Name: 制备果蝇 S2细胞，光学显微镜 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 学习制备果蝇S2细胞用于光学显微镜观察的完整实验流程。本方法通过lectin包被促进细胞贴壁与铺展，结合固定和免疫染色技术，帮助研究人员清晰观察细胞结构并分析基因功能。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本工作部分得到了美国国家癌症研究所 P30 CA23074、美国癌症协会机构研究基金 74-001-31 以及亚利桑那大学胃肠道 SPORE（NCI/NIH CA9506O）的支持。

<ol><li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly%2C+dynamics%2C+and+positioning+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li>
<li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

对于细胞生物学领域而言，理想的实验体系应具备成本低廉、易于操作，并适用于多种技术方法的特点。Drosophila S2 细胞满足这些要求，因此已迅速成为越来越多细胞生物学实验室的首选体系。
我们简要介绍了制备S2细胞用于显微镜观察的方法。S2细胞的一个显著优点是其在正常空气环境和室温条件下生长良好，因此可在显微镜下长时间观察而无需特殊的维持条件。尽管在常规培养条件下，S2细胞通常呈一定程度的圆形且贴附较松散，但可通过诱导使其充分铺展，便于成像。将S2细胞培养在预先用刀豆蛋白A（concanavalin A）包被的玻璃底培养皿上，细胞会牢固贴附并在盖玻片上形成薄层，是极佳的显微观察样本。

<table><tbody><tr><td>S2 细胞</td><td>ATCC</td><td>CRL-1963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>S2 细胞</td><td>DGRC</td><td>货号 6</td><td>&lt;a href=&quot;https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>S2 细胞</td><td>Invitrogen</td><td>R690-07</td><td></td></tr><tr><td>Sf900 II</td><td>Invitrogen</td><td>10902-096</td><td>无血清培养基</td></tr><tr><td>HyClone SFX-Insect</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>SH30278</td><td>无血清培养基</td></tr><tr><td>Insect-Xpress</td><td>BioWhittaker</td><td>12-730</td><td>无血清培养基</td></tr><tr><td>Schneider&amp;rsquo;s S2 培养基</td><td>Invitrogen</td><td>11720-034</td><td>加入 10%（终浓度）热灭活胎牛血清以配制完全培养基。</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Invitrogen</td><td>10438026</td><td>热灭活</td></tr><tr><td>100 倍抗生素溶液</td><td>MP Biomedicals</td><td>91674049</td><td>含青霉素（10000 U/mL）、&lt;br/&gt;链霉素（10000 &amp;#x03BC;g/mL）和&lt;br/&gt;两性霉素 B（25 &amp;#x03BC;g/mL）</td></tr><tr><td>刀豆蛋白 A</td><td>MP Biomedicals</td><td>195283</td><td></td></tr><tr><td>甲醛</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714</td><td>32% 溶液</td></tr><tr><td>甲醇</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>9049</td><td>无水，ACS 级</td></tr><tr><td>分子筛</td><td>Acros Organics</td><td>19724</td><td>3A 型</td></tr></tbody></table>

drosophila s2 细胞用于光学显微镜观察的制备

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

理想的实验体系应具备成本低廉、易于维护、适用于多种技术手段的特点，并且拥有丰富的文献资料和基因组序列数据库支持。Drosophila S2 细胞系由离体培养的 20-24 小时龄胚胎发育而来1，具备上述所有特性。因此，S2 细胞非常适合用于细胞过程的研究，包括鉴定参与特定过程或机制的分子组分所对应的基因。S2 细胞之所以具有广泛应用价值，主要归因于其易于培养的特性、对双链 RNA（dsRNA）介导的 RNA 干扰（RNAi）具有高度敏感性，以及无论是活细胞还是固定细胞，均可方便地进行荧光显微镜观察。
S2 细胞可在多种培养基中生长，包括多种价格低廉、商业化供应、成分完全明确且无血清的培养基2。此外，S2 细胞在 21–24°C 下生长最佳且增殖迅速，并可在多种容器中进行培养。与哺乳动物细胞不同，S2 细胞不需要控制气体环境，仅在正常空气条件下即可良好生长，甚至可在密封的培养瓶中维持培养。
在S2细胞中，RNAi操作的简便性可与通过相差显微镜或荧光显微镜对固定或活细胞中实验诱导的表型进行便捷分析相辅相成。S2细胞在培养中以单层形式生长，但不表现出接触抑制。相反，在高密度培养时，细胞倾向于形成集落状生长。在低密度下，生长于玻璃或组织培养处理过的塑料表面的S2细胞呈圆形且贴附松散。然而，通过将细胞短暂培养在涂有凝集素刀豆球蛋白A（concanavalin A, ConA）3的表面上，可显著改善S2细胞的细胞形态学特征，使其充分铺展。此外，S2细胞还可通过稳定转染表达荧光标记的探针，以标记活细胞或固定细胞中特定的结构或细胞器。因此，对细胞进行显微分析的常规流程如下：首先，对S2细胞（可携带表达标记探针的转基因）进行RNAi处理，以消除目标蛋白；RNAi处理时间可根据不同蛋白的 turnover 动力学进行调整，并在目标蛋白对细胞存活至关重要时，尽量减少细胞损伤或死亡。接着，将处理后的细胞转移至预先涂有ConA的培养皿中，其中的盖玻片可促使细胞铺展并牢固贴附于玻璃表面。最后，研究人员可根据需要选择合适的显微镜模式对细胞进行成像。由于S2细胞在室温及正常大气条件下仍能保持良好活性，因此特别适用于需要长时间观察活细胞的研究。

