Name: 嗜中性粒细胞胞外的陷阱:如何生成和可视化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-24T17:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 17 s
Description: 学习从人全血中分离嗜中性粒细胞并诱导其形成胞外陷阱（NETs）的方法，利用密度梯度离心技术进行细胞纯化，通过免疫荧光和扫描电子显微镜观察NETs结构，为研究先天免疫防御机制提供关键技术。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. 从人血液中分离中性粒细胞
使用约 24 ml 含 EDTA 或肝素（10 U/ml）作为抗凝剂的人血。
<ol>
 <li>在15 ml Falcon离心管中加入6 ml Histopaque 1119，然后小心地将5至7 ml全血覆盖在上层。</li>
 <li>以800 × g离心20分钟，不启用刹车。</li>
 <li>吸除并弃去上层淡黄色透明液体，将含有粒细胞的下层红色部分转移至新的Falcon离心管中。</li>
 <li>用PBS充满Falcon离心管洗涤细胞，并以300 × g离心10分钟。</li>
 <li>同时，通过将18 ml Percoll与2 ml 10× PBS混合制备100% Percoll溶液。再用1× PBS配制4 ml的85%、80%、75%、70%和65% Percoll溶液。</li>
 <li>准备两个Falcon离心管，按浓度递减顺序依次叠加每种浓度的Percoll溶液各2 ml，形成Percoll梯度。</li>
 <li>离心后弃去上清液，合并沉淀物，并将沉淀的细胞重悬于4 ml PBS中。</li>
 <li>小心地将2 ml重悬液分别铺加到每个梯度上。</li>
 <li>以800 × g离心20分钟，不启用刹车。</li>
 <li>离心后去除上层及大部分含PBMC的65%层，收集白色中间界面至85%层之间的部分，转移至新的Falcon离心管中。</li>
 <li>用PBS充满Falcon离心管洗涤细胞，并以300 × g离心10分钟。</li>
 <li>弃去上清液，将沉淀的细胞（通常&gt;95%为PMN）重悬于2 ml PBS中。</li>
 <li>使用血细胞计数板对细胞进行计数。</li>
</ol>
2. 激活中性粒细胞
<ol>
 <li>在每个孔中放入一个无菌的13 mm圆形玻璃盖玻片（#1,5），以准备24孔细胞培养板。</li>
 <li>每孔加入500 μl RPMI（含2%人血清白蛋白）并接种2 × 105个细胞，在37°C的CO2培养箱中孵育1小时。</li>
 <li>同时，在RPMI中配制600 nM PMA溶液，每孔加入100 μl。在37°C的CO2培养箱中孵育15分钟至4小时。</li>
 <li>用PBS中溶解的4%（终浓度）多聚甲醛固定细胞。</li>
</ol>
PMA 作为阳性对照，迄今为止是最强效的诱导 NET 形成的试剂。此外，也可使用其他刺激物或与病原体共培养来诱导 NET 形成。
如果制备了额外的平行样本，可以在时间进程进行的同时检测NET形成的相应状态。若将非渗透性DNA染料（如Sytox Green（Invitrogen））加入未固定的细胞中，则仅能检测到细胞外DNA。由于Sytox的存在会在一定程度上影响新NET的形成，因此每个时间点都需要使用一个平行样本进行检测。
3. 通过免疫标记检测NET
中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）即使在固定后也非常脆弱，必须小心操作，否则大多数会在制备过程中丢失。
<ol>
 <li>使用弯头针从边缘轻轻挑起附着细胞的玻璃盖玻片，并用精细镊子夹住，将其从24孔培养板中小心取出。将盖玻片细胞面朝下置于一滴PBS上，可在覆盖于试管架上的Parafilm膜上进行。以同样方式用PBS洗涤3次，每次5分钟。</li>
 <li>将盖玻片置于一滴0.5% Triton X-100中，在室温下孵育1分钟以通透细胞。随后用PBS洗涤3次，每次1分钟。</li>
 <li>用Parafilm和湿润的纸巾制备一个湿盒。将盖玻片细胞面朝下置于一滴封闭缓冲液（5%驴血清）中，在37°C孵育30分钟。</li>
 <li>在封闭缓冲液中稀释一抗，例如ms anti Histon和rb anti Neutrophil Elastase。</li>
 <li>将盖玻片直接从封闭缓冲液转移至湿盒中的一滴一抗溶液上，37°C孵育1小时。</li>
 <li>用PBS洗涤3次，每次5分钟。</li>
 <li>在封闭缓冲液中稀释二抗，例如dk anti ms Cy2和dk anti rb Cy3。</li>
 <li>将盖玻片转移至湿盒中的一滴二抗溶液上，37°C孵育1小时。</li>
 <li>用PBS洗涤3次，每次5分钟。根据荧光显微镜的配置，可选择使用Hoechst 33342（1 μg/ml，需紫外激发）或Draq5（用于远红激发）对DNA染色5分钟，随后用去离子水洗涤两次。</li>
 <li>在载玻片上滴加20 μl Mowiol封片剂，将带有细胞的盖玻片细胞面朝下封片。细胞应位于盖玻片与载玻片之间。当盖玻片置于Mowiol液滴上时，会形成一层均匀厚度的薄层。通常无需按压样本。若使用非浸油物镜，样本即可用于观察；若使用浸油物镜进行显微分析，则需让样本干燥约1小时，直至Mowiol在样本边缘固化。</li>
</ol>
4. 扫描电镜（SEM）样品中中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的制备
<ol>
 <li>在24孔板中，用2,5%戊二醛对玻璃盖玻片上的细胞进行固定。</li>
 <li>从24孔培养板中取出带有细胞的玻璃盖玻片，倒置在水滴上，如此洗涤3次，每次5分钟。</li>
 <li>将盖玻片转移回含有0,5%四氧化锇的24孔细胞培养板中，孵育30分钟。</li>
 <li>从24孔培养板中取出带有细胞的玻璃盖玻片，倒置在水滴上，如此洗涤3次，每次5分钟。</li>
 <li>将盖玻片转移回含有1%单宁酸的24孔细胞培养板中，孵育30分钟。</li>
 <li>重复步骤4.2至4.4。</li>
 <li>按以下程序进行脱水（每步5分钟）：
 <ul>
 <li>30%乙醇</li>
 <li>50%乙醇</li>
 <li>70%乙醇</li>
 <li>80%乙醇</li>
 <li>90%乙醇</li>
 <li>100%乙醇</li>
 <li>100%乙醇</li>
 <li>100%乙醇</li>
 </ul>
	</li>
 <li>将盖玻片转移至临界点干燥器中，对样品进行干燥。</li>
 <li>使用薄膜蒸发仪在样品表面镀上5 nm的铂/碳层。</li>
</ol>
5. 代表性结果：
分离方法通常可获得未受刺激的、具有活力的中性粒细胞，纯度超过95%。在刺激后的不同时间点进行固定时，免疫染色方案可显示NETosis过程中形态学变化的序列：细胞变平、核叶消失、颗粒和细胞核完整性丧失，导致细胞核（即组蛋白）与颗粒（即中性粒细胞弹性蛋白酶）染色的重叠逐渐增加。本方案可作为分析病原体与中性粒细胞特异性相互作用的起点。通过扫描电子显微镜制样方案，可对该相互作用进行更详细的解析。
NET 荧光
经刺激的中性粒细胞样本，经NET组分染色（蓝色=DNA，红色=组蛋白，绿色=中性粒细胞弹性蛋白酶）。图像显示了NET的定位，以及DNA和组蛋白的核内定位和中性粒细胞弹性蛋白酶的颗粒样分布模式。
SEM PMA 刺激
扫描电子显微镜图像显示未受刺激和PMA刺激的中性粒细胞。刺激后，中性粒细胞变扁平并产生中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）。
SEM NETs 与志贺菌
志贺氏菌被中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）捕获的高分辨率扫描电镜图像。

