使用微阵列的细菌基因表达分析

嗨，我叫 Ena，我们经常在实验室进行基因表达谱分析。我们使用这项技术来监测冰毒和野生型之间的差异调节基因。今天我有一个野生型和甲基 RNA 样品，我们都先做 C。

我们使用间接标记方法，这种技术的优点是防止直接标记中可能发生的眼睛偏差。为此，我们有 RNA 样品，我们选择在 13 μL 的总体积中获得 3 μg RNA。我们在公园里随机添加了 2.5 微的 HE。

我们将在 7 5 度下孵育样品，以观察 RNA 的性质 8 分钟。现在我们将添加，我们将添加逆转录混合物，其中包含 AM L-D-L-D-U-T-P 连续混合物、逆转录酶缓冲液以及 ET TT 将其放大并将样品在 42 度下孵育四个小时。所以四个小时后，我们只需取出样品即可。

现在，我们在试管中有 CDNA 和 RNA 混合物。我们要做的是通过添加氢氧化钠和 EDTA 来制备 hydrox RNA，氢氧化钠的最终浓度应为 100 摩尔。e BT 的最终浓度应为五摩尔。

现在，我们将在 65 度水浴中孵育样品 10 分钟。所以孵育完成了，我们将通过添加 pH 值 7 堆 1 水来利用样品，最终浓度为 500 摩尔。此时，您可以将样品储存在零下 20 度，也可以继续进行清理。

为了纯化 CDNA，我们使用 KaiGen PCR 纯化试剂盒。但是，由于 Bush 缓冲液和离子缓冲液包含释放，我们没有，我们准备自己的 fate bush 缓冲液和 fate 离子缓冲液，您将添加 300 升 PPI，我们将管道缓慢地将池塘输送到您的位置，将混合物转移到柱中，您将以最高速度旋转一分钟，您将观看， 我们准备的缓冲区。磷酸盐洗涤缓冲液，您将添加 750 μL，依此类推，然后您将再次添加另一个 For one。

因此，我们将再次旋转，以确保我们所有床上都准备好了。我们会将这些管子转移到空的罪犯管中。我将添加 30 个磷酸盐 E 缓冲液标记物，即 pH 值为 8.5 的 4 4 摩尔磷酸钾。

在这里，您只需确保将所有物质都添加到色谱柱中心，并在室温下孵育 1 分钟。所以它会再次旋转一分钟，我将再添加一个 30 微零缓冲液，我孵化或卧室。因此，我移除色谱柱，得到的总体积为 60 micros 或 CDA。

一旦我们清理了 CDNA，您就可以将其存放在零下 20 度的地方，我们也可以将其干燥，然后储存起来，以便我们可以在反馈中干燥 CDNA。所以现在在管子里我们有干的 CDA，它是经过修饰的。我们要做的是将干燥样品悬浮进去。

我将样品悬浮在 pH 值为 9 的 10 份 15 LAR 碳酸氢盐中。在这一步，我只是通过上下移动来做到这一点，这对 cDNA 的复苏非常重要。好吧，对于购买公司对工作的反应，这种反应应该在暗室中进行，因为荧光标记物对芯片敏感。

然而，从生命科学中选择这些，它们是单独的包装。S 5 有紫色的盖子，第三面有橙色的盖子，S 5 在暂停时出现 Sion，而 Cary 出现洋红色。所以我在暗室里要做的是将这些样品转移到染料管中，重新悬浮染料并将它们转移回我现有的管中。

然后，我将在黑暗中孵育 2 小时，孵育 2 小时后，加入 35 re 的 1000 毫摩尔乙酸钠，pH 值为 5.2。之后，我们使用类似的清理程序进行清理。但是，这次我们使用 Cajun 提供的洗涤缓冲液和洗脱缓冲液。

您可以描述放置样品的地方以及应该清洁仪器的地方。所以你现在可以你的样品或你的混合物 I To，所以这是我的科幻标签样品，我们看到的是 OD 二 60，它显示了 CDA 含量和 OD 六 50，它显示了科幻的 D 掺入。这是我的 side three label 样本。

再次，扭转 6 浓度和 5 50 措施位点 3 掺入。由于我的 D 公司工作效率很高，我将简要地合并样品 Now， Ms.Miss 它。现在，我们将使用 feedback 再次编写一个示例。

好的，对于载玻片的化，我们将通过将载玻片普遍放在水面上来补充水分，这将使斑点更大。然后为了保护它，我们只在 100 摄氏度下快速干燥，然后我们将 UV 杂交或 UV 交联点连接到载玻片中，然后在我们拥有的预高缓冲液中孵育。所以我将滑梯面朝下放置，但它还没有接触水。

我们将像这样等待 5 分钟。我，所以这个盒子看起来更大，它们应该比你放之前更亮，而且你只需将滑梯放一百度就会迅速干燥，然后你会观察是否有冷凝。我们将与 youi 交叉链接。

所以为了补水，我就把滑梯浸入战前的水中。这应该非常快，因为这里的目标是要去除所有没有链接的斑点或所有寡核苷酸。如果你在这个过程中走得慢，你只会在你的位置上得到 com tails。

