Name: 培养小鼠神经干细胞的前体 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: 学习从胚胎小鼠大脑皮层分离神经前体细胞的方法，包括组织解剖、酶消化和细胞培养技术。该方案为神经科学和发育生物学研究提供了可靠的实验基础。

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<ol>
<li>从小鼠 E12.5 胚胎皮层中分离神经前体细胞（NPCs）。</li>
<li>从解剖得到的端脑泡中去除皮肤和间充质层。</li>
<li>将脑泡置于含 0.05% 胰蛋白酶、0.02% EDTA 和 0.2% BSA 的 HBSS 中，37°C 下孵育 20 分钟。</li>
<li>加入等体积含 1 mg/ml 大豆胰蛋白酶抑制剂（Sigma #T6522）的 HBSS 终止消化反应。</li>
<li>使用火焰抛光的巴斯德移液管反复吹打，使组织充分解离。</li>
<li>细胞用含 0.2% BSA 的 HBSS 洗涤一次，然后以每毫升 50,000 个细胞的密度接种于经层粘连蛋白包被的盖玻片上，培养基中添加 20 ng/ml EGF、10 ng/ml FGF2（R&amp;D Systems 或 Peprotech）和 2 ug/ml 肝素（Sigma）。</li>
</ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

通过获取、分离和培养胚胎神经干细胞，我们对中枢神经系统发育和干细胞生物学的理解取得了巨大进展。本视频展示了E12.5小鼠大脑皮层的解剖操作，以及随后的组织分散和胚胎神经干细胞的培养过程。其他研究者也已成功采用了许多类似的实验方法。

<table><tbody><tr><td>直虹膜剪刀</td><td>工具</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>中号剪刀</td><td>工具</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>微型剪刀</td><td>工具</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>弯头镊子</td><td>工具</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠神经干细胞前体的培养

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

原代神经干细胞培养可用于研究中枢神经系统发育背后的机制。干细胞研究将增进我们对神经系统的理解，并可能帮助我们开发出针对目前无法治愈的脑部疾病和损伤的治疗方法。此外，干细胞还可用于旨在深入研究神经分化与转分化机制，以及调控细胞特化为特定细胞类型的遗传与环境信号的干细胞研究。本视频展示了一种从胚胎期12.5天（E12.5）小鼠前脑背侧分离细胞的技术。解剖过程包括从子宫中取出E12.5小鼠胚胎，用精细解剖镊去除“皮肤”，最终分离出大脑皮层组织片段。解剖完成后，组织经消化并进行机械性解离。将重悬的解离细胞接种于有利于神经干细胞生长的“干细胞”培养基中进行培养。

关键词：原代培养，神经干细胞，中枢神经系统发育，神经分化，转分化，遗传信号，环境信号，胚胎期12.5天，小鼠，前脑背侧，大脑皮层，组织解离，机械解离，干细胞培养基