<ol><li>Brinkmann, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+kill+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps kill bacteria.</a> Science. 303, 1532-1535 Forthcoming.</li>
<li>Urban, C. F., Reichard, U., Brinkmann, V., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+capture+and+kill+Candida+albicans+yeast+and+hyphal+forms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps capture and kill Candida albicans yeast and hyphal forms.</a> Cell Microbiol. 8, 668-676 (2006).</li>
<li>M, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leishmania+amazonensis+promastigotes+induce+and+are+killed+by+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Leishmania amazonensis promastigotes induce and are killed by neutrophil extracellular traps.</a> PNAS. 106, 6748-6753 (2009).</li>
<li>Buchanan, J. T., Simpson, A. J., Aziz, R. K., Liu, G. Y., Kristian, S. A., Kotb, M., Feramisco, J., Nizet, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNase+expression+allows+the+pathogen+group+A+Streptococcus+to+escape+killing+in+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">DNase expression allows the pathogen group A Streptococcus to escape killing in neutrophil extracellular traps.</a> Curr Biol. 14, 396-400 (2006).</li>
<li>Fuchs, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+cell+death+program+leads+to+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps.</a> J Cell Biol. 176, 231-241 (2007).</li>
<li>Brinkmann, V., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+suicide%3A+why+neutrophils+die+to+make+NETs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Beneficial suicide: why neutrophils die to make NETs.</a> Nat Rev Microbiol. 5, 577-582 (2007).</li>
<li>Aga, E., Katschinski, D. M., van Zandbergen, G., Laufs, H., Hansen, B., Muller, K., Solbach, W., Laskay, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+the+spontaneous+apoptosis+of+neutrophil+granulocytes+by+the+intracellular+parasite+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of the spontaneous apoptosis of neutrophil granulocytes by the intracellular parasite Leishmania major.</a> J Immunol. , 169-898 (2002).</li>
</ol>

