Name: 抗体分析的荧光素酶免疫沉淀系统（LIPS） (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-07T17:25:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: 学习荧光素酶免疫沉淀系统（LIPS）技术，用于定量检测抗体水平并辅助疾病诊断。该方法利用COS-1细胞表达海肾荧光素酶融合抗原，通过蛋白A/G磁珠捕获IgG分子，无需纯化粗提物即可快速获得高灵敏度结果，适用于临床研究和疫苗监测等多种应用场景。

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本研究由美国国家牙科与颅面研究所（NIDCR）院内研究计划资助。

1. 示意图概述：
本视频展示了进行LIPS检测的步骤。抗原在Cos1细胞中以重组形式表达 海肾 荧光素酶（Ruc）-抗原融合蛋白，并获取粗提物直接使用，无需纯化。LIPS 检测通过将粗提物孵育来启动。e Ruc-抗原 在微量滴定板孔中用患者血清进行孵育。然后将抗体-抗原混合物转移至含有蛋白A/G磁珠的96孔滤板中，以捕获IgG分子。洗涤含有蛋白A/G磁珠的滤板后，加入腔肠素底物，通过发光仪检测结合抗体的Ruc-抗原所产生的光信号单位。
第一部分：转染编码Renilla-抗原融合蛋白的质粒
实验准备：使用标准的组织培养方案，在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养Cos1细胞。Renilla荧光素酶融合蛋白表达质粒此前已有描述1。使用Qiagen公司的中量质粒提取试剂盒制备这些质粒的DNA，产量应约为1–3 mg。测定DNA浓度，并将其配制成1000 μg/ml的储存液，于-20°C保存。
实验步骤：
<ol>
<li>转染前一天，将 Cos-1 细胞以每皿约 2 × 106 个的密度接种至新的 100 × 20 mm 培养皿中，于 37 °C 培养。</li>
<li>次日，Cos-1 细胞应达到 80–95% 的融合度。为每种待转染的质粒 DNA 标记相应的 1.5 ml 聚丙烯微量离心管，并将储存于 4 °C 的 FuGENE-6 转染试剂置于室温回温。</li>
<li>向每支微量离心管中加入 94 μl Opti-MEM 培养基，然后加入 6 μl FuGENE 6，注意避免接触管壁。</li>
<li>将混合物在室温下孵育 5 分钟。</li>
<li>加入 1–2 μg（来自 1 mg/ml DNA 储液）的 Renilla 荧光素酶抗原融合表达质粒，混匀后于室温孵育 15 分钟。</li>
<li>将 DNA-FuGENE 6-Opti-MEM 混合液均匀滴加至 Cos-1 细胞培养皿的培养基中，完成转染。</li>
</ol>
第二部分：收获Renilla-抗原融合蛋白
<ol>
<li>转染后两天，收集 Cos-1 细胞。首先移除培养基，然后用 6 ml PBS 洗涤细胞。倾去 PBS 后，用移液器吸除组织培养皿中残留的 PBS。</li>
<li>加入 1.4 ml 冷裂解缓冲液，缓冲液成分为 50 mM Tris（pH 7.5）、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、1% Triton X-100、50% 甘油以及蛋白酶抑制剂（每 50 ml 裂解缓冲液中加入 2 片 complete miniprotease inhibitor cocktail）。用细胞刮刀收集细胞，并迅速将裂解液的一半分别转移至两个预冷的 1.5 ml 微量离心管中，置于冰上。</li>
<li>使用 Branson Sonifier 150 超声破碎细胞。将含有细胞裂解液的微量离心管置于冰上，依次以超声设置 2、2 和 4 进行三次 5 秒脉冲，每次间隔 5 秒。</li>
<li>在 4 °C 条件下，以 12,500 RPM 离心两次，每次 4 分钟。第一次离心后，轻柔倒置离心管，以去除管壁上松散附着的碎片。第二次离心后，小心地将上清液（避免扰动沉淀）从两个离心管转移至一个新的预冷微量离心管中。</li>
