Name: 可行的小鼠IL - 17分泌性T细胞的检测和隔离 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-18T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 38 s
Description: 学习使用细胞因子分泌检测技术在小鼠白细胞中检测和分离分泌IL-17的TH17细胞。该方法通过PMA和离子霉素刺激、低温标记及流式细胞术分析，实现活细胞的高效分离与精准检测，为免疫学和自身免疫疾病研究提供可靠方案。

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准备试剂
<ol>
<li>配制含有0.5% BSA和2 mM EDTA的PBS缓冲液。由于气泡可能堵塞MACS分离柱，缓冲液在使用前需进行脱气处理，并在2–8°C下保存。</li>
<li>我们使用含5%小鼠血清的RPMI 1640培养基。培养基中不应含有BSA或FCS，因为这些成分会影响细胞刺激的特异性。</li>
<li>Miltenyi-Biotec公司的小鼠IL-17分泌检测试剂盒——细胞富集与检测试剂盒。该试剂盒包含以下组分：IL-17捕获试剂（IL-17 Catch Reagent）、IL-17检测抗体（生物素标记，IL-17 Detection Antibody (Biotin)）、抗生物素-PE（Anti-Biotin-PE）以及抗PE微珠（Anti-PE MicroBeads）。</li>
</ol>
刺激脾细胞
<ol>
<li>本实验需设置阴性对照和阳性对照，例如未刺激的脾细胞以及T细胞的复染对照。所有操作均需采用无菌技术进行。</li>
<li>使用gentleMACS™解离仪制备小鼠脾细胞的单细胞悬液。细胞浓度应通过细胞计数预先确定。在室温下以200×g离心10分钟，收集细胞沉淀。</li>
<li>离心后，使用移液器吸除上清液。切勿倾倒离心管，以免丢失细胞沉淀。</li>
<li>将细胞重悬于培养基中，然后加入孔板。加入足够的培养基，使细胞浓度达到每毫升一千万个细胞，每平方厘米五百万个细胞。</li>
<li>为在重悬细胞中诱导免疫反应，向样品中加入离子霉素（1 μg/mL）和PMA（10 ng/mL），并通过轻柔吹打混匀溶液。随后对各孔进行相应标记。</li>
<li>将细胞在37 °C孵育3小时，期间不进行混匀，以启动刺激过程。刺激开始后3小时进行IL-17分析，请合理安排实验时间。</li>
<li>为终止分泌，将细胞置于冰上，使用预冷缓冲液通过轻柔吹打收集刺激后的细胞。随后将细胞从孔板转移至离心管，并再次洗涤。</li>
<li>为确保完全回收细胞，建议在显微镜下检查培养皿。若仍有细胞附着，可用预冷缓冲液冲洗培养皿以收集残留细胞。细胞悬液中的任何细胞团块均可使用预分离滤器去除。</li>
</ol>
用捕获试剂标记细胞
<ol>
<li>必须注意，该检测在 IL-17 分泌细胞比例低于 2% 时效果最佳。</li>
<li>若预计 IL-17 分泌细胞浓度高于 2%，请相应调整试剂体积。 <img src="/files/ftp_upload/old/1037_2008_12_8_6/figure8.png" alt="IL-17 分泌检测表；细胞试剂体积用于细胞因子频率分析。" width="500" height="162" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 8">
</li>
<li>该实验流程的一个潜在问题是捕获试剂的交叉污染，即在标记过程中，双特异性抗体可能结合非分泌性 T 细胞，并捕获邻近淋巴细胞分泌的 IL-17，从而导致假阳性结果。</li>
<li>为避免此问题，必须在标记前将细胞充分冷却，并使用预冷缓冲液以减缓 IL-17 的扩散，防止交叉污染。除保持细胞低温外，还必须将其维持在特定浓度。</li>