所提供的实验方案可用于高纯度分离未经刺激的中性粒细胞，诱导中性粒细胞胞外陷阱（NET）的形成，并分析NETosis过程中的形态学变化。若在处理样本时格外小心，即避免剧烈的洗涤条件（以免导致大部分松散附着的NET丢失），则可比较不同刺激条件下（刺激时间、刺激物）NET的形成量。在此意义上，所提供的实验方案可作为建立更复杂分析方法的起点，例如：中性粒细胞与病原体的相互作用、刺激信号的时序、与其他免疫细胞的协同作用等研究场景。

中性粒细胞胞外诱捕网：如何产生并可视化观察

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

中性粒细胞是外周血中数量最多的白细胞群体。作为专业的吞噬细胞，当中性粒细胞的抗菌颗粒与吞噬体融合后，可将细菌吞噬并在细胞内将其杀灭。我们发现中性粒细胞还具有另一种杀灭微生物的方式：在激活后，它们会释放颗粒蛋白和染色质，二者共同形成可结合病原体的胞外纤维结构。这些新型结构，即中性粒细胞胞外诱捕网（Neutrophil Extracellular Traps, NETs），能够降解毒力因子并杀灭细菌1、真菌2和寄生虫3。NETs的结构骨架是DNA，且在DNase存在时会迅速降解。因此，表达DNase的细菌毒力更强4。通过结合透射电镜（TEM）、扫描电镜（SEM）、免疫荧光和活细胞成像技术的关联显微分析，我们发现，在受到刺激后，中性粒细胞的细胞核失去原有形态，常染色质与异染色质趋于均质化；随后，核膜和颗粒膜破裂，使NET的组分得以混合；最终，随着细胞膜破裂，NETs被释放到胞外。这种细胞死亡程序（NETosis）不同于凋亡和坏死，依赖于NADPH氧化酶产生的活性氧（Reactive Oxygen Species）5。
中性粒细胞胞外诱捕网在急性炎症部位大量存在。NETs 似乎是一种先天免疫反应形式，能够结合微生物，阻止其扩散，并确保局部高浓度的抗菌物质，以降解毒力因子并杀灭病原体，从而使中性粒细胞在其生命周期结束后仍能发挥抗菌功能。然而，越来越多的证据表明，NETs 也参与从自身免疫综合征到不孕症等多种疾病过程6。
我们描述了从人外周血中分离中性粒细胞7并刺激其形成中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的方法。同时，我们还提供了在光学显微镜和电子显微镜下观察NETs的实验方案。

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是一种重要的先天免疫机制，可抵御致病性细菌、真菌和寄生虫。本文描述了从人血液中分离中性粒细胞并激活其形成NETs的方法。我们还介绍了在光学显微镜和电子显微镜下观察NETs的制备技术。

