从小鼠卵黄囊和主动脉-性腺-中肾区分离早期造血干细胞

摘要

本视频展示了如何从胚胎中显微解剖卵黄囊和主动脉-性腺-中肾区域，并利用流式细胞术分选造血干细胞。

摘要

在小鼠胚胎中，早期造血过程同时发生在多个器官，包括卵黄囊和主动脉-性腺-中肾区。这些区域对于胚胎血液系统的建立至关重要，并最终促使干细胞迁移至胎肝，随后在骨髓中发育为成体造血干细胞。早期造血干细胞可通过胚胎显微解剖结合流式细胞术分选获得，以得到更纯的细胞群体。目前尚不清楚这些干细胞群体如何贡献于胎儿及成体干细胞库。此外，本实验室致力于研究早期干细胞在功能上如何区别于胎儿和成体造血干细胞。同时，我们对不同群体的造血干细胞进行分选，并在多种遗传模型背景下检测其功能作用。在本视频中，我们展示了常用的显微解剖操作流程，并呈现典型的流式细胞术分选结果。在成功分离这些稀有细胞群体后，可开展多种功能分析实验，包括集落形成实验和骨髓移植实验。

方案

从小鼠卵黄囊和主动脉-性腺-中肾区域分离早期造血干细胞

1. 开始之前，必须准备好实验所需的所有试剂和工具：
   
   • 剪刀
   • 4号镊子，以及5/45号外科级弯头镊子（可选）
   • 带注射器的30号针头
   • 35 mm 和100 mm培养皿
   • 含10%和20%胎牛血清的PBS
   • 最后是胶原酶
2. 开始解剖时，需从妊娠10.5天的雌性小鼠体内取出子宫角。
3. 动物按照批准的程序实施安乐死。 我们采用二氧化碳窒息法，随后进行颈椎脱位。
4. 用乙醇润湿雌鼠腹部，用剪刀切开皮肤。
5. 用镊子夹住皮肤，进一步剪开腹膜。
6. 打开腹腔后可观察到子宫角。用镊子固定子宫角，分别剪断远端和中央部位，以切除两侧子宫角。
7. 将子宫角放入含有冷PBS（含10% FBS）的培养皿中，以去除子宫组织。
8. 使用4号镊子并在显微镜下操作，小心地从每个胚胎胚体周围去除子宫内膜组织，注意避免刺破胎盘。
9. 去除后，将胚胎转移至另一新鲜培养皿中，其中含有冷PBS和10% FBS。
10. 小心去除胎盘组织，暴露包裹在卵黄囊中的胚胎：用镊子在胚胎包裹的卵黄囊与胎盘连接处将其剪下。 含有卵黄动脉和部分脐带的卵黄囊可轻轻分离并置于冰上，用于后续解离。
11. 将胚胎转移至一个小型....