Name: 斑马鱼胚胎眼组织显微切割的 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-27T23:34:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 学习斑马鱼胚胎眼组织显微切割技术，用于分离视网膜和视网膜色素上皮。该方法利用精细镊子和标准实验室设备，可在发育生物学和神经科学研究中保持组织完整性，适用于RNA表达分析。

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本工作由普渡大学生物科学系的启动基金资助。

第1部分：显微解剖前的准备工作 
<ol>
	<li>溶液
	<ol class="lalpha">
		<li>E3 培养基4（5 mM NaCl、0.17 mM KCl、0.33 mM CaCl2 和 0.33 mM MgSO4）。</li> 
		<li>Ringer 溶液1, 5（116 mM NaCl、2.9 mM KCl、1.8 mM CaCl2、5 mM HEPES，pH 7.2），经滤膜除菌。</li> 
		<li>5N NaOH。</li>
	</ol>
	</li> 
	<li>钨针的化学蚀刻
	<ol class="lalpha"> 
		<li>用黏土将盛有 5N NaOH 的小烧杯固定在培养皿中。</li> 
		<li>在烧杯侧壁固定一个回形针，使其与 NaOH 溶液接触。</li> 
		<li>将直流电源的负极连接至回形针，正极连接至一段短钨丝（约 2 cm）的一端。</li> 
		<li>用一小团黏土包裹钨丝的另一端，并将该端浸入 NaOH 溶液中。</li> 
		<li>将电压升至约 3 V，并上下移动钨丝，直至达到理想的蚀刻速率。通常在 10 分钟内可制得高质量的针尖。</li> 
		<li>暴露于溶液中的钨丝会逐渐变细。当黏土球脱落时，仍连接正极的一端将形成尖锐的针状结构。</li> 
		<li>用 Ringer 溶液或 E3 培养基冲洗针尖，以去除盐类沉积物。</li> 
		<li>用胶带或针头夹具将针固定在木质涂布棒上，以便操作。</li> 
	</ol>
	</li> 
	<li>培养皿
	<ol class="lalpha"> 
		<li>Falcon 60 × 15 mm 聚苯乙烯培养皿可直接用于视网膜显微解剖。</li>
		<li>若需解剖附有视网膜色素上皮（RPE）的视网膜，可在解剖前 30 分钟，于培养皿中的 Ringer 溶液内彻底碾碎两个胚胎，以消除表面黏附性。解剖前立即用新鲜 Ringer 溶液充分清洗培养皿。</li>
		</ol>
	</li>
	<li>胚胎收集与分期
	<ol class="lalpha">
		<li>成年斑马鱼的饲养方法如文献所述4, 5。</li>
		<li>在繁殖前一天晚上，将亲鱼成对放入静水繁殖缸中，并用隔板分隔。</li>
		<li>次日早晨开启室内光源后移除隔板，每隔半小时让亲鱼交配一次，每次交配持续 10 分钟。每次交配后重新将鱼分隔开。</li>
		<li>将每次交配获得的胚胎分别置于 E3 培养基中，在 28°C 条件下培养。</li>
		<li>根据已建立的标准1, 6，在受精后 10 至 12 小时（hpf）对胚胎进行分期，并在解剖前特定时间点再次确认发育阶段。</li>
	</ol>
	</li> 
</ol>
第二部分：解剖——脑组织取出与眼球暴露1
<ul>
	<li>本节所述操作步骤适用于视网膜解剖（第3A部分）和带视网膜色素上皮（RPE）的视网膜解剖（第3B部分）。</li>
	<li>所有精细解剖操作均使用Dumont镊子的尖端完成，并辅以另一把Dumont镊子固定组织位置；必要时可使用化学蚀刻钨针进行更精细的操作。</li>
	<li>所有精细解剖均在配备1X物镜或等效物镜的Olympus SZX16显微镜下，以约5–8倍放大倍数进行。</li>
	<li>将胚胎置于E3培养基中，并放置于显微镜旁的台式培养箱内，于28°C条件下孵育，以便在解剖过程中方便获取胚胎。</li>
	<li>显微镜载物台通过加热板维持在28°C，以尽量减少温度波动对基因表达的影响。</li>
</ul>
<ol>