<li>计算每微升（μl）裂解液的光单位（LU）。为测定 LU，取 1 μl 裂解液加入 8 μl PBS，在新的微量离心管中稀释。直接向稀释后的混合液中加入 100 μl 1X 腔肠素底物，并立即使用管式发光仪（20/20n Turner Scientific）测量发光信号，读数时间为 5 秒。</li>
<li>Ruc-抗原裂解液可在 -20 °C 保存 1–2 天，或分装后于 -80 °C 长期保存。</li>
</ol>
第3部分：制备血清主板
<ol>
<li>制备血清主板：首先向96深孔聚丙烯微孔板的每个孔中加入450 μl缓冲液A（50 mM Tris，pH 7.5，100 mM NaCl，5 mM MgCl2，1% Triton X-100）。在此步骤中，也可在缓冲液A中加入染料酚红（Phenol Red）（终浓度为0.2 μg/ml），作为示踪剂以监测后续血清样本的添加及其他LIPS实验步骤。</li>
<li>接着，向含有450 μl缓冲液A的不同孔中分别加入各样本的50 μl血清。注意，此步骤实现了血清在缓冲液A中的1:10稀释。通常，主板最后两孔不加血清，以保留作为空白缓冲对照。</li>
<li>使用主板前，需将其置于旋转摇床上充分振荡1–2小时。若妥善保存以防止蒸发，主板中的血清在4°C下至少可稳定保存1个月（或更长时间）。</li>
<li>如下所述，该主板可多次取出10 μl稀释后的血清，用于针对多种抗原的血清谱型分析。也可使用更大或更小规格的主板。当主板不使用时，应用Parafilm封膜密封。</li>
</ol>
第4部分：LIPS检测
<ol>
<li>使用聚丙烯96孔浅孔微孔板检测血清。第一步，使用8通道移液器将40 μl缓冲液A加入96孔板的每个孔中。</li>
<li>接下来，从主板中取出10 μl稀释后的血清（相当于1 μl原血清），使用8通道移液器直接加入工作板的每个孔中。</li>
<li>随后配制含有Ruc-抗原提取物的主混合液，使每孔加入50 μl缓冲液A中含有1 × 107发光单位（LU）。较低的加入量（低至1 × 106）也可使用，但会导致动态范围降低。配制该主混合液后，用移液器向每孔加入50 μl Ruc-抗原混合液。</li>
<li>将微孔板置于旋转摇床上，室温孵育1小时。</li>
<li>在孵育期间，向一个新的96孔滤板HTS板（Millipore，Bedford，MA）的每个孔底部加入5 μl PBS中30%的Ultralink蛋白A/G磁珠悬浮液（Pierce Biotechnology，Rockford，IL）。</li>
<li>1小时孵育结束后，使用8通道移液器将100 μl Ruc-抗原-抗体反应混合物转移至含有蛋白A/G磁珠的96孔滤板HTS板中。</li>
<li>将96孔滤板置于旋转摇床上，室温再孵育1小时。</li>
<li>随后在真空 manifold 上洗涤滤板。每个孔用100 μl缓冲液A洗涤8次，再用100 μl PBS洗涤2次。该步骤可手动操作，也可使用机器人移液工作站完成。</li>
<li>最后一次洗涤后，关闭真空。取下滤板，用一叠纸巾或滤纸吸干，确保去除板的顶部和底部的水分。</li>
</ol>
第5部分：发光检测与数据分析
设置：
使用配备单通道注射器的Berthold LB 960 Centro微孔板发光仪测定每个孔的发光值。仪器开机后，使用注射器清洗程序以蒸馏H2O冲洗注射器。腔肠素底物按照生产商说明，使用Promega海肾荧光素酶底物试剂盒配制。通常配制6 ml的1X腔肠素底物混合液（即60 μl腔肠素储存液加6 ml 1X缓冲液），用于仪器引管及运行一块完整的96孔板。在分析微孔板前，需先用1X腔肠素底物对Berthold LB 960 Centro微孔板发光仪进行引管。打开包含底物注射和读板参数的程序文件。在这些测定中，注入50 μl腔肠素底物，随后震荡2秒，接着进行5秒的发光信号读取。
<ol>
<li>尽管平板发光仪能够读取整块板，但也可选择部分读取（在读取菜单下）。启动程序，开始对平板进行读取。</li>
<li>运行结束后，应及时取出微量滤板，防止发光仪内发生溢洒。使用MikroWin程序将生成的数据导出为Excel格式以进行分析。</li>
<li>我们建议对血清样本进行两次独立实验。然后对数据取平均值，以获得每个样本的LU滴度值。这些数值还可进一步校正，扣除缓冲液空白值。</li>
<li>其他数据分析，例如确定临界值，可通过对照值的平均值加3或5倍标准差来计算。</li>
</ol>