本视频介绍了从胚胎小鼠发育中的大脑皮层分离神经前体细胞的方法。展示了从子宫中取出胚胎、解剖皮层组织以及消化分离出的大脑皮层的操作过程。

原代神经干细胞培养物可用于研究中枢神经系统发育背后的机制。干细胞研究将增加……

因此，这是神经前体细胞分离、解离和培养的第一步。首先，我将对一个24孔板进行包被。该孔板未经组织培养处理。我将用层粘连蛋白进行包被，以便细胞能够贴附。因此，首先我将使用水和多聚赖氨酸的混合液进行包被，每孔加入约450 µL。我已经用多聚D-赖氨酸溶液包被了半个培养板，即这里的这两行。接下来将在生物安全柜中室温孵育五分钟。目前孵育时间已达到五分钟。我将在这里用真空泵吸除PDL溶液。使用实验室真空装置。现在我将再次用约450 µL的水冲洗孔板。水洗步骤实际上无需孵育时间。我将直接吸去水分。现在我将加入封片液。将层粘连蛋白以每毫升2微克的浓度溶解于EM培养基中。因此，我将向每个孔中加入450微升层粘连蛋白溶液。目前我正在包被塑料培养板，但您也可以用这些孔来包被盖玻片。我将细胞在37摄氏度的组织培养孵育箱中孵育至少四小时。我有两把呈45度角弯曲的精细镊子，还有一些同样呈45度角弯曲的精细剪刀。准备一些钝头镊子，用于初步解剖子宫，另备一把大剪刀，用于雌性小鼠的剖腹操作。好的，这是一只CD1品系的正常雌鼠，她已怀孕，胚胎发育时间为12.5天。我已经使用二氧化碳窒息法和颈椎脱位法对小鼠实施了安乐死。现在我将取出子宫，随后取出胚胎。因此，首先我需要用70%乙醇对腹部区域进行消毒。我用大镊子夹住其腹部中间偏下半部分，剪一刀，放下器械，直接撕开皮肤，再次暴露腹部，并在同一位置夹住组织。在中间再剪一刀，并横向剪开，打开雌性个体，现在我已暴露出胚胎。这是她的子宫，因充满胚胎而肿胀。因此，我在卵巢下方进行第一刀切割，沿途剪除脂肪并向上牵拉。将该侧朝下放置，仅在胚胎之间进行抓取操作。显然，从胚胎顶部抓取可能会损伤组织。这是显而易见的。它们看起来像一串葡萄。再次在葡萄之间抓取，从另一侧子房上方切割并修去脂肪组织。最终切割位置在此处中间。同样，我正在修去脂肪组织。这是带有胚胎的子宫。我的解剖液是 PBS 加 0.6% 葡萄糖以及青霉素-链霉素。我首先会用解剖液冲洗胚胎，以去除血液。我的解剖操作很干净。接下来，我将沿着子宫的长度方向、在脂肪所在侧的对侧进行剪开，以暴露胚胎。脂肪在哪里？它在另一侧，因此你看不到。这里有一个暴露的胚胎。我可以在显微镜下向你展示它的形态。因此，在显微镜下看起来是这样的。我将沿着子宫的这一侧进行切割。对侧是脂肪组织。看这里的脂肪，我能清楚地看到脂肪组织。因此我将沿着子宫顶部纵向切开，一直切到底端。随着我向下延伸切开子宫，可以看到胚胎会随之被释放出来。再往北一点。哦，那里有一个。真漂亮。你正在脂肪胚胎刚刚冒出的一侧的对侧进行切割。是的，它们都是。这里有几个需要你偶尔回溯并重新打开，如果你之前遗漏了的话。所以这是羊膜，还是这是绒毛膜，这个是绒毛膜。羊膜位于内部，与胚胎紧密相连。看，从这个角度你其实看不到羊膜。一旦我把胚胎取出，你就会明白这些样本较小，不会使用它们。但是，

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

培养小鼠神经干细胞的前体

本文介绍了我们分离小鼠表皮神经嵴干细胞（EPI-NCSC）的方法。该技术包括显微解剖小鼠须毛毛囊，分离毛囊隆突区，并将其置于组织培养环境中。EPI-NCSC 通常在 3 至 4...

小鼠表皮神经嵴干细胞（EPI-NCSC）培养

本视频方案演示了如何利用神经球实验从胚胎第14天小鼠脑的神经节隆起中分离并扩增神经干细胞。...

利用神经球实验建立小鼠胚胎神经干细胞培养

从神经管中分离胚胎神经嵴有助于利用 体外...

从小鼠胚胎神经管中分离和培养神经嵴细胞

本视频演示了从成年小鼠脑组织中分离侧脑室壁并进行酶解组织解离以获得单细胞的详细实验方案。随后，这些细胞在特定培养条件下进行培养，可选择性地促进神经干细胞的增殖，并诱导其分化为少突胶质细胞与星形胶质细胞的共培养体系。...

从成年小鼠神经干细胞获得少突胶质细胞与星形胶质细胞混合培养物

本视频演示了一种方法 体外 从小鼠胚胎干细胞（mESCs）生成神经前体细胞（NPCs）。将mESCs在悬浮培养中形成拟胚体（EBs），随后诱导其分化为NPCs 通过...

一种从小鼠胚胎干细胞生成神经前体细胞的技术

本文详细描述了一种从单只成年小鼠的脑室下区和齿状回同时生成神经前体细胞培养物的实验方案，该培养物可采用贴壁单层培养或神经球培养的形式。...

一只小鼠，两种培养：从单只小鼠的两个神经发生区分离与培养成年神经干细胞

本方案详细描述了使用无血清单层培养法从胚胎干细胞诱导生成神经前体细胞的方法。这些前体细胞可用于分化为成熟的神经细胞类型，或用于研究神经特化过程，并可适用于多孔板形式的化合物筛选高通量扩增。...

小鼠胚胎干细胞在无血清单层培养条件下的神经分化

建立成体神经干细胞（aNSCs）的培养体系，有助于研究并应用aNSCs进行治疗。胼胝体下区（SCZ）最近被确认为成年小鼠中一种新的成神经细胞形成区域。本文介绍了SCZ来源的aNSCs的分离、扩增和分化方法。...

从小鼠胼胝下区分离和培养成年神经干细胞

本文介绍一种从E13小鼠胚胎神经节隆起中分离神经干细胞的新型显微手术技术。...

小鼠胚胎神经干细胞的分离与培养

我们描述了利用悬滴法将小鼠胚胎干细胞在体外分化为神经元细胞的实验步骤。此外，我们通过RT-qPCR、免疫荧光、RNA测序和流式细胞术进行了全面的表型分析。...

小鼠胚胎干细胞向神经前体细胞及神经元的分化与鉴定

学习从胚胎小鼠大脑皮层分离神经前体细胞的方法，包括组织解剖、酶消化和细胞培养技术。该方案为神经科学和发育生物学研究提供了可靠的实验基础。

小鼠神经干细胞前体的培养

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