	<li>将处于特定发育阶段的胚胎转移至 Falcon 60 × 15 mm 培养皿中的任氏液中，培养皿按第1部分#3所述方法预先准备。</li>
	<li>迅速将头部连同部分前躯干从身体上切下。</li>
	<li>用辅助镊子将该组织的后端固定在培养皿上。</li>
	<li>从额部前端开始，沿背侧切开头部。</li>
	<li>移除脑组织，使眼睛的内侧面暴露并朝上，以便后续操作。</li>
</ol>
 第3A部分：视网膜解剖1
 <ol> 
	<li>按照第2部分所述方法准备胚胎。</li>
	<li>用镊子尖端轻轻刷拭朝上眼球内侧暴露的视网膜色素上皮（RPE），直至看到视网膜出现一个小开口。</li>
	<li>继续刷拭并剥离，直到视网膜内侧几乎完全暴露。避免刮伤或刺破已暴露的视网膜。</li>
	<li>对于现在朝下贴附在培养板上的视网膜外侧RPE，以约45°角从培养板表面方向进行刷拭处理。</li>
	<li>对于较牢固附着于锯齿缘的RPE，可通过将已分离的RPE部分固定在培养板上以利于解剖操作，然后轻柔抬起视网膜。</li>
	<li>将视网膜在培养皿底部滚动，以清除残留的RPE。 
	<ol class="lalpha"> 
		<li>我们注意到，当胚胎被压碎后，这种特定的Falcon聚苯乙烯培养板对RPE具有约20分钟的优先黏附性。该特性可用于清除RPE残余物。然而，视网膜细胞也会在一定程度上黏附于培养板表面，可在高倍镜下仔细观察确认。操作时需在彻底清除RPE与保持视网膜完整性之间取得平衡。</li>
		<li>在滚动过程中，晶状体常会黏附于培养板并从视网膜上脱离。偶尔需要使用刻蚀钨针在晶状体表面做旋转动作以将其分离。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>这些操作可成功去除视网膜上的RPE，同时不破坏组织完整性。这可通过良好的整体形态学（图1B和B'）和组织学结果（图1B"）加以证实。特别是光感受器层与RPE之间的细胞外基质保存极为完好（图1B"，箭头；与完整胚胎的组织学结果相比，见图1A"）。</li>
</ol>
第3B部分：RPE附着的视网膜解剖3 
<ol>
	<li>按照第2部分所述方法准备胚胎。</li>
	<li>由助手用镊子将头部固定在培养皿中。从眼球后外侧轻轻提起眼球，并向内前侧滚动。
	<ol class="lalpha">
		<li>视网膜色素上皮（RPE）层外侧的拟脉络膜和巩膜组织与皮肤连接相对较紧，通过小心地将眼球向前侧滚动，可将其大部分剥离。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在暴露眼球外侧且眼球仍与皮肤相连时，使用钨针去除晶状体。</li>
	<li>这些操作可成功保留完整的RPE层及其与视网膜的连接。拟脉络膜和巩膜组织可被基本去除（图1C、C' 和 C"）。</li>
</ol>
第4部分：RNA实验用组织样本采集
<ol>
	<li>解剖所得样品可收集于RNase-free微量离心管中的TRIzol内，用于后续RNA表征分析，方法如前所述1。</li>
</ol>
代表性结果
<img src="/files/ftp_upload/2028/2028fig1.jpg" alt="胚胎连续发育；显微镜图像；细胞分化分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 图1. (A) 52小时（hpf）斑马鱼幼体头部的侧面图和(A')背侧图，解剖前状态。(A") 对应于(A)和(A')中幼体头部的组织学切片。(B) 54小时（hpf）解剖后视网膜的侧面图和(B')背侧图。从侧面和背侧观察，视网膜表面均保持完整。(B") 对应于(B)和(B')中解剖后视网膜的组织学切片。视网膜结构及视网膜层状结构均保持完整。特别地，光感受器层与视网膜色素上皮（RPE）之间的细胞外基质在解剖后的视网膜中（A"，箭头；B"，箭头）也得到了良好保存。(C) 52小时（hpf）附着RPE的解剖后视网膜的侧面图和(C')内侧图。RPE层完整且连续，组织学切片（C"）也证实了这一点。C'中的白色区域为视神经（箭头）。组织学分析中，组织样本经收集后用4%多聚甲醛固定，塑料包埋及切片操作按文献3所述方法进行。比例尺 = 50 μm。

