涂层生长因子-珠放在背的前脑植
January 30th, 2007
该视频演示两种方法准备，并把珠，与生长因子，对发展中国家的大脑皮层的外植体，已被涂。这些珠子可用于诱导前脑植等神经组织的发展空间限制的基因表达。方法是使用阿菲 - 凝胶珠和肝素acryllic珠。
所以这些是我将使用的第一种珠子。它们是凝胶蓝色凝胶珠。他们很柔软。
因此，我需要在口腔移液器的末端使用混合玻璃移液器将这些珠子放在 Xs 上。它们是一种坚硬的珠子，我将使用 A 钨针将这些珠子放在 X 外植体上。这些是我首先使用本生灯熔化的玻璃毛细管。
然后，我将拉动它们以创建更精细的提示。所以我把毛细管放在火焰的中间，当管子融化时滚动它。我能感觉到它变得柔软。
我会把它从火焰中抬出来，然后拉出来。我将用这支金刚石笔在毛细管上蚀刻一条线，这样我就可以有一个漂亮的直线切割。然后我会用火焰抛光两端来清理它。
我将毛细管穿过火焰以抛光末端并缩小开口，以便它可以捕获珠子，而不是通过毛细管的珠子。需要注意的重要一点是，您不想将毛细管在火焰中放置很长时间。这实际上是一个非常快速的传球，否则它会密封。
我通常会制作几个这样的产品，因为它们中的许多产品都会出现在尖端被火焰密封的地方。这很难控制，所以你只能做几个。这是一个尖端被密封的示例。
这是一个好移液器的例子。我已经将 250 微升 agel 珠子移液到这个 einor 管中，我将用 1 毫升 PBS 清洗它们五次，以去除它们浸泡的 azi 溶液。我将等待大约 3 分钟，让珠子沉淀，然后吸出多余的 PBS，然后再重复四次。
珠子还没有完全沉淀，所以珠子已经沉淀下来，我将吸出多余的 PBS 并重复四次。最后，我将加入 300 μL 的 PBS 并开始处理珠子。这是一个标准的口腔移液器，我只是拿起我拉动的毛细管，然后将其向上推入大约三分之一处。
首先，用 PBS 填充移液器。它通常仅通过毛细管作用填充。这是 30 毫米培养皿的盖子，我用蓝色放了一滴珠子。
旁边是一小滴 PBS。在这个培养皿中，这里有一个 5 微升的蛋白质溶液液滴。在这种情况下，它是 B 和 P 4，但您可以使用口腔移液器使用选择的蛋白质。
我要从这里的这个蓝色圆圈中转移一个珠子，在 PBS 液滴中冲洗一次。然后，我将用口腔移液管取出珠子，将其放入蛋白质溶液液滴中，并在室温下孵育约一小时或 4 度孵育数小时。所以你在 PBS 中看到一池微珠，我需要选择大小合适的微珠。
如果它们太小，它们只会通过口腔移液器。他们只需要坐在最后。所以现在你看到我在那里选择了几个珠子，三个较大的珠子和三个较小的珠子。
我将在实验中使用较大的珠子。现在，我将把一个大珠子从 PBS 液滴转移到蛋白质液滴中。为此，我将轻轻地将舌头从口腔移液管中拉开。
这不是吸吮动作，而只是施加一些负压。然后我要把它转移过来，然后基本上把我的舌头放回嘴巴上。管头，不是吹气，而只是增加一些正压以将节拍推离末端。
现在，我在蛋白溶液液滴中有 5 个微珠，我将它们在 4 度下孵育数小时，或者在室温下孵育半小时到一个小时。所以这是培养皿，它包含漂浮在培养基中的膜以及我已经解剖过的茄子。我要拿起移液管的尖端，吸进一些培养基。
在将珠子放到 X 解释器上之前，我将用一滴介质冲洗珠子一次。这些是我将用来拾取和放置亚克力珠的钨针。这是钨针，现在就在它的支架里。
这些是一些精细的镊子。在 45 度角。我将使用镊子中的钨针从这个 PBS 池中提起一个珠子，并将珠子转移到一滴蛋白质溶液中。
就像我对 agel 珠子所做的那样。与 agel 珠子一样，我在 PBS 中将这些丙烯酸珠子冲洗了五次，并将液滴转移到这个板上。然后，我将使用镊子中的钨针将磁珠转移到蛋白质液滴上，并像使用凝胶磁珠一样进行孵育。
所以这是一个提升珠子。我的右手紧紧地靠在桌子上，当我进入液体中时，我用左手食指稳定针头，我用针轻轻触摸一个珠子，然后慢慢地将其从液体中取出。有时它会掉针，所以就回去换一个吧。
现在，我的左手有 45 度角的镊子。尖端向下，我将珠子和针头接触液体并使用。使用镊子的尖端轻轻将其压下。
所以现在我在蛋白质中有 Five beads。好的，我用右手将钨针插入珠子中，左手再次将镊子的尖端向下，与我将它们推开的方式相同。这四个，我将在 x 解释中再做一次。在 37 度下孵育，时间取决于特定的测定。
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概览
本视频演示了两种在发育中的大脑皮层外植体上准备和放置涂有生长因子的珠子的方法。这些珠子可以在发育中的神经组织（如前脑外植体）上诱导空间受限的基因表达。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 发育生物学
- 基因表达
背景
- 珠子可以用于操纵神经组织中的基因表达。
- 不同类型的珠子具有不同的物理性质，影响它们的应用。
- 了解这些方法对发育神经科学研究至关重要。
- 生长因子在神经发育中起着重要作用。
研究目的
- 展示涂有生长因子的珠子的准备和应用。
- 展示如何在大脑皮层外植体上使用这些珠子。
- 为研究人员提供诱导基因表达的实用方法。
使用的方法
- 使用集成玻璃吸管制备凝胶蓝色凝胶珠子。
- 使用钨针应用肝素丙烯酸珠子。
- 熔化玻璃毛细管以精确放置珠子。
- 演示两种珠子的技术。
主要结果
- 成功地在外植体上放置珠子。
- 两种珠子都得到了有效的展示。
- 生长因子涂层促进了基因表达的诱导。
- 这些方法可以用于类似的实验设置。
结论
- 所展示的方法对操纵神经组织中的基因表达是有效的。
- 研究人员可以利用这些技术进行发育神经科学的进一步研究。
- 了解珠子的性质对于最佳应用至关重要。
常见问题
Executive Industry Relevance
Spatially controlled delivery of growth factors to neural explants enables precise interrogation of developmental signaling pathways, supporting early-stage target validation in neurobiology. Quantitative placement of coated beads facilitates hypothesis-driven studies of localized gene expression, reducing mechanistic ambiguity in pathway analysis. This approach strengthens predictive confidence for downstream screening and translational research in neurodevelopmental disorder models.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables localized delivery of signaling molecules to dissect pathway function in neural tissue.
