塑料嵌入和非洲爪蟾胚胎切片

塑料型材保持在薄薄的组织，可以用荧光抗体免疫染色的部分真正的组织形态，这种方法比较有用的，比许多类型的组织石蜡包埋或冰冻切片。染色，塑料包埋，切片的方法是在这个视频演示。

您好，我叫 Sochi ota。我是加州大学发育与细胞生物学系 Ken Cho 博士实验室的博士后科学家。Irv I 今天，我将向您展示非洲爪蟾胚胎简单切片的准备工作。

该程序包括用针对目标分子的抗体对晚期气态青蛙胚胎染色进行二分，渗入塑料中并制成 5 微米相同的塑料切片。该程序可用于研究免疫荧光免疫组织化学或具有非常高分辨率图像的原位杂交。好的，这些是我用于 10 个以上胚胎的胚胎塑料切片的方便小工具。

这是一个带有 delta 尖端的金属镊子，这个是第一名，可用于在塑料中定位胚胎。第二，它可以与这种油漆刷一起使用，将胚胎从切片机转移到安装表面。这是一个硅橡胶绝缘体，我把它放在滑梯的表面，它会产生水拉力，我可以在可以安装塑料切片胚胎切片的地方。

现在，我将展示如何将胚胎、固定胚胎一分为二，以进行 nstitute 杂交或免疫荧光检测等检测。为了将胚胎切成两半，我使用了这种非常薄的沙漠网格，你可以在杂货店买到。我认为是的，有固定胚胎固定细胞 3.7%正式高过夜。

这就是，你如何修复它取决于目的。这在一夜之间得到了解决。为了切口杂交，你可以进行过夜固定，但对于免疫荧光检测，你可以检测胚胎内部的蛋白质，我不建议固定太久。

我宁愿只做 3.7% 高度固定两个小时，以尽量减少对蛋白质亚细胞定位的影响，并避免过度固定，以便在检测步骤中让抗体很好地渗透。好的，现在我通过喷射壁切割左侧和右侧来解剖这个胚胎。所以现在我看到这有第 11 期胚胎，其中 PO 从背侧一直到腹侧，但 bi 是一个胚胎。

让我们来看看这个右手部分。您可以在背侧和腹侧看到 blast po，但背侧很明显，因为与腹侧相比，这种内陷显然深入到胚胎的最深处。所以这是一篇很好的文章，很好的一分为二的作品，可以研究背侧和腹侧。

在胚胎内部，这个被解剖的胚胎，我将使用免疫荧光检测胚胎内部表达的蛋白质。对于免疫荧光或免疫组织化学，您可以使用抗体特异性抗体进行检测。但问题是抗体不能很好地渗透到胚胎内部。

因此，如果你使用整个安装、整个安装的胚胎，你就无法知道。您无法在胚胎中研究蛋白质的表达模式。但是使用这个一分为二的胚胎，您可以在胚胎深处研究细胞中的表达模式。

啊，染色的胚胎已经固定在 3.7% 的甲醛中，在乙醇中脱水并渗入塑料中，称为 techno 7、100。而这个套件包含三个部分，即这个主要部分液体和这个粉末，它被称为固化剂一。这种液体称为硬化剂二。

首先，我将这个主要部分和固化剂 1 与 100 比 1 reio 混合，这将得到这种渗透混合物。这就是，那是一种液体，我在这个胚胎中渗透了它。而且它仍然是液体，所以它还不会变硬。

这就是那些胚胎样品在这种浸润混合物中放置过夜，以确保胚胎样品完全汇总在这种塑料中。现在我用移液管取这个样品胚胎，并转移到薄壁 0.5 MPCL 管中，我将其用作包埋模具。然后我从这个胚胎中取出多余的液体。

现在这个胚胎，这个胚胎已经准备好嵌入硬化的塑料中。为了制造硬化塑料，您将这种渗透混合物与这种硬化管以 15 比 1 的比例混合。因此，例如，如果我取 750 微升这种渗透混合物来支撑管，那么我也应该添加 50 微升这种固化剂，以便在添加后引发塑料的聚合，哎呀，盖上盖子，然后像这样轻轻混合。

而且你不应该做涡旋，因为氧是聚合反应的抑制剂。向胚胎中加入大约 250 微升这种混合物。而这个聚合步骤需要将近四个小时，你根本不用着急。

先加入这种聚合塑料后，您可以上下管道使其制成，使胚胎漂浮在塑料中。现在我用这个金属镊子推动胚胎以定向它，使胚胎的切割表面到达这个包埋模具的底部。然后盖上盖子，因为氧气是固化反应的抑制剂，放置 4 小时以允许发生化学反应。

之后，这是一个已经被抽成样本的 HUD。你在这个样品上涂上某种胶水，以确保这个塑料硬件不会从这个模具中出来。这是另一种塑料，可为此目的用作胶水，称为 techno 30 40。

我将这种粉末和液体与 2、2、1 混合，这里是 0.6 克这种粉末。所以我要加入 300 微升这种液体，然后快速混合，这种塑料很快就会变硬。所以这是一个部分，你必须稍微用力一点，然后把它倒在这个已经听到的样本中。

这已经足够好了。合上盖子。我看起来像这样。

这大约需要 30 到 60 分钟才会变得困难。而这正是准备采取行动的。首先，我用纸板刀切开模具的尖端，从模具上剥下这个尖端部分。

所以现在这个嵌入的胚胎暴露了。而且我把这个盖子剪掉了，因为我不需要它。现在我拿这根 tain Roy 针，我的意思是不是针 tay 刀片，它比用于 parin 切片的普通染色刀片更硬。

我把它简单地浸入 Xin 中以使其干净。将此项设置为，将此项设置为刀架并擦掉多余的 zaine。有时我也会用 zaine 清洁这个区域，因为这个区域的清洁绝对重要。

现在它已准备好进行切片。在开始切片之前，我设置了安装室。所以这是玻片。

最重要的是，我把这种硅橡胶放进去，把农民推到底，这样就不会有任何泄漏。把它放在滑梯加热器上，倒入这种干净的药水来制作我们的游泳池。并投入尽可能多的水，直到你得到洪水表面的水面。

这很重要，因为这个洪水表面使水的表面张力分布均匀，这对于使截面均匀延伸很重要。现在我正在切片，但在切片之前我戴上了这个面罩，因为每一块切片都非常轻，如此轻盈，我的乳房可以从舞台上吹走。所以我戴着这个面具。

现在开始切片。在舞台上得到一些截面作品后，你用画笔拿着它，慢慢地在这个山室的顶部移动，敲击这个画笔，使这些作品在重力作用下进入水中。一旦它们降落在水面上，它们就会伸展在水面上形成一个圆形的碎片。

一夜干燥后光线怎么样。现在它看起来像这样和这个。现在样品已准备好与 DPI 接触以获取核 DNA。

然后你可以在显微镜下研究。今天，我向您展示了使用晚期气期青蛙胚胎的塑料切片制备。该程序对于研究蛋白质的亚细胞或定位非常有用，这是无法使用 paren 嵌入技术研究的，通常甚至对于残留杂交也是如此。

这种塑料切片还可以为您提供甚至残留杂交，该程序可以为您提供比 paren 或冷冻切片样品更高级别的图像。