<li>开始标记程序时，使用一千万个细胞置于 15 ml 可封口试管中。若需使用更多细胞，可按比例相应增加所有试剂体积。当达到最佳细胞浓度后，加入 10 ml 预冷缓冲液洗涤细胞。</li>
<li>在 2–8 °C 的冷藏离心机中以 300×g 离心 10 分钟。</li>
<li>离心后，用移液器彻底吸除上清液。切勿倾倒上清液，以免造成细胞损失和体积不准确。重复洗涤步骤，即加入 10 ml 预冷缓冲液，离心并吸除上清液。</li>
<li>当获得所需纯度的细胞沉淀后，将细胞重悬于 80 μL 预冷培养基中。为进行标记，加入 20 μL 小鼠 IL-17 捕获试剂。</li>
<li>将细胞置于冰上孵育 5 分钟。</li>
<li>冰上孵育 5 分钟后，取出试管，将细胞稀释于 10 ml 37°C 预温培养基中。然后将试管固定在 MACSmix 旋转混合仪上，在 37°C 下持续旋转孵育 45 分钟。将温度升至 37°C 可重新启动细胞因子的分泌。</li>
</ol>
使用IL-17检测抗体（生物素标记）和抗生物素-PE对细胞进行标记
<ol>
<li>在37°C孵育45分钟后，立即将离心管置于冰上，以终止细胞因子的分泌。此后所有操作均需保持细胞处于冰上。使用预冷缓冲液可避免捕获试剂发生交叉污染。</li>
<li>用预冷缓冲液充满离心管，在2–8°C条件下以300×g离心10分钟。彻底吸除上清液，并重复洗涤一次。</li>
<li>将细胞沉淀重悬于80 μL预冷缓冲液中，并将离心管置于冰上。</li>
<li>为避免抗体的非特异性结合，建议加入10 μL FcR阻断试剂，在冰上孵育5分钟。随后加入20 μL与生物素偶联的小鼠IL-17检测抗体（生物素标记），在冰上孵育10分钟。</li>
<li>再次按照前述方法洗涤细胞：加入10 mL预冷缓冲液，在2–8°C条件下以300×g离心10分钟。</li>
<li>吸除上清液后，将细胞沉淀重悬于80 μL预冷缓冲液中。</li>
<li>加入20 μL二抗Anti-Biotin-PE。</li>
<li>混匀细胞与二抗溶液，再次在冰上孵育10分钟。</li>
<li>第二次孵育完成后，用10 mL预冷缓冲液洗涤细胞并进行离心。</li>
<li>最后将细胞沉淀重悬于500 μL预冷缓冲液中。</li>
<li>若需对细胞进行分离以用于后续分析，可使用Anti-PE-MicroBeads进行磁性标记，并通过MACS柱和MACS分离器手动或自动分离细胞。</li>
<li>至此，脾细胞标记过程已完成，可进行后续分析。</li>
</ol>
FACS 分析
<ol>
<li>在本项分析中，我们将通过流式细胞术比较经刺激与未刺激的脾细胞。</li>
<li>在进行流式细胞术分析之前，细胞使用0.5 μg/mL的碘化丙啶染色，以排除死细胞。将各样本的200,000个细胞上样至MACSQuant™分析仪，随后观察各样本中抗体相对反应性的散点图。在利用流式细胞术分析稀有细胞（如IL-17阳性细胞）时，有两个关键注意事项：
<ul>
<li>在前向散射光与侧向散射光图中对淋巴细胞设门</li>
<li>排除死细胞（经碘化丙啶染色）和B细胞（可能引起非特异性背景染色），以进一步提高检测灵敏度</li>
</ul>
</li>
<li>我们使用CD4-APC抗体检测T细胞，使用CD45R/B220-PerCP抗体检测B细胞。通过观察样本的前向散射光和侧向散射光特性，对淋巴细胞群体设门。</li>
<li>进一步设置第二个门，以识别被染色的死细胞和被染色的B细胞（Y轴），这些细胞在T细胞分析中被排除。</li>
<li>在此示例中（本质上为我们的阴性对照），可见未刺激样本中分泌IL-17的CD4阳性T细胞极少，约为0.003%（图4）。而在刺激后的T细胞群体中，可观察到大量分泌IL-17的CD4阳性T细胞：磁珠分选（MACS Technology）前约为0.367%（图5A），分选后达到60.76%（图5B）。</li>
</ol>

