Name: 技术收集人舌菌状（味道）乳头 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 学习一种微创活检技术，用于收集人舌菌状乳头以获取味蕾组织。该方法支持分子、细胞和组织学研究，帮助研究者直接探索人类味觉转导机制，克服动物模型的局限性。

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本研究由美国国立卫生研究院（NIH）资助项目 R21 DC03969-01（资助对象：JGB）支持。我们感谢 Fritz Lischka 博士协助获取单个味蕾细胞，Tauf Huque 博士完成图 4B 所示的 RT-PCR 实验，以及 D. Bayley 先生和 S. Alarcon 女士提供的技术协助。M. Yanina Pepino 是美国国家药物滥用研究所（NIDA）T32 DA07313 奖学金资助的学员，该奖学金由美国密苏里州圣路易斯市华盛顿大学医学院（Cottler, L.B. 教授为项目负责人）提供。

1. 引言与一般注意事项
常规操作包括对舌前部背侧一小块区域（1 cm2）进行局部麻醉，随后使用弯头弹簧显微剪刀（McPherson-Vannas 型号 #SR 5603，Roboz，Rockville，MD）从该麻醉区域切除若干个（6–8 个）菌状（味觉）乳头。所切除的菌状乳头每个体积约为 0.25 mm3，且伴随每个乳头切除的非乳头（味觉）上皮组织极少。此区域在术后 3 至 5 周内会再生新的乳头，并恢复功能性的味蕾（Spielman 和 Brand，未发表观察结果）。切除如此少量的味觉组织后，对食物的味觉或风味感知无明显影响。根据已对成人人类舌头上单个味蕾进行计数的研究估算，人类舌头约含有 5000 个味蕾。本操作最多切除其中 20 至 25 个味蕾（平均而言，人类每个菌状乳头约含 ~3.5 至 4 个味蕾）2，约占总数的 0.4%。此外，该组织的手术性缺失不会引起疼痛。仅在注射时针头刺入舌头部位会感到轻微疼痛。麻醉作用消退后，偶尔会出现轻微不适，持续时间少于一天，但其程度远低于不慎“咬伤”舌头后所感受到的不适。
在过去的几年中，我们开发出一种无需麻醉的替代性操作方法。两种方法在组织切除技术上完全相同，唯一的区别在于：手术不再局限于实施麻醉的1 cm2直径区域内，而是可以由术者在舌背表面任意选择轮廓明显的乳头部位作为取材位点。两种方法（无论是否使用麻醉）切除的乳头总数均限制在6–8个。若操作得当，去除6–8个菌状味觉乳头所引起的不适感，相较于局部麻醉注射带来的疼痛而言，通常被认为并非主要问题。对接受过两种操作（即有或无麻醉）的个体进行的普遍调查显示，绝大多数受试者在今后的所有活检中均倾向于省去局部麻醉。本技术的开发者（AIS）以及数位由该作者培训并实施无麻醉活检的同事，均在自己身上尝试过该操作，并证实所产生的不适感是暂时的，程度低于舌部被咬伤所引起的疼痛。最后，数十名同意接受活检的个体在被询问是否愿意尝试在无麻醉条件下切除一个乳头、并被告知若感觉过于疼痛可转为实施麻醉的情况下，全部选择继续在无麻醉条件下完成乳头的切除操作。
整个活检过程不应超过5-10分钟。若使用麻醉，则需额外增加2-3分钟。活检通常在上午进行。活检前，志愿者需在预定开始时间前两小时进食少量食物。在进行活检时，需获取书面的知情同意书。活检时的排除标准包括患有严重慢性疾病者（无论是否通过药物控制，例如任何胃肠道疾病、神经退行性疾病、癌症、血液系统疾病、对局部麻醉药过敏等）、心率大于100次/分钟或小于60次/分钟、收缩压大于145 mmHg或小于100 mmHg、舒张压大于90 mmHg或小于60 mmHg，以及外科医生认为不适合参与本研究的受试者。
最后，需要注意的是，活检操作应在与组织处理和检查相同的设施内进行，因为组织完整性会迅速丧失，这一点我们已通过mRNA质量的持续下降多次观察到。为尽量减少这些问题，舌组织应尽快进行处理。
2. 受试者准备
<ol>
 <li>受试者坐在牙科椅或带有头枕的座椅上。</li>