<ol><li>Burbelo, P. D., Goldman, R., Mattson, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+immunoprecipitation+method+for+quantitatively+measuring+antibody+responses+in+clinical+sera+samples+by+using+mammalian-produced+Renilla+luciferase-antigen+fusion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A simplified immunoprecipitation method for quantitatively measuring antibody responses in clinical sera samples by using mammalian-produced Renilla luciferase-antigen fusion proteins.</a> BMC Biotechnol. 5, 22-22 (2005).</li>
<li>Burbelo, P. D., Leahy, H. P., Iadarola, M. J., Nutman, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Four-Antigen+Mixture+for+Rapid+Assessment+of+Onchocerca+volvulus+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Four-Antigen Mixture for Rapid Assessment of Onchocerca volvulus Infection.</a> PLoS Negl Trop Dis. 3, e438-e438 (2009).</li>
<li>Burbelo, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+and+robust+luminescent+profiling+of+anti-La+and+other+autoantibodies+in+Sj+gren%E2%80%99s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Sensitive and robust luminescent profiling of anti-La and other autoantibodies in Sj gren’s syndrome.</a> Autoimmunity. 139, 241-245 (2009).</li>
<li>Burbelo, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+antibody+quantification+and+generation+of+whole+proteome+antibody+response+profiles+using+LIPS+%28luciferase+immunoprecipitation+systems%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Rapid antibody quantification and generation of whole proteome antibody response profiles using LIPS (luciferase immunoprecipitation systems).</a> Biochem Biophys Res Commun. 352, 889-895 (2007).</li>
<li>Burbelo, P. D., Groot, S., Dalakas, M. C., Iadarola, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+definition+profiling+of+autoantibodies+to+glutamic+acid+decarboxylases+GAD65%2FGAD67+in+stiff-person+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">High definition profiling of autoantibodies to glutamic acid decarboxylases GAD65/GAD67 in stiff-person syndrome.</a> Biochem Biophys Res Commun. 366, 1-7 (2008).</li>
<li>Burbelo, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+luminescence+assay+for+autoantibodies+to+mammalian+cell-prepared+insulinoma-associated+protein+2%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">A new luminescence assay for autoantibodies to mammalian cell-prepared insulinoma-associated protein 2.</a> Diabetes Care. 31, 1824-1826 (2008).</li>
<li>Burbelo, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serological+diagnosis+of+human+herpes+simplex+virus+type+1+and+2+infections+by+luciferase+immunoprecipitation+system+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Serological diagnosis of human herpes simplex virus type 1 and 2 infections by luciferase immunoprecipitation system assay.</a> Clin Vaccine Immunol. 16, 366-371 (2009).</li>
<li>Burbelo, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+quantitative+serological+detection+of+anti-cytomegalovirus+%28CMV%29+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Highly quantitative serological detection of anti-cytomegalovirus (CMV) antibodies.</a> Virol J. 6, 45-45 (2009).</li>
<li>Burbelo, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four-antigen+mixture+containing+v-cyclin+for+serological+screening+of+human+herpesvirus+8+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Four-antigen mixture containing v-cyclin for serological screening of human herpesvirus 8 infection.</a> Clin Vaccine Immunol. 16, 621-627 (2009).</li>
<li>Ramanathan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+luciferase+immunoprecipitation+systems+assay+enhances+the+sensitivity+and+specificity+of+diagnosis+of+Strongyloides+stercoralis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">A luciferase immunoprecipitation systems assay enhances the sensitivity and specificity of diagnosis of Strongyloides stercoralis infection.</a> J Infect Dis. 198, 444-451 (2008).</li>
</ol>

