使用光学显微镜和共聚焦显微镜成像生物样品

1. 共聚焦成像

1. 将样品放置于载物台上，并使其位于镜头正下方居中。样品重量不得超过载物台的承重限制，本例中为5 kg。样品厚度不应超过100 mm。
2. 打开成像软件并选择 "创建职位"
3. 在……之下 表面形貌柱，选择助手按钮。
4. 在最低放大倍数（2.5X）下创建概览图像。切换放大倍数前，需通过调节Z轴位置使样本聚焦，直至观察到清晰图像。可通过下压或上提三维显微镜操纵杆完成该操作。通过按压侧面按钮可实现更精细的Z轴移动，此时边缘会出现蓝光。
5. 缓慢增加物镜放大倍数，同时持续调节光照强度和焦距，直至达到所需的放大倍数。如需观察其他感兴趣区域，可通过操纵器移动载物台的 x 和 y 方向进行选择。
6. 在低倍率下获取概览图像后，点击下一步按钮进入参考点步骤。可根据需要指定一个特定的参考点用于测量（例如样品的角落），但通常默认参考点即可满足要求。
7. 点击下一个箭头以进入向导的下一部分。
8. 根据样本需求更换物镜，以获得适合的分辨率。本实验中使用50倍物镜观察样本中的细胞。50倍物镜是距离样本最近的镜头，因此需从20倍物镜逐步切换至50倍物镜，并确保在20倍物镜之后仍有空间进一步减小工作距离。
9. 在 "测量范围定义" 页面，轻微调整Z轴位置（通过点击操纵杆侧边按钮进行微调），使样品最顶端刚好处于焦点，然后点击 "设置最后"然后将载物台沿Z轴方向（向下）移动，直至样品最底部处于焦点位置，然后按下 "设置初始值"确保计算得到的切片数量不超过1000，否则程序将失败。
10. 确保在任何层面上光线强度均未过饱和（即未导致图像中出现红色像素），然后点击完成。系统将加载断层扫描图像并打开断层扫描软件。
11. 在断层扫描软件中，打开诸如 研究 按 Tab 键可在三维视图中查看数据，并在二维或三维空间中进行测量。

2. 数字光学显微镜成像

1. 将样品放置到载物台上，使样品位于镜头正下方。样品重量不得超过载物台的承重限制，本设备的承重上限为 4 kg。样品高度不得超过 12 cm。
2. 打开成像软件。
3. 从提供的模板列表中选择一个任务。也可点击自由检测，在不创建任务的情况下对样品进行观察。
4. 获取显示整个载物台的概览图像，该图像将作为后续定位当前观察区域的地图。在获取图像过程中，可使用控制器调节焦距和图像位置。
5. 设置坐标系。默认坐标系以载物台的后左角为原点，适用于本应用。若样品放置倾斜，可在此调整坐标方向。
6. 为样品和任务命名，以便将其添加至任务列表，供其他用户后续调用。
7. 点击采集下方的相机按钮，先获取一幅初始图像，随后在浏览样品时点击实时成像按钮。
8. 向下调节焦距，直至样品清晰对焦。必要时可在照明与光圈"选项卡下调整照明参数。
9. 使用图像优化面板中的工具优化图像。可在图像增强选项卡下调节不同参数，例如镜头倾斜角度、样品照明强度、亮度和对比度，直至图像达到理想的清晰度。
10. 点击软件中的铅笔工具进行测量。该工具提供多种测量功能，包括距离、角度和面积。使用距离和面积工具测量样品的尺寸。
11. 进入结果工作流选项卡，查看工作流布局，以配置报告的显示格式。
12. 点击保存按钮，保存当前任务，以便他人复用相同的工作流程。