该 体外 生物活性 Terfezia claveryi 提取物的特性取决于生物物理提取方法和溶剂极性。采用浸渍辅助提取法（MAE）所得的水提物表现出最强的抗氧化活性，而索氏提取法（SE）所得提取物对SH-SY5Y细胞的细胞毒性更强。这些结果表明，不同提取方法在提取效果上存在显著差异 体外 生物活性 Terfezia claveryi 提取物.
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该 体外 生物活性 Terfezia claveryi 提取物的特性取决于生物物理提取方法和溶剂极性。采用浸渍辅助提取法（MAE）所得的水提物表现出最强的抗氧化活性，而索氏提取法（SE）所得提取物对SH-SY5Y细胞的细胞毒性更强。这些结果表明，不同提取方法在提取效果上存在显著差异 体外 生物活性 Terfezia claveryi 提取物.
Terfezia claveryi 是一种传统上在干旱地区食用的可食用沙漠块菌。近年来，由于其潜在的抗氧化、抗菌和治疗特性，该块菌引起了越来越多的科学关注，表明其在食品和健康相关领域具有应用前景。然而，尽管其生物活性的证据日益增多，不同提取策略对其生物活性化合物回收率及最终产物的影响仍需进一步研究。 体外 生物活性谱 Terfezia claveryi 在文献中尚未阐明。在本研究中， 体外 生物活性 Terfezia claveryi 采用不同提取方法和不同极性的溶剂获得的提取物被进行了评估。测定提取率，并利用已建立的测试系统对所得提取物进行抗氧化、抗菌、抗生物膜及细胞毒性活性评价。抗氧化能力通过2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）、2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（ABTS）和铁还原抗氧化能力（FRAP）试验进行测定，而细胞毒性效应则在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中进行研究。提取率因提取方法和溶剂极性而异，其中采用超声辅助提取法（UAE）制备的水提物提取率最高（18.40%）。结果表明，抗氧化活性因提取方法不同而存在显著差异，采用浸渍辅助提取法（MAE）获得的水提物富含酚类化合物，并表现出最强的自由基清除能力。对该提取物进行的LC-MS/MS分析鉴定出9种酚类化合物，其中奎宁酸和绿原酸为主要成分。相比之下，索氏提取法获得的提取物在SH-SY5Y细胞中诱导出更强的细胞毒性效应。不同提取方法在抗菌和抗生物膜活性方面的响应差异相对较小，表明这些活性对提取策略的依赖性较弱。总体而言，这些结果表明，物理化学提取方法和溶剂选择是决定提取物生物活性的关键因素 体外 生物活性谱 Terfezia claveryi 提取物在抗氧化和细胞毒性活性方面表现出显著效果。
利用多种蘑菇物种来促进健康以及预防和治疗疾病的历史可追溯至古代1,2,3。大型真菌通常分为两类：地表生（蘑菇）和地下生（块菌）4。被称为沙漠块菌的Terfezia claveryi（T. claveryi）是世界著名的可食用块菌物种，属于Terfezia属5。T. claveryi通常分布于干旱和半干旱地区，这些地区常见Helianthemum属植物6,7,8,9,10,11。近年来，癌症和神经退行性疾病等慢性疾病的全球负担显著增加，凸显了开发新型、安全且有效治疗药物的迫切需求。根据全球健康报告，癌症仍是全球主要死亡原因之一，而随着人口老龄化，神经退行性疾病发病率持续上升。....
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注意：制备和分析 T. claveryi 提取物的整体实验流程在图1中进行了示意图总结。研究中使用的所有材料均在材料表中进行了描述。
1. 真菌材料的鉴定与制备
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多节束丝菌（T. claveryi）的分子鉴定
采用通用引物 ITS1 和 ITS4 对 ITS 区域进行 PCR 扩增，以实现对T. claveryi的分子鉴定。将获得的序列通过 BLAST 算法与 NCBI 数据库中的参考序列进行比对分析，从而实现物种的准确鉴定（补充文件 1）。
提取效率
提取效率因提取方法和溶剂极性而异（表1）。对于微波辅助提取法（MAE），提取效率的下降顺序为：水 > 甲醇 > 乙酸乙酯 > 丙酮 > 正己烷（2.15–15.01%）。索氏提取法（SE）和超声辅助提取法（UAE）表现出相似的溶剂依赖性趋势，提取效率的下降顺序均为：水 > 甲醇 > 乙酸乙酯 > 正己烷 > 丙酮（SE：2.58–9.53%；UAE：3.01–18.40%）。最高的提取效率（18.40%）由UAE方法所得水提物实现，而最低的提取效率（2.15%.......