<ol><li>Leung, Y. F., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+of+zebrafish+embryonic+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling of zebrafish embryonic retina.</a> Zebrafish. 2, 269-283 (2005).</li>
<li>Leung, Y. F., Ma, P., Link, B. A., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factorial+microarray+analysis+of+zebrafish+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Factorial microarray analysis of zebrafish retinal development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 12909-12914 (2008).</li>
<li>Leung, Y. F., Ma, P., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+of+zebrafish+embryonic+retinal+pigment+epithelium+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling of zebrafish embryonic retinal pigment epithelium in vivo.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 881-890 (2007).</li>
<li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish : a practical approach. , 1st ed, Oxford University Press. Oxford ; New York. (2002).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+book+%3A+a+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The zebrafish book : a guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , 4th ed, University of Oregon Press. Eugene, OR. (2000).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Fadool, J. M., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+a+model+system+for+the+study+of+eye+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: a model system for the study of eye genetics.</a> Prog Retin Eye Res. 27, 89-110 (2008).</li>
</ol>

动物实验严格按照普渡大学动物护理与使用委员会制定的指南和规定进行。

斑马鱼眼部组织的显微解剖可有效获取完整视网膜以及附有视网膜色素上皮（RPE）的视网膜。这极大地有助于针对特定眼部组织（即视网膜或RPE）的表达研究。事实上，我们已成功利用这些方法获得了全视网膜1和RPE3的RNA表达谱。这些表达谱的实用性得到了进一步证实：我们近期鉴定出在视网膜分化突变体中发生异常的信号通路和基因家族2。视网膜解剖过程中最关键的步骤是镊子尖端的刷拭操作以及用于去除RPE残留物的组织卷曲动作。我们发现，在解剖过程中将肘部置于可调节的扶手上，可显著稳定手部不必要的移动。此外，部分RPE残留物可能仍存在于锯齿缘区域，这是因为该区域在解剖时无法与培养板的黏附表面接触。尽管如此，在刷拭和剥离操作过程中，大多数RPE细胞已被破坏，这些残留的RPE细胞不太可能保持完整。同时，应在视网膜完整性与RPE清除的彻底性之间取得平衡。在解剖附有RPE的视网膜时，大多数拟似薄而透明膜状的脉络膜和巩膜组织可随皮肤一同剥离。也可通过刷拭组织表面来去除这些残留物，但同样需要在RPE完整性与污染组织清除的彻底性之间取得平衡。我们已成功从1至3天后受精（dpf，即24至72小时后受精）的斑马...

