研究果蝇（Drosophila）中的攻击行为

我叫Sarah Ertel，是哈佛医学院神经生物学系Kravitz实验室的博士后。我叫Sibu，是一名来自德国的医学生，目前正在Kravitz实验室进行科研轮转。

我们希望向您展示如何建立果蝇争斗实验并研究其攻击行为。首先，我们需要准备隔离小管，具体步骤是将果蝇培养基在微波炉中加热融化，待其凝固后，向每根培养管中加入1.5 µL培养基，然后用棉塞封口。

第一步是获取社会经验缺乏的果蝇，即从未接触过其他果蝇的个体。为此，我们取所需类型果蝇的晚期蛹，并用镊子小心地将蛹从试管中取出。

取准备好的分离小瓶，移除棉塞，轻轻将蛹放入瓶内，盖上瓶盖并标记小瓶。将这些蛹放回昼夜循环的温控培养箱中。第二天检查果蝇是否已羽化，然后记录果蝇羽化的日期。

然后将果蝇饲养三到五天，在此期间，我们在果蝇腹部背面涂抹颜料，以便识别个体。现在我们正在为正式的打斗实验制作观察室。具体操作是使用两张普通的显微镜载玻片，在载玻片中部用金刚石切割笔进行标记，划伤表面，然后找到边缘，载玻片即可轻松折断成两半。好的。

然后使用胶水将载玻片的边缘粘合在一起，再将两个半片粘合形成一个盒子。我们可以用70%乙醇清洗，然后再用一些水去除手指残留物。

在培养室底部加入1%琼脂，然后将培养室放入。这可以为果蝇提供湿度。接着，我们需要给果蝇提供一些可供争夺的资源。

因此，尽管培养室的实际大小可被视为一种领地，我们仍会向其中提供食物。我们将食物放入闪烁计数瓶中，这为进一步产生可能的领地行为提供了条件，即某只果蝇可能会试图守护这一区域。

现在，我将取刚用微波炉加热好的食物，将其装入食物杯中，这些食物杯实际上是闪烁计数瓶盖，之后果蝇将在其中进行争斗。装填时需使其表面略呈凸面，以便能够观察到整个表面。同时应避免产生气泡，因为气泡会阻碍果蝇在食物杯表面爬行，而我们希望吸引果蝇聚集到食物杯上。

我们还将在食物杯的中央加入一滴酵母糊。首先需要准备酵母糊。取适量活酵母糊放入食物杯中，然后加入一滴水，搅拌至形成糊状。

待食物杯冷却后，将酵母糊或仅少量酵母糊滴加至食物杯中央。目前我们所在的这间是行为实验间，我们共有两间行为实验间。当关闭所有照明时，此房间完全黑暗，且环境湿度与温度均受控。

因此，我们将温度保持在25摄氏度，并尽量使湿度超过40%，以便尽可能控制果蝇所处的环境条件。接下来，我将设置打斗实验。我们之前准备好的食物杯就在这里，现在我要把它们放入这些实验舱中。

尽量将它们放置在培养室的中央。我们重新盖上盖子。好的，我将使用这个吸虫器吸取果蝇，恰好一对果蝇。

我将取两只果蝇，用移液器将它们吸入此处，然后放入实验腔室中。这就是我接下来要做的操作。现在，我会像这样握住小瓶，因为果蝇具有负趋地性并趋向光线，因此它们通常会向上移动。

这样我在移除棉塞时更容易抓住它们。如您所见，目前我的培养管中有两只果蝇。另外，由于这些是经过标记的果蝇，我需要确保取一只已标记的和一只未标记的。

或者，如果我们使用两种颜色，一种颜色涂成一种颜色，另一种颜色涂成另一种颜色，但它们的基因型相同。现在我将它们插入相应的腔室中，并移除石蜡球。

有一个小孔，我将通过它放入果蝇。我尽量让盖子处于一个合适的位置，这样在轻敲时果蝇不会逃逸。它们会稍微往下掉落，然后我轻轻吹气，只需轻轻吹一下即可，不必用力吹入，以免干扰它们。果蝇需要三到大约四十分钟的时间才能安定下来，并开始观察活动室内的环境。

然后它们会开始占据食物杯，争斗也将随之开始。现在，我将整个装置放在摄像机前，并调整高度，以便以略微倾斜的角度拍摄食物杯，从而能够看到整个食物杯，且整个食物杯都处于焦点范围内。

进行这些攻击性行为检测的房间非常重要。该房间是独立的，需保持无人员走动和噪音干扰，温度维持在25摄氏度，湿度控制在45%至55%之间，以确保果蝇在此环境中保持健康和活跃状态。

此外，我们会调暗顶部的灯光，以便食物杯上的光线也能吸引果蝇。利用DFA作为模型系统并采用此类实验装置，不仅能够观察攻击行为的强度，还能分析我们所观察到的攻击行为的具体模式。我们特别关注这些特定行为，希望了解在发育过程中大脑是如何建立神经连接的，以及这些神经连接如何在成年个体中表现出来——而这些成年个体并未通过学习获得此类行为。

因此，当它们看到开始与其他果蝇互动时，就会立即表现出这些行为。它们知道如何扑击，也知道如何表现出攻击性。因此，我们希望了解这些行为是如何在果蝇的神经系统中被构建的，以及它们随后是如何被调控的。