Name: 变性梯度凝胶电泳（DGGE） (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: 学习使用变性梯度凝胶电泳技术分析微生物生物膜中的细菌群落，通过16S rRNA序列研究其时空动态变化。该方法为微生物生态学研究提供了有效的群落分析工具。

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作者无任何利益冲突需要披露。

变性梯度凝胶电泳（dgge）

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

变性梯度凝胶电泳（DGGE）

好的。大家好，我叫Celeste Peterson，是哈佛大学的一名研究员，研究方向是微生物生物膜群落。我通过分析细菌群落的16S rRNA序列，来研究这些序列在时空变化中的动态特征。为此，我采用了变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术。这并非我所在井的正常情况，运行时需保持在60°C，且缓冲液需持续泵送。因此，我们将缓冲液预热约一小时，直至达到60°C，然后便可运行该装置。现在，我将用稀释的uc溶液清洗此板，以去除杂质，并进行光照处理。任何类似的情况都可能导致出现规律性条带。彻底擦去所有水分非常重要。因此，当我组装凝胶时，会将该芯片放在凝胶的外侧。因此，凝胶将位于这两片玻璃之间，而芯片位于外侧，不会影响到中间的凝胶。现在我将把凝胶组装到这些夹具中，然后将其压紧，并通过向右旋转来固定。与任何凝胶一样，确保底部平齐非常重要。为防止产生气泡，现在我们将凝胶翻转并放入此处，使其与垫圈密封。因此，在操作时需确保凝胶的玻璃板与此处的垫圈完全对齐。侧边的卡扣随后插入，并向下按压以完成密封。这是一个30毫升的注射器。这部分和这部分随Bio-Rad试剂盒提供，只需如此安装即可。其作用是去除管中的多余水分。因此，将导管连接到凝胶上以加样。首先，将一个接头插入导管中，然后连接带有该小型接头的针头，并将其准确置于凝胶的正中心位置，确保其位于底部玻璃板稍下方。接着，此导线接头将插入长导管中，并连接两个分别装有高密度和低密度溶液的等体积注射器。这些是预先配制好的溶液。蓝色溶液中，我加入了一种染料，用于指示这是变性程度最高的溶液，而这个低密度溶液则是变性程度最低的溶液。这些溶液中已包含所有所需成分。现在我将开始制备，实际上我要制备的量是原来的两倍。一旦混合完成，你大约有五分钟到七分钟的时间在凝胶上升之前完成灌胶。现在我们用该溶液填充注射器中的胶液。因此，我将加入约15的溶液。然后，为了去除任何气泡，我会将容器倒置并轻轻挤压，直到顶部的气泡消失。现在，这个小螺丝将插入这个凹槽中。该适配器将与此处的夹具对齐，并用C型夹紧密固定。然后将这段管路连接到注射器上。另一侧的高密度基质在需要递送时也以相同方式操作。因此，我将平稳地顺时针转动这个旋钮。首先，蓝色溶液会先流出，因为它的密度较大，将形成凝胶的底层部分。随后一段时间，透明溶液将开始填充凝胶，从而形成梯度。片刻之后，将凝胶轻轻倾斜一定角度，一旦倒完凝胶，立即冲洗试管，因为凝胶会迅速聚合。就是这个小组在这里。然后按压下去。这个小的，另一侧也进行同样的操作。好的。大家好，我叫Celeste Peterson，是哈佛大学的一名研究员，研究方向是微生物群落。我通过分析细菌的16S rRNA基因序列，来研究这些序列在时间和空间上的变化情况，从而对细菌群落进行特征分析。为此，我采用了变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术。因此，DGE 指的是变性梯度凝胶电泳（den

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变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离单链DNA或RNA，最大可分离长度达500个核苷酸。尿素与加热共同作用使样品变性，未形成结构的单链根据其分子量在凝胶基质中迁移。...

变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳（Urea PAGE）

本文介绍了一种利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的基本实验方案。...

琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段

本视频展示了基于二维半变性去垢剂琼脂糖凝胶电泳的淀粉样纤维分离方法。该技术根据淀粉样聚集体的异质性大小，实现其多态性聚集体的分离。...

二维半变性琼脂糖凝胶电泳：一种基于大小异质性分离多态性淀粉样纤维的技术

在本视频中，我们演示了一种二维凝胶电泳方法，该方法可从人无功能性垂体腺瘤（NFPA）的肿瘤组织中获得的复杂蛋白质混合物中分离出单个蛋白质。蛋白质首先在第一维中根据其电荷进行分离，然后在第二维中根据其分子量进一步分离。...

二维聚丙烯酰胺凝胶电泳：一种基于电荷和分子量分离复杂蛋白质混合物中蛋白质的分析技术

在基因组水平上快速检测并可靠定量RNA编辑事件仍然具有挑战性，目前主要依赖直接RNA测序方法。本文所述方案采用微温度梯度凝胶电泳（µTGGE）作为一种简单、快速且便携的RNA编辑检测方法。...

一种无需测序的RNA编辑快速检测方法

本视频展示了体外血管生成实验的方案，该实验可重现血管生成的多个阶段。展示了出芽、管腔形成、分支和吻合——血管生成的关键特征——的时间推移图像。...

优化的纤维蛋白凝胶珠管形成实验用于血管生成研究

我们描述了一种用于微加工梯度生成微流控装置的方案，该装置可在定义明确的微环境中产生成分的空间和时间梯度。通过该方法，梯度生成微流控装置可用于研究细胞定向迁移、胚胎发育、伤口愈合以及癌症转移。...

一种用于细胞生物学的梯度生成微流控装置

通过半变性去垢剂-琼脂糖凝胶电泳筛选淀粉样蛋白聚集

从0.22 μm Sterivex滤膜中提取DNA及氯化铯密度梯度离心

在本视频中，我们介绍了通过蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）对多蛋白复合物（MPCs）进行表征的方法。在第一维中，将透析后的细胞裂解液通过BN-PAGE分离，以鉴定各个MPCs。在第二维SDS-PAGE中，对感兴趣的MPCs进一步分离，以便通过免疫印迹分析其组成成分。...

用于分析细胞裂解液中多蛋白复合物的蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）

学习使用变性梯度凝胶电泳技术分析微生物生物膜中的细菌群落，通过16S rRNA序列研究其时空动态变化。该方法为微生物生态学研究提供了有效的群落分析工具。

变性梯度凝胶电泳（DGGE）

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