中性粒细胞是外周血中数量最多的白细胞群体。作为专业的吞噬细胞，它们可吞噬细菌并将其杀灭……

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是一种新近发现的中性粒细胞清除病原体的机制，通过释放细胞质和颗粒蛋白以及染色质，形成胞外纤维结构以捕获病原体。在本视频中，粒细胞通过组织病理密度梯度离心法从人全血中分离获得，随后利用 Percoll 密度梯度从粒细胞制备物中进一步分离中性粒细胞。将接种在盖玻片上的细胞通过化学或生物刺激诱导其形成胞外诱捕网（nets），随后对细胞进行免疫标记处理或电镜制样，以实现对胞外诱捕网的可视化观察。大家好，我是来自马克斯·普朗克感染生物学研究所显微成像核心设施的Christian Gosman。今天我们将向您展示一种从人血液中纯化中性粒细胞并刺激其生成中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）的实验方法。接下来，我们将通过免疫荧光和扫描电子显微镜观察胞外陷阱结构。在本实验室中，我们采用该方法研究导致胞外陷阱形成的作用机制，并分析其抗菌特性。现在就开始吧。在超净工作台中开始本实验方案，将6毫升histo 1119分别加入四支15毫升Falcon管中。在每支离心管中的histo液面上小心地叠加5至7毫升全血，然后以约800 × g离心20分钟，确保离心结束后关闭刹车。离心完成后，小心地从离心机中取出离心管。试管中将从上到下呈现四个明显分层的层次：最上层为深红色，含有红细胞；其次为浅红色层，含有中性粒细胞及少量红细胞；再下层为灰白色至淡黄色层，含有白细胞和血清；最底层为澄清的黄色血清层。再次在超净工作台中操作。使用连接至真空系统的吸管仔细吸除上层黄色液体。然后用移液器将每根试管中含粒细胞的红色层转移至新的离心管中。接下来，用 PBS 填充试管以洗涤粒细胞。然后在细胞旋转时，以约 300 ×g 的离心力离心 10 分钟，使细胞沉淀。通过将 18 毫升 per co 与 2 毫升 10 倍浓度 PBS 混合，配制 100% per coll 溶液。然后使用100% Percoll溶液和1× PBS分别配制65%、70%、75%、80%和85%的Percoll溶液各4 mL。用这些溶液通过将每种溶液各2 mL小心地分层加入两支离心管中，来制备Percoll梯度。首先向每支离心管中加入2 mL的85%溶液。然后在85% Percoll液上方，小心地加入2 mL的80% Percoll溶液。继续按浓度递减的顺序逐层加入各溶液，每种溶液各2 mL，直至将65%的溶液加在最上层。在生物安全柜中从离心管中取出沉淀的白细胞。弃去上清液，将细胞重悬于一毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中。随后将重悬的细胞转移至一个新的离心管中。小心地将两毫升重悬的粒细胞分层加至每管 Percoll 梯度液上。然后以约800 × g离心20分钟，确保离心结束后关闭刹车。由于细胞密度最高，界面应清晰可见。弃去上层及大部分65%层，其中含有外周血单个核细胞（PBMCs）。收集每条梯度中的65%~70%界面层，并连同70%~75%及80%~85%界面层一同收集，转移至新的无菌Falcon管中。用PBS充满试管以洗涤细胞，随后在约300 × g条件下离心10分钟，使细胞沉淀。弃去上清液，将沉淀的多形核白细胞（PMNs）重悬于2毫升PBS中。此时，制备物中95%或更多的细胞将是运动神经元。使用血细胞计数板确定细胞数量，然后将500微升RPMI中的200,000个细胞接种到置于培养板中的无菌圆形盖玻片上，培养板孔径为15毫米。在37摄氏度、5% CO2的培养箱中孵育1小时，使细胞贴附于盖玻片。加入 100 微升含有目标刺激物的 RPMI 培养基。对于时间进程实验，需按刺激时间从长到短的顺序依次加入刺激物，以对应各个时间点。务必通过在 RPMI 中加入 600 纳摩尔的 PMA 制备阳性对照。同时，针对每种条件或时间点，通过仅加入RPMI制备阴性对照，并在37°C的CO2培养箱中孵育最多4小时。在刺激过程中，可使用明场显微镜监测NETs的形成。刺激后不久，细胞核形态发生显著改变，失去原有的叶状结构并变圆，随后在预定时间点向每孔加入600 μL室温的8%多聚甲醛溶液。为了使终浓度达到4%，进行免疫标记时孵育两到四小时。将一张多聚甲醛板放置在具有三排八个、直径约15毫米孔洞的试管架上。为形成反应孔，用PBS填充各孔。