分类别包括三萜类、黄酮类、联菲类和有机酸类。含药血清经空白扣除后检出 59 种源自 DBE 的成分。代表性总离子流图见图 1A、B,完整的注释信息(名称、分子式、实测 m/z 值、保留时间、误差及主要碎片)见补充表 1。选取五种具有生物活性的化合物——肉桂酸、大黄素、金丝桃苷、3,4-二羟基苯甲酸和杜鹃花酸——作为优先研究对象,进行分子对接和机制分析20,21。
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溃疡性结肠炎(UC)是一种病因复杂的慢性炎症性肠病。除了免疫反应失调、肠上皮屏障功能障碍和肠道微生物群失衡已被广泛认可为致病因素外,肠神经系统(ENS)的异常也日益被认为是推动UC进展的关键因素23。具体而言,ENS在结构和功能上的紊乱均可加剧黏膜炎症和疾病严重程度24。此外,临床前研究表明,在UC模型中抑制肠胶质细胞(EGC)的活化可减轻肠道炎症及类焦虑行为25。这些发现表明EGC活化是UC发病机制中的一个核心驱动因素26。
本研究聚焦于S100β,这是一种钙结合蛋白,既可作为神经精神障碍的生物标志物,又在肠胶质细胞(EGC)驱动的病理过程中发挥促炎介质的作用27。通过LC-MS/MS对DBE的化学成分进行表征,鉴定出五种具有明确神经保护和抗炎作用的生物活性成分,而其他大多数化合物则表现出抗菌和免疫调节活性。为了进一步理解DBE如何影响EGC,...
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作者无任何利益冲突需要披露。
本研究得到了国家中医药管理局高水平重点学科建设项目(ZYYSZX-2023256)的资助。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| AutoDock 4.2 | 分子对接软件 | - | The Scripps Research Institute |
| 葡聚糖硫酸钠(DSS) | 用于诱导小鼠结肠炎的化学试剂 | 9011-18-1 | Sigma-Aldrich |
| 滴百灌肠液(DBE) | 用于溃疡性结肠炎治疗的中药复方制剂 | - | 北京中医药大学 |
| DMEM(杜尔伯科改良伊格尔培养基) | 细胞培养基 | 11965-092 | Thermo Fisher |
| 胎牛血清(FBS) | 细胞培养添加剂 | 16000-044 | Thermo Fisher |
| 荧光显微镜 | 用于免疫荧光成像的仪器 | - | Olympus |
| LC-MS/MS 系统 | 用于液相色谱-质谱分析的质谱仪 | - | Waters Corporation |
| 脂多糖(LPS) | 细胞培养中炎症诱导剂 | L2630 | Sigma-Aldrich |
| PCR 扩增仪 | 用于定量 PCR 的设备 | T100 | Bio-Rad |
| 一抗(S100) | 用于检测 S100 蛋白的抗体 | ABC1234 | Abcam |
| 蛋白定量试剂盒(BCA) | 蛋白浓度测定试剂盒 | 23225 | Thermo Fisher |
| 重组干扰素-(IFN) | 用于细胞培养中 EGC 激活的细胞因子 | - | Sigma-Aldrich |
| 二抗(HRP 标记) | 用于免疫组织化学的二抗 | XYZ5678 | Thermo Fisher |
| 柳氮磺吡啶(SASP) | 溃疡性结肠炎的阳性对照药物 | - | Sigma-Aldrich |
| Western blot 设备 | 用于蛋白质分析的电泳系统 | - | Bio-Rad |
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