 <li>在活检时检查心率和血压。若受试者的血压、心率或口腔功能不在正常范围内，外科医生应建议其立即预约就诊医师。</li>
 <li>检查口腔内组织的整体健康状况，特别注意口干症、地图舌或任何舌部病变的迹象。凡显示有口腔疾病（包括舌部病变或口干症）的受试者均被排除在研究之外。指导受试者用水漱口，以清除口腔内所有残留物。如有必要，使用一次性舌刮器清洁舌面，去除牙菌斑或残留物，防止其在麻醉注射时被带入舌组织内部。外科医生用手套包裹的手持无菌纱布垫固定从口腔伸出的舌前1/4部分。</li>
 <li>若使用麻醉，采用1 mL结核菌素注射器，配28号×½英寸针头，内含0.25 mL含肾上腺素（1:100,000）的利多卡因（2%），缓慢注射至舌背前部下方的一个位点。麻醉部位应位于取材部位远端，以避免利多卡因对后续研究造成干扰。作为对照，所注射的利多卡因量（0.25 mL）约为牙科操作中常规神经阻滞剂量（0.8 mL至1 mL）的四分之一。进针后、注射麻醉药前需回抽，确认未刺入血管。尽管从解剖学角度而言，在靠近舌背表面处刺中大血管的可能性极低，但仍需采取此预防措施。舌背表面唯一的动脉——舌背动脉，为细小血管，主要分布于舌前1/3更靠后的区域，而组织取材通常发生于舌前1/3处。较大的舌动脉和舌静脉则走行于舌腹面，远离接受麻醉的背侧区域3。麻醉后的约1 cm区域会呈现较周围组织略苍白的外观，这是由于组织肿胀压迫小血管所致，同时也归因于肾上腺素的血管收缩作用。约一分钟后，使用探针测试该区域是否麻木。若未达到麻木效果，可追加一次注射（0.1至0.2 mL）。</li>
</ol>
3. 舌乳头去除技术
<ol>
 <li>用无菌纱布包裹受试者舌前四分之一区域（图1），并用外科医生的左手握住（若使用右手进行活检）。纱布的一角应留出开口，以便医生擦拭舌头以清除唾液。舌头必须牢固固定，但当然不能造成不必要的不适。将左手食指指尖置于舌头下方，正对活检部位的下方。通过向上推动食指，使舌头绷紧并覆盖在指尖上，从而使乳头突起，便于活检。</li>
 <li>选择乳头进行活检的标准：味觉乳头可通过其形状和大小与周围丝状乳头明显区分。菌状乳头呈圆形，且相对孤立，在其周围紧邻区域存在一个无丝状乳头的环形空白区（图2A，蓝色箭头）。该区域直径约为1 mm。菌状乳头的另一个特征是，在年轻受试者中，大多数菌状乳头顶端可见延伸的毛细血管分支结构。尽管这种分支结构有助于定位菌状乳头，但它并不一定能够预测该乳头内是否存在味蕾。通常应从靠近舌尖的前端开始采集，并逐渐向舌体远端移动，以避免毛细血管出血影响后续组织采集部位的视野。</li>
 <li>一旦确定合适的乳头，即使用弹簧式显微剪刀（McPherson-Vannas，弯曲型，锐利切割刃5 mm，梳状，尖端宽度0.2 mm，总长3英寸（RS-5603，Roboz）将其剪下。为有效使用显微外科剪刀，不应使用刀尖进行切割；而应尽可能深入刀片内部（图1，放大图像及图3），靠近与对侧刀片交汇处进行剪切。乳头的移除应通过一次剪切动作完成（图1）。目标乳头在张开的刀片内位置越靠内，剪切效果越好。应注意保持剪刀整体方向与舌背表面平行。</li>
 <li>有时在寻找待切除乳头的过程中，舌头会变得干燥。一旦干燥，操作者将更难清晰辨认菌状乳头，且刀片在乳头表面滑动也会变得非常困难。过于干燥的舌头通常会导致金属刀片粘附于舌面，使精细的外科操作难以控制。此时可让受试者闭合口腔，使唾液重新润湿舌面以改善情况。但舌头过湿也不理想。此时可利用夹持舌头所用纱布的角落来协助调节湿度。</li>
 <li>若出现毛细血管出血，可用无菌纱布轻压止血。出血通常在数分钟内停止，不会影响后续组织采集。由于乳头突出于舌上皮表面，且仅切除菌状乳头上部约3/4部分（图2B），即含有味蕾的区域，因此预期出血量极少。</li>
 <li>使用小型Dumont镊子（Pattern型号），将切除的乳头置于预冷的基础林格缓冲液中（130 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM Na-丙酮酸盐, 20 mM HEPES-Na, pH 7.2；渗透压约为305毫渗量）以备后续操作。切记**绝不可**用镊子夹捏乳头。该组织极为脆弱，必须极其小心地处理。</li>