<table><tbody><tr><td>无线研磨杵电机</td><td>VWR 国际公司</td><td>47747-370</td><td></td></tr><tr><td>直流电源</td><td>Lascar</td><td>PSU130</td><td>任何直流电源均可使用。不同设备的具体电压需进一步优化。</td></tr><tr><td>一次性研杵 &amp;& 微量离心管，1.5 mL（无DNase、无RNase、无内毒素）</td><td>VWR 国际公司</td><td>47747-366</td><td>这些用于在TRIzol中收集组织以进行表达分析。</td></tr><tr><td>Dumont #5 镊子，尖端尺寸：0.05 × 0.01 mm，不锈钢</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>500341</td><td>细尖尺寸是可取的，但并非一成不变，因为可能需要不时对尖端进行修整。</td></tr><tr><td>Dumont #5SF 镊子，尖端尺寸：0.025 × 0.005 mm，不锈钢</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td>细尖端尺寸是可取的，但并非一成不变，因为可能需要不时对尖端进行修整。</td></tr><tr><td>Falcon 聚苯乙烯培养皿，60 × 15 mm</td><td>BD 生物科学</td><td>351007</td><td>这些培养皿用作解剖板。</td></tr><tr><td>奥林巴斯 SZX16 体视显微镜</td><td>奥林巴斯株式会社</td><td>SZX16</td><td>任何体视显微镜均可使用。在之前的研究中，我们使用了 Leica 体视显微镜&lt;sup&gt;1-3&lt;/sup&gt; 没有出现任何问题。即使我们安装了2X物镜，也仅使用1X物镜进行解剖操作。 </td></tr><tr><td>磨刀石</td><td>Fine Science Tools</td><td>29008-01</td><td>如有需要，可用此物修锐镊子的尖端</td></tr><tr><td>Thermo板</td><td>Tokai Hit</td><td>MATS-U55SZX2B</td><td>这用于在解剖过程中维持组织的温度，并最大限度减少温度波动对基因表达的影响。我们还将整个显微镜置于温度控制在28℃的环境控制室内&amp;#x00B0;C 在先前研究的解剖过程中&lt;sup&gt;1-3&lt;/sup&gt; 成功率较高。</td></tr><tr><td>Trizol，100 mL</td><td>Invitrogen</td><td>15596-026</td><td></td></tr><tr><td>直径0.015英寸的钨丝</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>TGW1510</td><td></td></tr><tr><td>木制涂抹棒</td><td>普利丹</td><td>807</td><td>用于固定化学蚀刻的钨针。</td></tr></tbody></table>

斑马鱼胚胎眼部组织的显微解剖

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

斑马鱼因其快速的发育过程，成为研究眼睛发育的常用动物模型ex utero发育良好且繁殖力强。受精后3天（dpf），幼鱼即可表现出首次视觉反应。目前已鉴定出许多控制眼睛正常发育的基因，但我们对背后遗传架构的了解仍远未完整。全基因组基因表达谱分析是揭示眼睛发育遗传调控网络的有效工具。然而，斑马鱼胚胎眼睛体积较小，难以获取完整且纯净的眼组织用于表达分析。例如，第2至第3天期间眼睛的前后长度仅为约200–300 μm，晶状体直径则小于100 μm。此外，位于视网膜下方的视网膜色素上皮（RPE）仅为单层上皮。尽管可以从整个胚胎中获得基因表达谱，但这些数据无法准确反映特定组织的表达情况。因此，要成功进行眼睛发育的基因表达谱分析，必须获得纯净的组织样本。为解决这一问题，我们建立了一种显微解剖方法，可从1–3 dpf的斑马鱼中分离出完整的视网膜以及附着RPE的视网膜，覆盖了眼球形态发生的主要阶段。所有操作均可在标准体视显微镜下，使用精细镊子和常规实验器材完成。在分离视网膜时，通过刷动操作并利用RPE残留物对培养皿表面的优先黏附性，将单层RPE去除并剥离。而在分离附着RPE的视网膜时，则先消除RPE对解剖皿表面的黏附力，从而使RPE能够完整保留在视网膜上。通过谨慎地提起该组织，可有效分离脉络膜前体和巩膜。在两种情况下，均可使用化学蚀刻的钨针去除晶状体。总之，我们的方法能够获取完整的眼组织，并已成功应用于研究斑马鱼视网膜的组织特异性表达谱。1, 2和视网膜色素上皮3.