所以只要确保你真的在快速完成它，并确保你不要把你的航班从水里拿出来做这个事情 30 秒，然后立即在室温下吹气 5 分钟和 700 空气 pm 得到这个，我们将这个载玻片安装到我们拥有的战前管道站缓冲区中，然后慢慢地将载玻片推入罐子中，我们将在 42 度下将其孵育至少 45 分钟。所以这里我们有了要杂交的干燥样品。因此，我们首先将 Resus 悬浮在水中。

在此步骤中，我们只是通过上下发生来复苏暂停，并且可能不会将样品暴露得太白。然后你加入某人的精子 DNA 1.5，浓度为 10 毫克/密耳。您将添加 TRNA 的 1.2 营销人员。

浓度为每粒 12.5 毫克，我们添加 tRNA 和 som 精子 DNA 以阻断非特异性水合。我们添加 5.35 个标记物 0 3 XSSC，得到最终浓度为 3 x。最后，我们添加 3.5 微升 1% SDS。

现在我们将混合物煮沸 5 分钟，然后以最高速度旋转 5 分钟，然后就可以了。我们孵化载玻片已经一个小时了，现在我有水和异丙醇。因此，我将先在水中搅拌载玻片以去除 SDS，然后清洗 dza 丙醇并直接放入标准量规中。

在这里，请注意不要将光线过多暴露在空气中，以防止干燥。所以我直接从伤害站缓冲区进入水中，然后我们清洗滑梯。几分钟，只需确保运动只是上下移动，而不是侧向移动。

还要确保载玻片不在水面上，我们会立即将其转移到异丙醇中。它又在这里停留了几分钟。您的 page Please 在室温下回答您的 page 五分钟吗？

700 R.Cool.所以我们的滑梯也可以混合了，最好把它放在滑梯盒里，以保护它免受总线的影响。因此，对于收获站，我们将使用提升或滑移。

盖玻片上有白色条带，它们会提供一些升力，并为我们的样品在盖玻片和载玻片之间提供一些空间。我用乙醇清洁它，然后放下电线，确保没有测试颗粒。因此，首先，我们将标记了打印区域的模板幻灯片，然后在其顶部放置我们准备的幻灯片并确保它们完美对齐。

确保它们完美对齐。你需要确保条带在侧面，我们要把它朝下。所以真的很难看到，但要确保你能看到它。

条纹应该在幻灯片的侧面。我们将从侧面加载样本。我取少量样品，因此先取 15 μL，然后从盖玻片的角落开始加载。

我会把它拉进去，然后沿着边缘移动以覆盖所有区域。在这个阶段，不要引入任何气泡非常重要，我又取了 15 个迁移器，将其涂抹在载玻片的侧面，以防止任何干燥。因此，我们的样品已准备就绪，您将孵育我们的玻片和优先室，这些室具有微通道，可在杂交时为玻片水合。

我们将 10 个营销人员的 3 个 XSSC 添加到幻灯片的 6 个角中。对不起，在腔室的每个角落有六个地方，在每一侧，确保你非常轻柔地转移载玻片，以免盖玻片滑落。当你把滑梯正面朝上时，你会看到它会堆叠，它会粘在你放的水上，然后盖上盖子并确保螺丝拧紧。

我们将在 65 度水袋中孵育对话室，但我们不想直接将其放在底部。所以我们只是放置了某种塑料屏障来防止过多的热量传递。我们轻轻地放置我们的化室，为了防止任何位移，您还可以放置某种重量。

这种孵育将持续一夜，通常在 10 到 12 小时之间。因此，对于切片的清洗，我们使用一台 SDS 含量为 0.05% 的 XSSC。这将用于移除盖玻片。

这将是洗涤的第一步。我们将再执行两个步骤，仅使用 0.06%six XSC 通过我们拥有的所有 SDS。所以我们都搞砸了谈话，我们拿了幻灯片，把它面朝下放进钱包里。

我们只需左右摇晃它，我们会看到盖玻片会轻轻地脱落。好了，我们将转移到其他含有 XES 的洗涤缓冲液中。你吃一分钟。

进入 oh six XSSC。为了确保我们摆脱了所有的 FDS，我们将再重复一次。在室温下以 700 RP 离心干燥 5 分钟。将此幻灯片保存在幻灯片框中，因为它对光线敏感。

这是幻灯片扫描仪，您将幻灯片放在这里，这里的空间很小，将幻灯片正面朝下，标记为朝向和，在第二张幻灯片中，您只需定义要扫描的区域。您将在我们的幻灯片中介绍此区域。我们有，我们使用 16 个引脚来打印我们的幻灯片。

所以每个块对应一个引脚，我们的幻灯片包含超过 8， 000 个点。我们代表 vi 颜色基因组两次，因为它大约有 4， 000 个基因。因此，我们使用的每个寡核苷酸都有两个 Spot 点。

如果放大这些，你会在这个特定的实验中看到，我们将转录调节因子突变体与野生型进行比较，突变体会用 scifi 标记，从而产生红色。野生型是 3 号位点，它呈绿色。因此，任何看起来红色的东西，比如这些斑点，都表明突变体中转录本的丰度高于野生型。

因此，它们显示为红色或红色阴影，而任何显示为绿色的东西都表明与突变体相比，野生型转录本的丰度更高。任何出现黄色的斑点都表明，该转录本在突变型和野生型中同样存在。因此，当它们重叠时，它们会像这些 buts 一样显示为黄色。