所有实验方案和数据表均可在 www.miltenyibiotec.com 获取。
警告 
试剂中含有叠氮化钠。在酸性条件下，叠氮化钠会生成剧毒的叠氮酸。叠氮化物在丢弃前应以流动水稀释。建议采取这些预防措施，以避免管道中形成沉积物，从而产生爆炸性条件。

TH17细胞在适应性免疫和炎症反应中发挥重要作用，是介导自身免疫性炎症的关键组分。
本视频记录了如何使用 Miltenyi 的小鼠 IL-17 分泌检测试剂盒——细胞富集与检测（PE）。进行此操作时，重要的是要对起始细胞样本中分泌 IL-17 的细胞频率有一个预估。在标记和细胞因子分泌阶段保持适当的细胞浓度，可防止悬浮液中其他细胞的交叉污染，并确保结果的可靠性。

<table><tbody><tr><td>小鼠 IL-17 分泌检测试剂盒（细胞富集与检测，PE 标记）</td><td>试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-213</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_98_1005_Mouse_IL_17_Secretion_Assay_Cell_Enrichment_and_Detection_Kit.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_98_1005_Mouse_IL_17_Secretion_Assay_Cell_Enrichment_and_Detection_Kit.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>培养基</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-440</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_243_293_RPMI_1640.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_243_293_RPMI_1640.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD4-APC</td><td>试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-611</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_327_CD4.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_327_CD4.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD8a-FITC</td><td>试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-605</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_328_CD8a.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_328_CD8a.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>碘化丙啶溶液</td><td>试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>小鼠 FcR 封闭试剂</td><td>试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-575</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_601_435_FcR_Blocking_Reagent_mouse_.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_601_435_FcR_Blocking_Reagent_mouse_.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>死细胞去除试剂盒</td><td>试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix 试管旋转混合仪</td><td>仪器</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; 组织解离仪</td><td>仪器</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS Pro 起始试剂盒</td><td>仪器</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-545</td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_651_679_autoMACS_Pro_Starting_Kit.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_651_679_autoMACS_Pro_Starting_Kit.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS 分选柱</td><td>工具</td><td>Miltenyi Biotec</td><td></td><td>&lt;a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/NN_115_Columns_at_a_glance.aspx"&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/NN_115_Columns_at_a_glance.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS 分离器</td><td>工具</td><td>Miltenyi Biotec</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

检测与分离可存活的小鼠il-17分泌型t细胞

Detection and Isolation of Viable Mouse IL-17-Secreting T Cells

MACS 细胞因子分泌检测试剂技术可实现单细胞水平分泌型细胞因子的检测，并能够灵敏地分离出有活性的细胞因子分泌细胞。为标记分泌 IL-17 的细胞，首先制备小鼠脾细胞的单细胞悬液，并在 37°C 下用 PMA/离子霉素刺激，以诱导细胞因子分泌。随后将细胞置于冰上以终止分泌，并加入 IL-17 捕获试剂——一种双特异性抗体，可结合白细胞表面的 CD45 以及分泌后靠近细胞表面被捕捉的 IL-17。接着将温度升至 37°C 以重新启动分泌过程，使 IL-17 被捕获试剂截留。之后再次将细胞置于冰上以终止分泌。为检测被截留的 IL-17，细胞与生物素标记的第二抗体（特异性针对 IL-17）以及抗生物素-PE 抗体共同孵育。此时细胞可直接用于流式细胞术分析，或进一步使用与 PE 结合的 MicroBeads 进行标记，以实现分离与富集。

关键词：MACS 细胞因子分泌检测, IL-17, 单细胞分析, 分泌细胞分离, 流式细胞术, MicroBeads, PMA/离子霉素, CD45, 捕获试剂, 生物素, PE 标记抗体, 小鼠脾细胞

