果蝇幼虫神经肌肉接头解剖

该操作首先将三龄幼虫放置在解剖板上。用大头针固定幼虫的前、后两端。使用剪刀剪开幼虫体壁，并用镊子移除内部器官。

最后，在幼虫体壁的四个角各放置一根针，以在固定过程中保持其绷紧状态。大家好，我是来自哥伦比亚大学内外科医学院生理学与分子生物物理学系 Brian McCabe 实验室的 Jonathan Brent。今天我们将向您展示果蝇幼虫及第三龄幼虫（MJ）的解剖步骤。

我们在实验室中采用此方法研究果蝇幼虫神经肌肉接头的突触发育。现在让我们开始。在果蝇幼虫中，每个半体节含有30块肌肉，其在体壁外围的排列方式已知。

共有35个运动神经元以高度保守的模式支配这些肌肉。为了观察神经肌肉接头（NMJ），必须使用正确的解剖方法仔细解剖每条幼虫。该神经肌肉接头可用于免疫组织化学成像或电生理学研究。

将一滴预先配制并置于冰上冷却的 HL 3.1 缓冲液滴加到解剖板上，开始实验操作。使用大型不锈钢镊子从培养瓶壁小心夹取一只游走期三龄幼虫。

若观察到活动，则表明幼虫尚未进入化蛹阶段。将幼虫背侧朝上放置于解剖板缓冲液滴中。冰冷的缓冲液可使幼虫麻醉，并用镊子固定使其保持静止。将一枚穆尼欣针插入后端球状结构之间，再将第二枚针置于深色口钩附近，使幼虫被拉伸展开，便于后续剖开。

使用弹簧剪在幼虫后端做一小段水平切口。将剪刀的一侧刀片插入体壁，并沿幼虫纵轴向前端做纵向剪切。随后，在幼虫前端，于固定针的左侧和右侧分别做水平切口。

为了移除肠道等器官，向动物体内加入数滴 HL 3.1 缓冲液，肠道及其他器官会漂浮到溶液中，可用镊子将其从身体上分离。同时，将气管系统随其他器官一并移除。现在通过将切口产生的组织瓣固定向后，暴露内部的体壁肌肉。

固定瓣膜时，务必将体壁在水平和垂直方向上充分展开。清除所有残留的器官组织，并清洗一次。

加入新鲜的 HL 3.1 缓冲液后，即可用新配制的、稀释至 3.5% 的甲醛进行固定，用一倍体积的 XPBS 完全浸没幼虫和固定液，静置 25 分钟。固定结束后，用 HL 3.1 缓冲液清洗幼虫两次，每次三分钟。小心移除固定针，如有需要，将幼虫转移至含有 XPBS 的 1.5 毫升离心管中。

幼虫可在 4 摄氏度下保存最多两天。为获得最佳结果，应立即使用解剖后的幼虫。正确解剖的果蝇幼虫包含几个关键结构。

首先，务必小心不要损伤肌肉，尤其是第六、第七和第四对肌肉。其次，必须将动物充分伸展。否则，神经肌肉接头可能无法触及或难以辨认。

在此可以看到一只解剖得当的幼虫。神经肌肉接头清晰可见，系统现已准备就绪，可进行实验。我们刚刚向您展示了如何解剖食道幼虫以研究其神经肌肉接头。

进行此操作时，重要的是要保持肌肉的完整性。如果肌肉受损，将无法研究神经肌肉接头。就是这样。

感谢观看，祝您的实验顺利。