LIPS 所需的实验优化极少，由于其操作简便，通常可在两周内针对任意抗原使用 LIPS 生成高质量数据。最耗时的步骤是克隆并构建含有 Ruc-抗原融合蛋白的适当质粒表达载体。一旦获得这些质粒，即可如上所述快速对单个或多个抗原进行 LIPS 检测。需要注意的是，LIPS 具有很高的灵活性，血清样本既可在离心管中检测，也可借助 BIOMEK 机器人工作站2 或配备真空过滤装置的洗板机在微量滤板上进行检测。这一高度可扩展的系统可实现对一组人类自身抗原3 或病毒全蛋白质组4 的并行 LIPS 分析。LIPS 生成的多种不同抗体谱很可能在诊断3-9、抗原发现9、治疗过程监测10、疫苗效果监控等方面具有重要价值，并对特定疾病状态及公共卫生总体具有广泛意义。

<table><tbody><tr><td>HiSpeed 质粒中量提取试剂盒</td><td>Qiagen</td><td>12643</td><td></td></tr><tr><td>100 × 20 mm 组织培养皿</td><td>Fisher Scientific</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Invitrogen</td><td>31985</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE 6</td><td>Roche Group</td><td>1814443</td><td></td></tr><tr><td>Complete, Mini 蛋白酶抑制剂混合物</td><td>Roche Group</td><td>11836153001</td><td></td></tr><tr><td>聚丙烯 96 孔深孔板，1 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-566-120</td><td>带盖深孔板，并用 Parafilm 封膜密封</td></tr><tr><td>聚丙烯微量滴定板</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-566-120</td><td></td></tr><tr><td>HTS 滤膜板</td><td>EMD Millipore</td><td>MSBVN1B50</td><td></td></tr><tr><td>UltraLink 固相化 Protein A/G</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>53133 (10ml)</td><td></td></tr><tr><td>海肾荧光素酶检测系统</td><td>Promega Corp.</td><td>E2820</td><td>适用于 2000 次检测</td></tr><tr><td>Centro 微孔板发光仪</td><td>Berthold Technologies</td><td>LB 960</td><td></td></tr></tbody></table>

通过荧光素酶免疫沉淀系统进行抗体谱型分析（lips）

Antibody Profiling by Luciferase Immunoprecipitation Systems (LIPS)

全面理解并定量分析针对自身抗原及病原体的抗体谱的技术，可能为疾病机制提供新的见解，并有助于阐明可用于区分具有不同临床特征的疾病亚型的新标志物，从而更深入地理解发病机制。我们开发了一种高通量定量方法，称为荧光素酶免疫沉淀系统（Luciferase Immunoprecipitation Systems, LIPS），用于分析患者血清对自身抗原以及感染相关病原体抗原的抗体反应谱。与ELISA不同，LIPS具有高度敏感性，可采用通用格式轻松实现对不同抗原的体液血清学反应谱的检测，并能产生高达6个数量级的动态抗体滴度范围。10对于某些抗原而言，这些研究中利用LIPS技术对患者体液免疫应答进行定量分析，所针对的抗原组合甚至包括某些病原体（如HIV）的整个蛋白质组，通常比ELISA法仅检测单一抗原提供更丰富的信息。此外，LIPS技术还省去了制备高纯度抗原所需的时间和精力，也避免了传统ELISA中繁琐的实验条件优化步骤。本文提供了一份详细的实验方案，描述了如何开展LIPS检测，以便捷地分析针对单一或多种抗原的抗体应答。

本文描述了进行LIPS（荧光素酶免疫沉淀系统）的技术细节。总体方法包括在哺乳动物细胞中表达编码抗原与海肾荧光素酶（Ruc）融合的嵌合基因。随后制备粗制的Ruc-抗原提取物，并在无需纯化的条件下直接用于免疫沉淀测定，以定量抗体。