本实验方案描述了经刺激后可主动分泌IL-17的小鼠TH17淋巴细胞的检测与分离方法。

检测与分离可存活的小鼠IL-17分泌型T细胞

MACS 细胞因子分泌检测试剂技术可实现单细胞水平分泌型细胞因子的检测，并对活细胞进行灵敏分离……

max 细胞因子分泌检测技术可实现单细胞水平上分泌型细胞因子的检测，并能够灵敏地分离出具有活性的细胞因子分泌细胞，从而用于标记分泌 IL-17 的细胞。制备小鼠白细胞的单细胞悬液，并在 37 °C 条件下用 PMA 和离子霉素刺激，以诱导细胞因子分泌并阻止其释放。随后将细胞置于冰上，使其暴露于 IL-17 捕获试剂中。当温度升高至37摄氏度重新启动分泌后，IL-17会被捕获试剂捕获。一种双特异性抗体可结合白细胞表面的CD45，并同时结合分泌后在细胞表面附近被捕获的IL-17；随后通过将细胞置于冰上再次停止分泌过程。接着，细胞与第二种特异性识别IL-17的生物素标记抗体以及抗生物素PE抗体共同孵育。此时，细胞可直接通过流式细胞术进行分析，或通过后续使用抗PE偶联微珠标记，为分离与富集做准备。大家好，我叫Ellie Rankin，是Mill Tenney Biotech公司的科研人员之一。今天我将向您展示一种分离和检测TH17白细胞的方法。TH17细胞在受到刺激后会分泌IL-17，IL-17在适应性免疫和炎症反应中发挥重要作用，同时也参与驱动自身免疫性炎症。接下来，我将为您演示该检测实验的具体操作步骤。在今天的实验方案中，我们首先需要配制含有BSA和2 mmol/L EDTA的PBS缓冲液。由于气泡可能堵塞磁珠分离柱，缓冲液需预先脱气，并在使用前保存于2至8°C环境中。其次，我们使用含有5%小鼠血清的RPMI 1640培养基。培养基中不应含有BSA或FCS，因为这些成分会改变细胞刺激的特异性。最后，您将需要Miltenyi Biotec公司的鼠IL-17分泌细胞富集与检测试剂盒。该试剂盒包含以下组分：IL-17捕获试剂、IL-17检测抗体、生物素、抗生物素PE以及抗PE磁珠。通常情况下，您在进行该实验时应设置阴性对照和阳性对照，例如未刺激的脾细胞以及用于T细胞的复染试剂。在本演示中，我们将仅关注经刺激的细胞。本实验方案将采用无菌技术进行操作。我们的实验流程起始于使用 Gentle Max 解离试剂分离得到的小鼠SP细胞的单细胞悬液。细胞浓度应通过细胞计数预先确定。在室温下以200 G离心10分钟使细胞成团。离心后，使用移液器吸除上清液，切勿倾倒离心管以免损失细胞沉淀。现在应将细胞重悬于培养基中，然后加入足够的培养基，使细胞浓度达到每毫升1000万个细胞，每平方厘米500万个细胞。为了在重悬的细胞中诱导免疫反应，我们向样本中加入离子霉素（ionomycin）和佛波酯（PMA），并通过轻柔地吹打混匀溶液。随后对各孔进行相应标记。接下来，我们将样本在37摄氏度下孵育3小时，期间不进行混匀，以启动刺激阶段。从刺激开始后三小时进行IL-17分析。因此请合理规划时间。此处显示的是经刺激的小鼠脾细胞。请注意刺激后细胞的独特形态及细胞聚集情况。为了清晰起见，我们仅追踪已刺激的细胞。从此时开始，为终止分泌，通过轻柔吹打将刺激后的细胞收集起来。用预冷的缓冲液将细胞从孔中转移至离心管，并进行第二次洗涤。为确保收集到全部细胞，建议在显微镜下检查培养皿。若仍有细胞附着，可通过冲洗培养皿来收集残留细胞。使用冷缓冲液时，可通过预分离滤器去除细胞悬液中的任何细胞团块。该实验步骤的一个潜在问题是捕获试剂的交叉污染，这种情况可能在标记过程中发生。当双特异性抗体结合到非分泌型T细胞上，并捕获邻近淋巴细胞所分泌的IL-17时，会导致假阳性结果。为避免这一问题，关键是在标记前将细胞充分冷却，并全程使用冷缓冲液，以限制IL-17的分泌并减缓其扩散，从而防止交叉污染。必须注意的是，如果IL-17分泌细胞的比例超过2%，也可能发生交叉污染。