使用弯头针从培养板的戊二醛上轻轻挑起每张盖玻片，然后用镊子夹住盖玻片，将其倒置在戊二醛表面一滴 PBS 液滴上。此时中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）极为脆弱，操作过程中需格外小心，以避免细胞丢失。五分钟后，将盖玻片转移至新的 PBS 滴中，重复洗涤一次。共洗涤三次。接着，将盖玻片转移至一滴室温的 0.5% Triton X-100 中，孵育一分钟，以通透细胞。随后，在每次洗涤后用 PBS 洗涤三次，每次一分钟。按照随附的书面方案进行染色。通过将盖玻片倒置在对苯二甲醛上完成每次孵育和洗涤步骤。细胞染色完成后，取20微升MO滴加到载玻片上，将盖玻片细胞面朝下覆盖在液滴上，使细胞位于盖玻片与载玻片之间。一小时后，MOY应已凝固，细胞即可用于显微分析。使用浸没式物镜时，需在化学通风橱内将细胞制备用于扫描电子显微镜观察。在24孔板中，用含2.5%戊二醛的PBS溶液固定玻片上的细胞30分钟。孵育期间，将一个带有约15毫米直径孔洞的三排八孔聚四氟乙烯板置于试管顶部。以形成孔。用蒸馏水填充各孔。使用弯针从戊二醛溶液中轻轻挑起每一片盖玻片。然后使用镊子夹住盖玻片，将其转移至Paraform上的蒸馏水滴中，通过将盖玻片依次转移到Paraform上的一系列蒸馏水滴中进行清洗。重复此步骤共三次，每次五分钟。随后将盖玻片转移回细胞培养板的孔中，孔内含有溶于蒸馏水的0.5%四氧化锇，于室温孵育30分钟。从培养板中取出盖玻片，按前述方法用蒸馏水清洗三次。然后将盖玻片放回24孔板中，每孔加入0.5毫升1%单宁酸，孵育30分钟。接着用缓冲液洗涤盖玻片，每次5分钟，共洗三次。随后用四氧化锇再次固定，并重复洗涤步骤。接着，盖上试管。用一块新的对苯二甲醛覆盖，然后将细胞依次在以下乙醇溶液中孵育，每次5分钟：30%、50%、70%、80%、91%、100%。最后，再用100%乙醇处理一次。将金属架浸入盛满乙醇的标本舟中，迅速将盖玻片放入金属架内，确保标本不会干燥。然后将样品舟转移至已冷却的临界点干燥仪（CPD）中。向CPD的腔室内注入液态CO2。保持进液阀完全打开以维持液面高度，一旦在腔室底部观察到CO2相下方出现乙醇相，立即打开底部的排液阀。为了去除大部分乙醇。让腔室冲洗约30分钟。冲洗结束后，关闭进气阀，并将液面降至刚好低于舟的顶部。将热水通入临界点干燥仪（CPD）的夹套中。当温度达到36至38摄氏度、压力上升至每平方英寸1,200磅时，液态与气态之间的分界线将消失，样品即已处于临界点以上。一旦达到临界点，需在五分钟内缓慢释放气体。为避免冷凝，温度应保持在约 40 摄氏度。在此期间，打开门并取出舟皿。确认脱水溶剂已完全蒸发。将盖玻片正面朝上粘贴到铝制样品台的粘合剂上，并转移至高分辨率镀膜系统中。将镀膜筒抽真空至2 × 10⁻⁵毫巴。然后将仪器参数设定为1.8千伏和70毫安，使用石英晶体测厚仪监测铂碳镀层的厚度，直至镀层达到5纳米。打开放置高分辨率涂布系统的涂布气缸的通气阀。然后使用镊子从卷筒上取下样品。将扫描电子显微镜（SEM）腔室恢复至常压。打开门。然后将样品插入样品台，并抽真空腔室。用于扫描电镜分析。在刺激后的不同时间点固定样本，可通过免疫荧光显微镜观察NETosis过程中的形态学变化。在本图中，DNA显示为蓝色组蛋白，DNA复合物显示为红色，中性粒细胞弹性蛋白酶也显示为红色。在NETosis的第一阶段，颗粒标记物呈绿色，仅位于浓缩细胞核的核周区域。随后，当染色质进一步去浓缩时，大部分细胞核被去浓缩的网状结构染色，染色呈现均一性。该组图详细展示了 NETosis 过程中发生的细胞核与颗粒染色的重叠现象。此扫描电子显微图像显示，在经 Ella 细菌刺激后，未受刺激的中性粒细胞变得扁平，并产生中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）。此处，一种凝胶细菌被诱捕网捕获。细菌等微生物会被网状结构中的酶固定并杀死。我们刚刚向您展示了如何从人血中分离中性粒细胞，并对其进行刺激以诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成。随后可通过免疫荧光或扫描电子显微镜对这些结构进行进一步分析。进行此操作时，重要的是要记住，即使经过固定，胞外诱捕网仍非常脆弱。为了尽量减少网状结构的丢失，我们将含有刺激后中性粒细胞的盖玻片从孔板孔腔中取出，并在缓冲液滴的液面进行大部分操作。即便如此，仍需轻柔缓慢地移动样本。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利成功。