本文介绍了一种显微解剖受精后一至三天斑马鱼胚胎视网膜的方法，可保留或不保留附着的视网膜色素上皮。

斑马鱼因其体外发育迅速且繁殖力强，成为研究眼部发育的常用动物模型。在受精后3天……

本视频展示了对受精后1至3天的斑马鱼胚胎进行视网膜以及附着视网膜色素上皮（RPE）的视网膜的显微解剖。所有操作均可使用精细镊子和常规实验室耗材完成。在标准体视显微镜下进行视网膜解剖时，通过刷拭动作以及RPE与培养板表面的黏附作用，将单层RPE去除并剥离。对于附有视网膜色素上皮（RPE）的视网膜解剖，需在解剖前通过胚胎碾压及洗涤去除培养板的黏附特性。为保持RPE完整，需小心提起该组织，从而有效分离脉络膜和巩膜与附有RPE的视网膜，随后使用化学蚀刻的钨针去除晶状体。该解剖方法可获得完整的视网膜组织，已成功用于研究斑马鱼视网膜及视网膜色素上皮的组织特异性RNA表达谱。您好，我是来自普渡大学生物科学系UFE Leon教授实验室的Li Jang。今天我们将向您展示如何解剖斑马鱼胚胎的眼部组织。在我们的实验室中，利用该实验步骤来研究调控眼睛发育的基因网络。那么，让我们开始吧。八、在显微解剖之前，准备好以下溶液：E3 培养基、过滤除菌的林格氏液以及五倍正常浓度的氢氧化钠。接下来，对钨针进行化学蚀刻。将一个小烧杯用黏土固定在培养皿中，以方便操作并防止氢氧化钠溢出。将一个标准回形针固定在烧杯侧壁上。将五份普通氢氧化钠倒入烧杯中，直至回形针接触到氢氧化钠。将直流电源的负极连接到回形针，正极连接到一段短钨丝的一端。用一个直径为四毫米的黏土小球包裹钨丝的另一端，并将此端浸入氢氧化钠溶液中。将电压升高至约三伏，在氢氧化钠溶液中以每秒上下移动一次的频率浸入和提出金属丝，持续约10分钟。当黏土球从连接正极的金属丝另一端脱落时，暴露在氢氧化钠中的钨丝会逐渐变细，形成尖锐的针状。用任氏液或E3溶液冲洗该尖针以去除盐沉积物，并用胶带或针头夹持器将针固定在木质涂布棒上，以便于操作，为胚胎解剖做准备。在繁殖前一晚，按照标准方案饲养成年超级鱼。将亲鱼成对放入静水繁殖缸中，并用隔板分隔。次日早晨打开房间灯光后，移除隔板，每隔半小时让亲鱼交配一次，每次交配持续10分钟，每次交配后将鱼分开。将每次交配获得的胚胎分别置于E3培养基中，在28摄氏度条件下培养。在受精后10至12小时对胚胎进行分期，并在特定时间点解剖前立即重新确认发育阶段。解剖时使用Falcon 60 mm × 15 mm的聚苯乙烯培养皿。新的未使用培养板对视网膜色素上皮（RPE）组织具有固有的黏附性，可持续约20分钟，有助于在视网膜解剖过程中去除RPE。如果需要保留附着RPE的视网膜，则可通过将两个胚胎完全碾碎后置于含有林格液的培养板中，并在解剖前静置30分钟，随后用新鲜林格液充分洗涤，以消除该黏附特性。所有精细解剖操作均在Olympus SC X 16显微镜下使用1倍物镜，以约5至8倍的放大倍数进行。使用杜蒙镊子或化学蚀刻的钨针，将显微镜载物台预热至28摄氏度。为尽量减少温度波动对开始视网膜分离的影响，将处于特定发育阶段的胚胎转移至已准备好的Falcon 60 mm × 15 mm培养皿中的5毫升任氏液中（该培养皿的制备方法如前述无色素上皮视网膜分离所述），用镊子尖端迅速切断头部及部分前躯干，移除斑马鱼身体。接着，用大头针将头躯干部分的后端固定在培养皿上。用辅助镊子从额部前端开始，沿背侧打开头部。取出脑组织，使眼睛内侧暴露并朝上，以便进行后续操作。为分离视网膜，使用镊子顶端轻轻刷拭朝上一侧眼睛暴露的视网膜色素上皮（RPE），直至观察到通向视网膜的小开口。持续进行刷拭和剥离操作，直至几乎完全暴露视网膜的内侧部分。