若预计IL-17分泌细胞的浓度超过2%，则需相应调整体积。因此，除了保持细胞低温外，还必须将其维持在特定的浓度。开始标记程序时，使用1000万个细胞置于15毫升可封闭的离心管中。若需使用更高的细胞数量，只需相应地按比例增加所有体积。一旦获得最佳细胞浓度，通过加入10毫升冷缓冲液洗涤细胞。现在将细胞在预冷的离心机中以300 ×g离心10分钟，离心结束后，用移液器完全吸除上清液。切勿倾倒上清液，以免造成细胞损失和体积不准确。重复洗涤步骤，即加入10 mL冷缓冲液，进行离心和吸除上清液。现在我们已获得所需纯度的细胞沉淀，用适量微升的冷培养基重悬细胞以进行标记。接下来加入20微升小鼠IL-17捕获试剂。将细胞置于冰上孵育5分钟。冰上孵育5分钟后，取出离心管，将细胞加入10毫升37摄氏度的预温培养基中进行稀释。然后将离心管固定在最大混合旋转仪上，在37摄氏度条件下孵育45分钟。在持续运动下，将温度升至 37 摄氏度可恢复细胞因子的分泌。在 37 摄氏度下持续分泌 45 分钟后，立即将离心管置于冰上，以终止细胞因子的分泌。从这一步开始，必须始终将细胞置于冰上。使用预冷的缓冲液可避免捕获试剂的交叉污染。用预冷的缓冲液充满离心管，在2至8摄氏度下以300 ×g离心10分钟。完全吸除上清液。再重复洗涤步骤一次。将细胞沉淀重悬于 80 µL 冷缓冲液中，并将试管置于冰上。为避免抗体的非特异性结合，建议加入10 µL FCR封闭试剂，在冰上孵育5分钟。随后加入20 µL与生物素偶联的小鼠IL-17检测抗体，在冰上孵育10分钟。再次按照之前的方法洗涤细胞：加入10 mL冷缓冲液，在2至8°C下以300 ×g离心10分钟。现在用80 µL预冷缓冲液重悬细胞沉淀，并加入20 µL二抗（抗生物素PE）。混匀细胞与二抗溶液后，再次将离心管置于冰上孵育10分钟。第二次孵育完成后，用10毫升冷缓冲液洗涤细胞并离心。将沉淀重悬于500微升冷缓冲液中。如果需要对细胞进行分离以进行后续分析，可使用抗PE微珠进行磁性标记，并通过MACS柱和MACS分离器手动或自动分离。我们现已完成对 SPLU 细胞的标记，已准备好进行分析。在上机前，我们将通过流式细胞术比较经刺激与未刺激的 SP 细胞。活率检测细胞用 0.5 微克/毫升的碘化丙啶染色，以排除死细胞。每份样本加入 200,000 个细胞上机进行流式细胞仪检测，接下来我们将观察各样本中抗体相对反应性的散点图。通过流式细胞术分析 IL-17 阳性细胞等稀有细胞时，有两个重要的分析要点：一是在前向散射光与侧向散射光散点图中对淋巴细胞设门，二是排除被碘化丙啶染色的死细胞以及可能引起非特异性背景染色的 B 细胞。为进一步提高检测的灵敏度。此处我们使用 CD4 A PC 抗体检测 CD45 RB 220 抗体标记的 T 细胞。为了检测 B 细胞，我们观察样品的前向散射和侧向散射特性，并在淋巴细胞群体上设置一个门控。在 Y 轴上设置第二个门控，以区分染色的死细胞和染色的 B 细胞。这些细胞在T细胞分析中被排除。在此示例中（本质上为我们的阴性对照），我们可以看到未刺激样本中分泌IL-17的CD4阳性T细胞极少，约占0.003%。观察刺激后的T细胞群体，可见大量分泌IL-17的CD4阳性T细胞，磁珠分选前约为0.367%，使用Max技术进行磁性分选后则达到60.76%。我们刚刚通过视频记录向您展示了如何使用Miltenyi Biotec的小鼠IL-17分泌检测试剂盒（含PE标记）进行细胞富集与检测。该实验步骤中最关键的部分是了解起始细胞群体中分泌 IL-17 的细胞频率。合适的细胞浓度可确保标记过程和细胞因子分泌阶段的交叉污染更少，从而保证结果的可靠性。就是这样。感谢观看，祝您的实验顺利。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