通过荧光素酶免疫沉淀系统进行抗体谱型分析（LIPS）

全面理解与定量分析针对自身抗原及病原体抗体谱的技术可能为疾病研究提供新的见解……

本视频演示了进行唇部检测所涉及的步骤。抗原在CO细胞中以重组型普通萤光素酶或罗克抗原融合蛋白的形式表达。获取粗提物后直接使用，无需纯化。通过将粗制的 rook 抗原提取物与患者的 SRA 进行孵育来启动 lips 检测。随后，将抗体-抗原混合物转移至含有蛋白 A/G 微珠的 96 孔滤板中的微量滴定板内，洗涤后捕获含有蛋白 A/G 微珠的滤板中的 IgG 分子。通过加入 linine 底物并使用发光仪测量光信号单位，来测定与抗体结合的 rook 抗原。大家好，我是来自美国国立牙科与颅面研究所感觉生物学实验室的Catherine Chang博士。今天我们将向您展示唇部荧光素酶免疫沉淀系统的操作流程。在我们的实验室中，使用该技术来检测抗体滴度，以帮助诊断疾病或感染。亚单位分层可用于监测疾病状态、疫苗接种效果及其他与抗体谱生成相关的应用。现在让我们开始。在进行转染之前，根据《BMC生物技术》论文中的描述，预先制备用于萤光素酶融合的质粒。BYO 等人于2005年采用MIDI提取试剂盒制备血浆DNA，产量为一至三毫克，并将其储存为每毫升含一毫克的储备溶液，置于零下20摄氏度保存。用于转染的Cost one细胞在DMEM加10%胎牛血清中培养，遵循标准的组织培养操作规程。转染前一天，将Cost one细胞以每100乘20毫米培养皿约两乘十的六次方个细胞的密度接种至新的培养皿中，于37摄氏度继续培养至次日。细胞的汇合度应为80%至95%。在等待FU基因升温的同时，将储存于4°C的FU基因六转染试剂恢复至室温，并为每份拟转染的质粒DNA标记1.5毫升聚丙烯微量离心管，注意不要触碰管壁。向各管中加入6微升FU基因六试剂，每管中应已含有94微升Opti-MEM培养基，混匀后室温孵育5分钟。随后，向每管中加入1至2微克编码Ran Lucifer抗原融合构建体的质粒DNA，通过反复倒置管子混匀，短暂离心后于室温孵育15分钟。将全部DNA融合六种最佳溶液均匀滴加到cos细胞的培养基中，以将溶液转入细胞。转染后，将cos细胞培养两天，然后进行收集。开始收集融合蛋白时，移除培养基，并用6 mL PBS洗涤细胞。用移液器吸走组织培养皿中残留的 PBS，加入 1.4 毫升冷裂解缓冲液，用细胞刮刀收集细胞，并迅速将裂解液的一半转移至两个预置在冰上的 1.5 毫升微量离心管中。使用 Branson SOLIDIFIER one 50 破碎细胞。将含有细胞裂解液的微量离心管置于冰上，脉冲超声处理 5 秒。五秒和五秒。超声处理参数分别为二、二和四。将细胞裂解物在 12,500 RPM 条件下离心两分四分钟。在4°C下离心。两次离心之间轻轻翻转离心管，以去除管壁上松散附着的碎片。然后小心地将上清液转移至冰上新的微量离心管中，注意不要扰动来自两支离心管的沉淀。为了测定裂解液的光单位（lu），取一微升裂解液与八微升磷酸盐缓冲液（PBS）在新的微量离心管中稀释，直接向稀释后的混合液中加入100微升荧光素底物，立即使用管式发光仪对管内样品进行发光检测，读取时间为五秒。从此步骤开始，请在处理人源和动物源样本时注意采取安全防护措施。为制备用于抗原谱分析的患者抗体血清主板，首先向96孔深孔聚丙烯微孔板的每孔中加入450微升缓冲液A。在此步骤中，也可在缓冲液 A 中加入染料酚红，作为后续 SRA 样本处理及其他脂质体结合实验步骤的示踪剂。接下来，将每个样本的 50 微升血清加入至含有 450 微升缓冲液的各孔中。需要注意的是，此操作实现了 SRA 在缓冲液中 1:10 的稀释。通常，SRA 不添加到主板的最后两孔中，因为这两孔保留用于缓冲液空白，以便将来储存主板时使用。将主板在旋转平台上剧烈震荡一至两小时。在 650 RPM 条件下，血清在 4 摄氏度下可稳定保存至少一个月或更长时间；若在进行脂多糖检测前需要储存，可用石蜡膜密封微孔板以防止蒸发。准备一个电子表格，记录样本编号及其在主板上的对应孔位。聚丙烯 96 孔浅孔微孔板用作工作板来检测血清。第一步，使用八通道微量移液器向96孔板的每个孔中加入40 µL缓冲液A。