在采用眼球朝向培养皿的方法处理视网膜时，避免刮擦和穿刺暴露的视网膜，以去除视网膜侧的视网膜色素上皮（RPE）。持镊子与培养皿表面呈约45度角，轻轻刷动眼球。对于附着在锯齿缘区域相对较牢固的RPE，可通过将已分离的RPE部分固定在培养皿上，以便进行解剖并将其去除。然后轻轻抬起视网膜，利用培养皿表面的黏附特性清除残留的视网膜色素上皮（RPE），并去除晶状体。注意避免损伤视网膜细胞，这些细胞也会轻微黏附于培养皿表面。若晶状体无法通过滚动脱离，可使用刻蚀钨针在晶状体表面以旋转动作将其分离。开始进行附有视网膜色素上皮（RPE）的视网膜解剖时，使用如RPE附着视网膜解剖所述方法准备的Falcon 60 mm × 15 mm培养皿。将处于特定发育阶段的胚胎转移至5 mL林格溶液中。剪下头部及部分前段躯干。快速移除斑马鱼身体，操作方法同前。将头躯干部分的后端固定在培养皿上。用辅助镊子从额前部开始，从背侧打开头部。取出脑组织，使眼睛的内侧暴露并朝上。若需使用镊子进行后续操作，应从眼睛的后外侧轻轻提起，并向眼前侧滚动。视网膜色素上皮（RPE）层外侧的脉络膜和巩膜组织与皮肤相对紧密地附着，可通过小心地将眼球向眼前侧滚动，将其大部分剥离。在暴露眼睛外侧且眼球仍与皮肤相连以进行视网膜分离时，使用钨针去除晶状体。去除视网膜色素上皮（RPE）或带有RPE的视网膜后，可将分离的样品收集于RNA酶抑制剂的微量离心管中，用于后续的RNA表征分析。此处展示了一次成功的、不含视网膜色素上皮（RPE）的视网膜分离，视网膜完整性得以保持，表现为视网膜表面完整。相应的组织学切片也显示，视网膜结构保持得非常好。特别是光感受器层与RPE之间细胞外基质的保存尤为完好。成功的带有视网膜色素上皮（RPE）的视网膜分离表现为完整且连续的RPE层。相应的组织学切片显示，视网膜细胞和RPE细胞均保持良好形态。从分离的视网膜中提取的总RNA质量较高。这由生物分析仪分析获得的电泳图谱和凝胶图像所示。基线平坦，18S 和 28S 核糖体峰完整。RNA 完整性编号通常大于 9.8。我们刚刚向您展示了获取斑马鱼胚胎视网膜（含和不含视网膜色素上皮）的显微解剖步骤。在进行该操作时，需特别注意视网膜解剖中最关键的步骤：水龙头尖端的刷动操作以及组织的卷曲动作。对于去除残留的视网膜色素上皮，我们发现解剖过程中将肘部支撑在椅子的可调节扶手上，可显著稳定手部动作。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利成功。

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科研

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Biology

生物学

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本文介绍了如何通过手术从活体斑马鱼幼体中摘除眼球，作为研究视网膜输入如何影响视顶盖生长与发育的第一步。此外，本文还提供了幼体麻醉、固定和脑组织解剖的方法，并进一步介绍了免疫组织化学染色和共聚焦成像技术。...

活体斑马鱼幼鱼眼球摘除以研究视觉系统发育和生长对神经支配的依赖性

学习斑马鱼胚胎眼组织显微切割技术，用于分离视网膜和视网膜色素上皮。该方法利用精细镊子和标准实验室设备，可在发育生物学和神经科学研究中保持组织完整性，适用于RNA表达分析。

斑马鱼胚胎眼部组织的显微解剖

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