可行的小鼠IL - 17分泌性T细胞的检测和隔离

本视频展示了一种分离不变的自然杀伤T细胞（即iNKT细胞）的方法。该实验首先向小鼠体内注射一种合成糖脂，以刺激脾脏中iNKT细胞的活化与增殖。随后，制备脾脏的单细胞悬液，并与带有荧光标记、可被iNKT细胞识别的复合物共同孵育，再通过磁珠分选法分离出iNKT细胞。...

从小鼠模型中分离不变的自然杀伤T细胞

Th17细胞的效应功能与其他T细胞亚群不同，其在炎症性自身免疫疾病中具有核心作用。本体外Th17细胞分化方案提供了一种方法，用于确定初始CD4+...

初始CD4 T淋巴细胞的分离与Th17分化

检测真正表达IgE的小鼠B系细胞

初始CD4+ T细胞在激活时会根据所处环境极化为不同的亚群。体外诱导初始CD4+...

小鼠初始型CD4+ T细胞分离与 体外 T细胞亚群的分化

本文介绍了一种分析从未经处理及慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）感染小鼠中分离的调节性T（Treg）细胞表型的实验方案。此外，我们还提供了一种评估Treg细胞抑制活性的方法。...

从慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）感染小鼠中分离的活化调节性T细胞的表型与功能分析

本文介绍了一种转基因报告小鼠模型，用于可视化小鼠不同组织中产生IL-22的细胞。该方法可用于追踪小鼠体内其他细胞因子或分泌蛋白的定位。...

利用报告基因小鼠可视化表达 IL-22 的淋巴细胞

本文描述了在流感病毒感染小鼠模型中评估Tfh和生发中心B细胞反应的实验方案。...

小鼠甲型流感病毒感染期间滤泡辅助性T细胞与生发中心反应的评估

2型固有淋巴细胞（ILC2s）参与2型炎症反应，主要在应对蠕虫感染、过敏性疾病、代谢稳态以及组织修复中发挥作用。本研究展示了一种从小鼠鼻黏膜中分离ILC2s并检测其CD226表达水平的方法。...

从小鼠鼻黏膜中分离2型固有淋巴细胞以检测CD226的表达

本方案描述了初始CD4+ 将T细胞转化为致病性Th17细胞 体外特别是当与基于多参数流式细胞术的方法相结合时，可从初始CD4细胞中获得纯度达90%的致病性Th17细胞+...

小鼠初始CD4+ T细胞体外分化为致病性Th17细胞

本研究展示了评估病毒特异性TFH细胞早期命运决定的方案，以及对这些细胞中基因表达进行操控的方法。...

获取急性 LCMV 感染小鼠中病毒特异性滤泡辅助性 CD4+ T 细胞早期分化的研究方法

我们提供了一种详细的实验方案，通过磁珠法富集T细胞结合肽：主要组织相容性复合体（MHC）四聚体技术，从小鼠肺组织中分离并鉴定稀有的抗原特异性T细胞群体。...

利用肽：主要组织相容性复合体四聚体鉴定小鼠肺中稀有抗原特异性T细胞

学习使用细胞因子分泌检测技术在小鼠白细胞中检测和分离分泌IL-17的TH17细胞。该方法通过PMA和离子霉素刺激、低温标记及流式细胞术分析，实现活细胞的高效分离与精准检测，为免疫学和自身免疫疾病研究提供可靠方案。

检测与分离可存活的小鼠IL-17分泌型T细胞

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