2010年1月29日
血凝是抗体结合到红细胞的凝集形成。红血细胞都是现成的,结果很容易用肉眼观察。本视频演示了在血凝实验所涉及的步骤,解释的结果,并确定滴度。
使用血凝素测定法测定血清的反应性和滴度。麸质国家是可溶性抗体和颗粒抗原之间发生的反应。这些可以包括细胞或携带分子。
载体表面的表位允许抗体将载体结合并交联在一起,从而形成称为抗原抗体复合物的复合物晶格。血样凝集是凝集的一种特殊形式,其中抗体与红细胞结合,红细胞充当颗粒抗原。红细胞是有用的靶标,因为它们都很容易获得,而且结果很容易用肉眼看到。
将血清样品连续稀释,然后置于 96 孔 ubo 板中。然后加入红细胞 Riva 细胞的悬浮液。当高浓度抗体与红细胞结合时,会形成一个大晶格。
当这个晶格在重力作用下沉降时,它符合 ubo 板的形状。从上方观察时,可以看到一大片红细胞。这是阳性血凝素反应。
当抗体水平低时,不会形成晶格,红细胞符合UBO板的形状,并在碱基集中形成一个小颗粒。这是一种阴性的下摆凝集反应。此图显示了积极的反应。
细胞在沉降时形成晶格,它们符合 U 底板的形状。在左侧和右侧,我们看到俯视图,可以看到一大片红细胞。如果存在中等量的抗体,则会观察到一些字母的形成。
血带凝集还允许测试不同血清样品对已知抗原的反应性。血清样品的滴度也可以测定。滴度是观察到阳性反应的最后一次稀释液。
通常,血清样品中的抗体浓度越高,滴度越高。该图显示了阴性 hem 凝集反应。抗体不足,无法交联红细胞。
当细胞在重力作用下沉降时,它们会沿着孔的侧面滑下,在底部形成一个紧密的颗粒。右图显示了从上方观察时的红细胞。对于本实验,您需要 1 个 96 孔 U 底板。
必须使用 U 底板,因为平底板不允许细胞沉淀成颗粒,因此无法解释。能够将 50 微升测试血清、1% Riva 细胞悬液和 verone 缓冲盐水的一次性溶液输送到行的每个孔中。A 对 12,输送 50 μL roal 缓冲盐水。
这用作您的稀释剂。现在将 50 微升血清放入 A 1 井中。这是您的第一次 1/2 稀释。
使用 perpet,确保血清样品充分混合。混合后,从 A 1 孔中取出 50 μL,并转移到 A 2 孔中。这是您的第二次 1 分 1 稀释液,稀释度为 4 倍。
使用孔 3 至 11 继续此稀释系列。不要将任何血清放入 12 中,因为这是您的 roal 缓冲液盐水阴性对照。现在取 1% Riva 细胞悬浮液,将其彻底混合,并将 50 微升转移到 A 12 孔中。
添加细胞后,盖上板并轻轻敲击板以确保样品和细胞混合。现在在 37 度下孵育 60 分钟。加湿培养箱是合适的。
在 60 分钟的孵育期内,将发生抗原抗体相互作用,细胞将开始沉降。您正在查看的视频片段是整个 60 分钟期间的延时摄影。这是 5 到 10 号井的特写。
我们已经检查了,嗯,12,这是您在其中的 VBS 控制。嗯,细胞已经形成了一个紧密的颗粒,表明该检测已经正常工作。井 5 和 6 是下摆凝集阳性的例子。
嗯,7 是中间凝集结果的一个例子,而 8 、 9 和 10 孔的下摆凝集结果呈阴性。根据此结果,将根据孔 7 的稀释度确定滴定度,因为这是观察到阳性反应的最后一口井。
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本文演示了血凝抑制试验,这是一种用于检测和定量结合红细胞的抗体的技术。该方法包括对血清样本进行系列稀释,然后在U型底微量滴定板中与红细胞混合,通过肉眼观察凝集模式来确定抗体的反应性和滴度。该试验快速、简便,可直接观察结果。
血凝试验提供了一种快速、可直观读取结果的方法,用于量化抗体反应性及滴度,支持生物制药领域早期靶点验证和检测方法开发&D. 区分阳性、阴性和中度凝集反应的能力有助于开展可靠的假设检验,并为项目组合的优先级决策提供依据。该检测方法操作简便且可扩展性强,是标准化发现研究与转化研究中血清学工作流程的有力工具。
血凝试验通过实现早期假设验证、检测方法标准化以及基于抗体项目的定量分析,融入了从发现到临床前研究的连续过程。