接着，从主孔板中吸取10 µL稀释后的血清，使用八通道微量移液器直接加入工作板的每个孔中。使用后，用帕拉膜密封主孔板，盖上主孔板盖子，再用保鲜膜包裹，于4 °C保存。接下来配制含有鹭抗原提取物的预混液，使每50微升缓冲液A中加入一乘以十的七次方淋巴细胞单位（lu），并将其加入每个孔中。配制该预混液后，用移液器向每个孔中加入50微升鹭抗原混合液。用聚苯乙烯板盖盖住板孔，置于摇床上，于100转/分钟（RPM）条件下孵育1小时。在室温孵育期间，从冰箱中取出1.5毫升含有30% Ultra-Link Protein A/G磁珠悬浮液（PBS缓冲液）的 aliquot。用多通道移液器将5微升加入新的96孔HTS过滤板的每孔底部。在1小时的板孵育结束后，将100微升抗原-抗体反应混合物转移至含有Protein A/G磁珠的96孔HTS过滤板中，使用多通道微量移液器操作，并将96孔过滤板置于旋转摇床上，在室温下以100 RPM继续孵育1小时。接下来，使用 Biome FX 自动化工作站配合真空 manifold 对滤板进行洗涤，每个孔先用 100 µL 缓冲液 A 洗涤八次，最后再用 100 µL PBS 洗涤两次。最后一次洗涤后，关闭真空。取出滤板，用一叠纸巾或滤纸吸干，确保去除板的顶部和底部的水分。使用 Burt hold LB nine 60 Centro 微孔板发光仪测定板中每个孔的发光值。打开仪器，用蒸馏水冲洗进样器。使用进样器清洗循环，INE 底物用于仪器的引物和运行，该底物按照制造商说明使用 Promega ranil 底物试剂盒配制，通常每块板需要六毫升的优质底物混合液。将底物混合液加入到发光仪中，打开包含底物注射和读板设置的程序文件。进行这些测量时，注入 50 微升的底物溶液。酶标板振荡 2 秒，随后读取 5 秒的发光信号。运行程序以启动读板，在实验结束后立即取出微孔滤板，防止在发光仪中发生溢出。数据将自动从 microwind 程序导出为 Excel 格式，以便进一步分析。对同一样本血清的两次不同运行结果取平均值。建议为每个样本生成lu滴度值。两个重复样本的滴度值应显示出高度一致性。在绘制数据图时，可进一步调整lu滴度值，扣除缓冲液空白值，如下所示。该检测方法的灵敏度和特异性也可通过对照样本的均值加三或五个标准差所确定的临界值来计算。我们刚刚向您展示了如何利用LIPS技术测定抗体滴度。LIPS所需的检测优化步骤极少，且由于其操作简便，可在不到两周的时间内针对任何特定抗原获得高质量数据。在处理人血清样本时，务必注意采取适当的安全防护措施。需要指出的是，Lifts 具有高度可扩展性，因此可用于检测少量样本（采用手动洗涤）或整板样本（采用机器人工作站）。鉴于其高度的灵活性，我们认为 Lips 在血清抗原分析中将具有重要应用价值，并将在疾病分析和公共卫生领域产生广泛影响。以上就是全部内容。感谢您的观看，祝您的抗体谱型分析实验顺利成功。

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生物学

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通过流式细胞术结合单细胞PCR与克隆技术，BSelex方法可用于从人外周血单个核细胞中鉴定并回收特异性抗原抗体。...

从富集的人类记忆B细胞群体中筛选和回收具有理想特异性的抗体的单细胞筛选方法

本文所述方案介绍了HiBiT-受体结合域蛋白复合物的制备方法及其在快速、灵敏检测SARS-CoV-2抗体中的应用。...

基于HiBiT生物报告系统的SARS-CoV-2受体结合域抗体检测

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学习荧光素酶免疫沉淀系统（LIPS）技术，用于定量检测抗体水平并辅助疾病诊断。该方法利用COS-1细胞表达海肾荧光素酶融合抗原，通过蛋白A/G磁珠捕获IgG分子，无需纯化粗提物即可快速获得高灵敏度结果，适用于临床研究和疫苗监测等多种应用场景。

通过荧光素酶免疫沉淀系统进行抗体谱型分析（LIPS）

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