- Supports functional validation of candidate targets by inducing spatially restricted gene expression.
- Facilitates mechanistic de-risking by isolating effects of specific growth factors on explant development.
- Improves predictive confidence for advancing neurodevelopmental targets in the portfolio.
Screening & Assay Development
- Prepares explant systems with defined growth factor gradients for downstream phenotypic screening.
- Standardizes bead placement and incubation to ensure reproducible quantitative outputs.
- Enables assay scalability and platform reuse by adapting bead types and placement tools.
- Supports reliable evaluation of compound effects in spatially controlled biological contexts.
Translational & Preclinical Research
- Aligns in vitro explant models with disease-relevant developmental processes for translational continuity.
- Provides a foundation for biomarker discovery linked to spatial gene expression changes.
- Facilitates risk-adjusted advancement decisions by clarifying pathway-specific effects in preclinical models.
- Enhances predictive de-risking for neurodevelopmental therapeutic strategies.
Pipeline & Workflow Integration
This bead placement method integrates into the early discovery continuum, bridging hypothesis testing, target validation, and assay development for neurobiological research.
- Discovery Biology: Supports hypothesis-driven manipulation of signaling pathways in neural explants.
- Screening: Provides reproducible, spatially controlled systems for quantitative phenotypic assays.
- Analytics: Enables measurement of localized gene expression and pathway activation in response to growth factor delivery.
- Translational Research: Connects in vitro findings to preclinical models of neurodevelopmental disorders when aligned with disease mechanisms.
- Enterprise Reuse: Offers a modular platform adaptable to various growth factors and explant systems for repeated use across programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in pathway analysis.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible workflows for bead preparation and placement.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by clarifying target relevance early.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of neurodevelopmental targets and pathways.
Implementation Considerations
- Requires technical expertise in micro-manipulation and explant culture handling.
- Needs access to specialized tools such as pulled glass pipettes and tungsten needles.
- Demands cross-team standardization of bead preparation and placement protocols.
- Adaptation may be necessary for different explant types or growth factor formulations.
- Practical limitations include bead size selection and maintaining bead integrity during placement.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:45
Types of beads: Affi-Gel and Heparin Acrylic
1:13
Affi-Gel bead placement
14:32
Example of obtained results
11:27
Preparation of acrylic beads
1:18
Preparation of glass capillaries
3:47
Preparation of Affi-Gel beads
13:31
Acrylic bead placement on explant
9:32
Affi-Gel bead placement on explant