Drosophila Schneider（S2）细胞是基因发现与功能分析中日益常用的研究体系。我们的目标是介绍一些使S2细胞成为越来越重要的实验体系的显微技术。

Drosophila S2 细胞用于光学显微镜观察的制备

理想的实验体系应价格低廉且易于维护，适用于多种技术方法，并有大量文献支持……

本实验的总体目标是描述用于光学显微镜观察的黑腹果蝇 S2 细胞的制备方法。首先需准备玻璃底培养皿，然后以凝集素 ConA 包被玻璃底部，以此完成细胞的制备。以促进S two细胞的贴附和铺展。该实验步骤的第三步是将培养基和S two细胞加入培养皿中。最后一步是固定培养皿中的S two细胞并进行免疫染色。最终，可以通过荧光显微镜分别对活的或固定的 S2 细胞进行观察，获得目标荧光四标记或免疫标记蛋白的定位结果。大家好，我是来自亚利桑那大学细胞生物学与解剖学系 Greg Rogers 实验室的 Joey Club。我是 John Nye，同样来自 Rogers 实验室。我也是 Dan Buster，来自 Greg Rogers 实验室。今天我们将向您展示一种用于制备果蝇 S2 细胞以进行光学显微镜观察的实验方法。我们在实验室中采用此方法，通过研究重要调控蛋白的缺失或过表达后中心体数量和结构的变化，来探讨黑腹果蝇（Drosophila）中中心体复制的调控机制。现在开始操作。我们使用标准的35毫米培养皿来制备玻璃底培养皿。这些底部为玻璃的培养皿可使细胞保持在与其常规培养条件非常相似的状态，同时允许通过显微镜级玻璃对活细胞进行观察。组装玻璃底培养皿时，使用带有厚壁的泡沫盒表面贴上胶带作为钻孔平台。将直径35毫米培养皿的下半部分放置在钻孔平台上，使培养皿底部紧贴泡沫盒表面，同时牢固握住培养皿两侧，使用手钻配合直径3/4英寸的铲形钻头在培养皿上钻孔。在钻完所有培养皿后，使用粗粒度、圆锥形的磨头钻头（其直径与铲形钻头相近）来打磨孔的外缘，使其光滑。将电钻侧放，使钻头伸出工作台边缘。用某种沉重但柔软的物体压住电钻以固定其位置，例如一个装有10千克沙子的重型塑料袋。使用锁定按钮使钻头持续运转。通过手持培养皿并将其边缘与研磨钻头接触，打磨新钻孔的粗糙边缘，使皿口光滑。待所有孔的外缘均打磨光滑后，将培养皿底部放入一个大烧杯中，用蒸馏水反复冲洗数次。这将去除塑料或泡沫塑料的细小碎屑，这些碎屑之后会漂浮起来。将培养皿底部摊开晾干。当培养皿干燥后，准备 Sard 180 4 胶水。按照10比1的质量比例混合树脂和固化剂，并充分搅拌。在每个培养皿外表面的钻孔周围涂抹一小圈胶水。然后将盖玻片覆盖在孔上，使其与胶水接触。盖玻片的尺寸必须比培养皿中的孔大至少约一毫米，且小于培养皿的直径。盖玻片应平整均匀地贴合在培养皿上。现在将培养皿放置一旁备用。底部朝上，晾至干燥。此过程在室温下可能需要一天或更长时间，但可通过将培养皿置于温暖的培养箱中以加快干燥速度。培养皿干燥后，可用凝集素ConA或Con A进行包被。我们使用Con A，是因为将S2细胞接种到Con A包被的盖玻片上后，细胞会充分铺展，成为显微镜观察的优良样本。为了包被培养皿，取一个玻璃底培养皿，将10微升包被溶液滴加到玻璃的上表面。待其干燥后