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本研究建立了一个针对T. claveryi的比较性和标准化的提取–生物活性研究平台，证明提取策略是决定其化学组成和生物学功能的关键因素。该实验方案的主要方法学优势在于对提取参数的严格控制，特别是固定的固液比、标准化的溶剂体积、一致的提取后处理步骤，以及在进行生物测定前统一的储备液制备。这些步骤构成了流程中的关键控制点。溶剂体积的差异、溶剂去除不完全或复溶浓度不一致，均可能显著影响抗氧化或细胞毒性比较结果的准确性。因此，保持下游处理条件的一致性，确保了所观察到的生物学差异真实反映了化学组成的定性变化，而非由浓度偏差所致。此外，在超声辅助提取（UAE）和水相热回流提取（SE）过程中对温度的调控至关重要。超声提取中的空化效应会产生局部高能微环境，虽可增强传质效率，但若控制不当，也可能导致敏感代谢物失稳。本研究中采用的间歇性冷却措施，是一种切实可行的技术优化手段，有助于维持酚类物质的稳定性。
提取率结果显示出明显的极性依赖趋势，其中水的提取率最高，正己烷的提取率最低。该模式与已知的溶剂极性指数以及既往研究报道一致，即高极性溶剂更倾向于提取亲水性化合物
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作者声明无竞争利益。支持本研究发现的所有数据均包含在主文稿和补充信息文件中。本研究期间生成和分析的数据集可向通讯作者在合理要求下获取。
作者声明本研究未获得任何资金支持。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 96孔聚苯乙烯微孔板 | Nest Scientific | 701001 | 细胞培养/检测板 |
| ABTS（2,2'-偶氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)） | Sigma-Aldrich | A3219 | 阳离子自由基清除能力测定 |
| 丙酮（分析纯） | Sigma-Aldrich | 179124 | 提取溶剂 |
| 乙腈（LC-MS 级） | Sigma-Aldrich | 34851 | 有机流动相 |
| 鲍曼不动杆菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 17978 |
| 配备1290 Infinity UPLC系统的三重四极杆液相色谱-串联质谱仪 | 安捷伦科技 | 6460 | 定量分析 |
| 分析柱（C18，4.6 × 100 毫米，3.5 μm) | 安捷伦科技（Zorbax） | 959990-902 | 反相色谱柱 |
| 抗氧化剂标准品（抗坏血酸 / Trolox） | Sigma-Aldrich | A7506 / 238813 | 阳性对照 |
| Applied Biosystems 3730xl DNA分析仪 | 应用生物系统公司 | 3730xl DNA分析仪 | DNA测序系统 |
| 应用生物系统公司™ BigDye™ Terminator v3.1 循环测序试剂盒 | 应用生物系统公司 | 4337455 | Sanger 测序试剂盒 |
| Bacillus cereus | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 14579 |
| 生物信息学分析，BioEdit 软件，所用算法：CAP 重叠群组装 | Ibis Biosciences | NA | 序列组装软件 |
| 纤维素提取套管 | Fisherbrand™ | 11724043 | 用于索氏提取 |
| 二甲基亚砜（DMSO） | 默克 | 102952 | 溶剂 |
| DNA提取试剂盒（植物）&Fungi DNA 提取试剂盒（波兰） | EurX GeneMATRIX | E3595 | DNA 提取 |
| DPPH（2,2-二苯基-1-苦肼基） | Sigma-Aldrich | D9132 | 自由基清除能力测定 |
| 杜尔贝科改良伊格尔培养基 | 摩羯座 | DMEM-HA | |
| 产气肠杆菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 13048 |
| Enterococcus faecalis | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 29212 |
| 大肠杆菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 25922 |
| 乙醇 | 默克 | 100983 | 溶剂 |
| 乙酸乙酯 | 默克 | 109623 | 提取溶剂 |
| 胎牛血清（FBS） | Capricorn Scientific | FBS-16A | |
| BigDyeTerminator v3.1 循环测序试剂盒 | ThermoFisher | 4337455 | 测序试剂盒 |
| 福林-酚试剂 | Sigma-Aldrich | 47641 | 总酚含量 |
| 甲酸 | Sigma-Aldrich | 33015 | 流动相添加剂 |
| 没食子酸 | Carlo Erba | 406335 | 标准曲线 |
| 基因 MATRIX 植物&Fungi DNA 提取试剂盒 | EurX | E3595 | DNA提取试剂盒 |
| GraphPad Prism（v9） | 数据可视化与统计分析 | N/A | 统计分析 |
| 加热套 | 电热 | EME30500 | 用于维持溶剂回流 |
| HighPrep™ PCR 纯化系统 | MAGBIO | AC-60005 | |
| 冰 | 实验室级别 | — | 超声辅助提取过程中的温度控制 |
| 肺炎克雷伯菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 13883 |
| L-谷氨酰胺 | Capricorn Scientific | 德国 | |
| 单核细胞增生李斯特菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 19115 |
| 冻干机 | Scientz | N/A | 提取物的冷冻干燥 |
| 磁珠–基于 PCR 的纯化系统 | MAGBIO | AC-60005 | PCR |
| 甲醇 | 默克 | 106009 | 提取溶剂 |
| 正己烷 | 默克 | 103701 | 提取溶剂 |
| 青霉素/链霉素 | Capricorn Scientific | 德国 | |
| 铜绿假单胞菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 27853 |
| 滤纸（No. 541） | Cytiva | 1541-125 V | 在提取物过滤过程中 |
| 旋转蒸发仪 | Buchi R100 | 11100V101 | 溶剂去除 |
| 志贺氏痢疾杆菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 13313 |
| 碳酸钠 | 默克 | 106392 | 总酚分析 |
| SPECTROstar Nano 微孔板读板仪 | BMG Labtech | 吸光度测量 | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 25923 |
| 表皮葡萄球菌 | ATCC | 美国弗吉尼亚州马纳萨斯 | ATCC 12228 |
| 统计分析软件（SPSS，v23） | 数据分析 | NA | |
| Thermo Scientific Nanodrop 2000 | 赛默飞世尔科技 | ND-2000 | |
| 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） | 默克 | 德国 | — |
| 胰蛋白胨大豆肉汤（TSB） | 默克 | 德国 | — |
| 超声波均质器 | Scientz | SCIENTZ-650L | 超声辅助提取 |
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