neutrophil-extracellular-traps-how-to-generate-and-visualize-them

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

嗜中性粒细胞胞外的陷阱:如何生成和可视化

本视频展示了中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的荧光染色，NETs 是中性粒细胞释放的胞外 DNA 成分。该技术能够实现癌细胞与 NETs...

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的荧光显微镜观察：一种用于观察癌细胞与NETs之间黏附相互作用的技术

一种体外生成人中性粒细胞胞外诱捕网的技术

本视频展示了利用含有抗中性粒细胞胞质抗体的患者血清，在预标记的中性粒细胞中诱导并可视化中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的方法。此外，通过使用不可穿透细胞膜的DNA染料结合荧光显微镜，可实现对NETs的可视化观察。...

预标记中性粒细胞中中性粒细胞胞外诱捕网的诱导与可视化

巨噬细胞胞外诱捕网是一种新近描述的结构。本文将重点介绍共聚焦显微镜技术及其可视化方法 体外 和 体内...

使用共聚焦显微镜观察巨噬细胞外陷阱

本文介绍了一种方法，即从术后腹腔灌洗液中分离的人类低密度中性粒细胞（LDN）能够大量产生中性粒细胞胞外诱捕网（NETs），并有效捕获随后生长的游离肿瘤细胞。...

由腹腔灌洗液中获取的低密度中性粒细胞产生的中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤细胞生长与黏附

本文介绍了一种生成中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的实验方案，以及NETQUANT的操作方法；NETQUANT是一种用于定量免疫荧光图像中NETs的全自动软件工具。...

基于图像的中性粒细胞胞外诱捕网自动化定量分析：采用 NETQUANT 方法

本方案描述了一种高灵敏度、高通量的中性粒细胞胞外诱捕网（NET）检测方法，可通过免疫荧光三维共聚焦显微镜对离体NET的形成进行半自动定量分析。该方案可用于评估不同刺激条件下NET的形成与降解过程，并可用于研究潜在的靶向NET治疗策略。...

一种用于评估和定量中性粒细胞胞外诱捕网形成的高通量检测方法

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是由活化的中性粒细胞释放的三维结构。近年来的研究已明确，NETs 参与多种疾病的病理过程。在组织中检测 NETs 可能具有诊断价值，因此需要标准化的标记 NET...

石蜡包埋组织中人和小鼠中性粒细胞胞外诱捕网的免疫荧光标记

本文介绍了一种诱导与分析的方法方案 体外...

由微生物和化学刺激物诱导的中性粒细胞胞外诱捕网的形态学与成分分析

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）与多种疾病相关，通常使用免疫荧光法对其进行可视化观察。然而，目前存在多种染色方案，且多数情况下仅针对单一类型的组织进行检测。本文中，我们建立了一种适用于小鼠和人类组织中NETs染色的通用方案。...

人和小鼠组织中中性粒细胞胞外诱捕网的免疫荧光成像

我们介绍一种利用活细胞分析系统结合膜通透性依赖性双染料方法的自动化高通量中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）定量技术。...

实时高通量技术定量人中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网的形成

学习从人全血中分离嗜中性粒细胞并诱导其形成胞外陷阱（NETs）的方法，利用密度梯度离心技术进行细胞纯化，通过免疫荧光和扫描电子显微镜观察NETs结构，为研究先天免疫防御机制提供关键技术。

中性粒细胞胞外诱捕网：如何产生并可视化观察

探索更多视频