preparation-of-drosophila-s2-cells-for-light-microscopy

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

制备果蝇 S2细胞，光学显微镜

本文介绍了一种简单、经济且有效的果蝇胚胎活体成像样品制备方法。我们的实验方案可维持湿度并实现气体交换，且不会压迫果蝇胚胎。该方法适用于在体视显微镜或直立型复式显微镜下对表达GFP的果蝇胚胎进行活体成像分析。...

样品的制备 黑腹果蝇 采用悬滴法进行活体成像的胚胎制备

我们描述了一种用于晚期Drosophila胚胎的固定、包埋、切片及成像方法，以进行胚胎心脏管的透射电子显微镜观察。该技术可实现对心脏管腔以及衬于管腔内壁的基底膜的可视化观察。...

用于胚胎电子显微镜观察的样本制备 黑腹果蝇 胚胎心脏管

本方案描述了三种黑腹果蝇（Drosophila）样品制备方法：1）成年果蝇脑组织解剖，2）成年果蝇视网膜解剖，以及3）发育中眼盘-脑复合体解剖。重点介绍了适用于活体成像的特殊制备技术和条件，尽管所有样品制备方法也可用于固定组织的免疫组织化学染色。...

发育期与成年个体的制备 果蝇 用于活体成像的大脑与视网膜

我们描述了制备不同发育阶段的 黑腹果蝇...

整体胚胎神经系统的可视化 果蝇 胚胎

本文介绍了一种用于制备成年Drosophila（果蝇）眼睛以进行半薄切片和光学显微镜分析的标准方法。该方案可用于眼缺陷的宏观形态学分析，或通过文中所述的相应调整，用于确定特定眼细胞类型中基因的遗传需求（例如光感受器细胞的克隆分析），也可用于电镜分析。...

成年个体的制备 黑腹果蝇 用于薄切片与显微分析的眼组织

黑腹果蝇 S2细胞和培养神经元是成像研究马达驱动的细胞器运输的理想体系...

培养细胞中的细胞器运输 果蝇 细胞：S2细胞系和原代神经元

本研究详细介绍了一种标准的免疫组织化学方法，用于观察晚期16阶段黑腹果蝇（Drosophila...

在 Drosophila 胚胎运动神经元轴突投射模式的可视化

扫描电子显微镜（SEM）分析是辅助物种鉴定或表型区分的有效方法。本实验方案描述了检测三种代表性生物体特定形态学细节的方法，可广泛适用于多种生物体及组织类型的特征观察。...

用于扫描电子显微镜（SEM）形态学分析的原核与真核生物化学干燥制备

本文介绍了一种利用基于平板的高内涵成像系统，对多个果蝇（Drosophila）胚胎在胚胎发育过程中进行显微注射并同时成像的实验方案。...

利用自动化高内涵分析仪进行活细胞显微成像的果蝇胚胎制备与显微注射

光片荧光显微镜是发育生物学中最有价值的工具。在比较研究中，一个主要问题是环境变异。我们的实验方案描述了一种可同时对多个样本进行活体成像的实验框架，从而主动解决了这一问题。...

基于样品腔的光片荧光显微镜中对多个昆虫胚胎进行同步活体成像

本文介绍了一种在早期Drosophila胚胎中实施膨胀显微技术的实验方案，旨在利用常规激光扫描共聚焦显微镜实现超分辨率成像。...

使用扩展显微镜技术对整体安装的 Drosophila 胚胎进行物理放大以实现超分辨率成像

学习制备果蝇S2细胞用于光学显微镜观察的完整实验流程。本方法通过lectin包被促进细胞贴壁与铺展，结合固定和免疫染色技术，帮助研究人员清晰观察细胞结构并分析基因功能。

Drosophila S2 细胞用于光学显微镜观察的制备

探索更多视频