毒素诱导和蛋白质提取镰刀 SPP。文化

该视频描述了在这种情况下用于诱导 ome 物种毒素联合的程序，以及我们实验室用于蛋白质组学研究的整个 prote 提取方案。手术时长，16 天，真菌生长 4 天，毒素联合 10 天，蛋白质提取 2 天。四天后，菌落仍然向板的边缘积极生长。

典型的气生菌丝体形成并使用类固醇刀片在板流箱下通过轻轻刮擦板的表面来收集。将菌丝体切成五小块，并加入含有 25 毫升毒素诱导培养基的早期 my 培养瓶中。毒素诱导比深色灰尘更有效。

烧瓶覆盖着铝。然后将培养物摇动 10 天，在 25 °C下每分钟摇动 150 发。该培养基为 SAPH 培养基，含有高浓度的 S 行溶液。

众所周知，床与黑暗一起会促进 ria 中的毒素合成。然后通过在 MI 闭合组织上过滤，将菌丝体与含毒素的液体分离。该液体可用于测量毒素含量，而菌丝体用于蛋白质提取。

为避免介质携带，我的天花板用无菌水清洗了 3 次。然后应去除多余的水，如加入液氮，样品可以储存在零下 80 度或用于蛋白质提取。蛋白质提取程序基于 SDS 和 TCA 的使用，由不同的裂解步骤组成。

他将提出一种包含多个作员来执行的方法。在提取生物重复的同时，由不同的作员执行每个重复。此过程考虑了提取过程中的差异，这些差异可能由处理仿行的不同作员生成。

因此，当比较生物重复时，它应该显示出更高的稳健性，因为重复中包含作变量。同时，使用多个作员减少了处理时间。将样品在无菌研钵中使用液氮研磨，直到菌丝体变成细粉。

这一步对于蛋白质的质量和数量至关重要。将菌丝体收集在 10 毫特氟龙管中，占管总体积的十分之四。然后加入含有 SDS 和不同蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。

然后摇动试管，直到获得均匀的溶液。然后将样品在代码室中振荡 30 分钟以进一步匀浆，将样品煮沸以溶解细胞壁和疏水性蛋白质。SDS 的存在可防止形成中止蛋白质沉淀的寡聚体。

离心步骤分离三个阶段。蛋白质悬浮在透明溶液中，该溶液收集在保存在冰上的新试管中。然后使用调色板执行第二个步骤，重复涡旋、煮沸和离心。

将来自两次裂解的 snat 混合，以便使用冰川沉淀、含有酸性底气、三酸和 DTT 的缓冲液进行沉淀。然后将样品在零下 20 °C 下储存 16 小时以保留蛋白质。沉淀蛋白位于试管底部以改善沉淀。

将试管高速离心 45 分钟。现在，口感清晰可见。可以使用 5 毫升管垫丢弃上清液。

然后通过加入 25 毫升含有丙酮和 DTT 的冰川洗涤缓冲液去除 TCA。然后彻底而有力地摇晃它。然后执行新的离心步骤。

蛋白质上颚现在是浮动的，因此应该付出紧张来消除 snat。进行第二个洗涤步骤，加入洗涤、缓冲、振荡和离心。去除 SUP 试剂，并使用速袋干燥样品。

当样品干燥时，蛋白质呈粉末状稠度。去存储。应从试管中收集样品蛋白，以减少塑料的静电干扰。

使用静电手枪，并使用金属刮刀收集蛋白粉。然后将蛋白质直接悬浮在标记缓冲液中。用于 2D 冲刺 30 分钟，每分钟 800 克。

足以溶解。蛋白质，然后再进行昂贵的 2D 破折号标记。可以看出，在 SDS 一维凝胶上测试蛋白质质量。

泳道边缘没有明显的拖尾表明样品质量良好。