 <li>乳头切除后，受试者需在座位上静坐10至15分钟。每位受试者均应被告知不得咬合麻醉后的舌头，而应保持舌头静止。应由主治外科医生对其进行目视监测。麻醉效果预计在约30–60分钟内消退。由于乳头切除部位在活检后可能略有不适，应提醒受试者注意避免食用辛辣或高温食物、碳酸饮料以及温度极冷或极热的饮品。同时告知受试者，唾液中出现轻微红色属于正常现象，待血凝块溶解后即会消失。</li>
 <li>在乳头切除后30–40天对受试者进行复查，评估乳头切除部位的恢复情况。至此，味觉乳头应已完全再生。</li>
</ol>
5. 代表性结果
所采集的组织可用于免疫组织化学、RT-PCR、原位杂交、钙成像、膜片钳和组织培养。若操作得当，乳头外观健康，呈白色，直径约为0.5-1 mm（图2B）。
用于免疫组织化学的乳头样本根据已发表的现有方案进行处理4。图4A显示了经多聚甲醛固定的味乳头中一个典型的味蕾结构。
活检的乳头也可通过酶处理5以实现味蕾细胞的分离。酶解后，细胞可在4°C的湿润培养皿中维持最多4小时。在此状态下，可用于单细胞PCR（图4B）、钙成像等实验。
细胞呈现多种形态，许多细胞呈细长的双极形（图5A和5B），符合味蕾细胞的预期特征。在显微镜下收集细胞或进行钙成像时，约20分钟后，细胞开始出现凋亡性起泡（图6A和6B，箭头所示），其中许多细胞变为圆形。采用本实验室建立的技术，使用膜片钳移液器单独挑取细胞，如图5A和5B所示。
如上所述，乳头在5至8周后开始再生。图7A展示了志愿者舌头左侧的8个菌状乳头在未使用麻醉的情况下被切除后的外观。注意乳头被剪除后留下的8个轻微发红的斑点。手术后未观察到出血。本图像拍摄于活检后10分钟。图7B为同一名受试者在活检后40天的舌部图像。可见所有乳头均已再生。为了确定再生的乳头是否具有功能，我们征得志愿者同意，进行第二次活检，再次采集完全相同的乳头。为了准确识别需要再次采集的特定乳头，我们制作了一个网格（图7C），该网格与最初切除的8个乳头位置匹配，并将其叠加在初次活检40天后同一名志愿者的舌部图像上。借助舌体轮廓及边缘到网格的距离，确认位置后，我们再次切除了其中几个完全相同的乳头，并对其进行免疫组织化学处理。图4A即为其中一个乳头的图像。注意味蕾轮廓（黄色）以及对磷脂酶Cβ2（PLCβ2）的免疫阳性染色，后者是一种与Ⅱ型味觉细胞信号转导相关的酶。这些数据表明，采用本文所述的活检方法，菌状乳头在40天内已充分再生，且很可能已形成具有功能的味蕾。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig1.jpg" alt="舌活检操作特写；手术器械提取组织样本用于医学分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
 图1. 将受试者舌前1/4部分用无菌纱布包裹，并由外科医生左手握住。舌头必须牢固固定。右侧放大图像显示了剪刀的正确位置以及乳头相对于刀刃的位置。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig2.jpg" alt="舌组织活检操作；手术工具切口示意图及样本取出演示。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 2"> 
 图 2. (A) 菌状乳头以蓝色箭头标示。这些是呈圆形的结构，相对孤立于周围组织，在其紧邻区域存在一个无丝状乳头的环形空白区。(B) 菌状味觉乳头在被弹簧显微剪切除数秒后附着于剪刀尖端。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig3.jpg" alt="使用镊子提取组织样本的活检程序示意图；医学研究技术。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 3"> 
 图 3．使用镜子进行无麻醉的轮廓乳头自体活检。插图显示了剪刀的整体位置，其必须与舌背表面平行。若操作得当且无创，几乎所有志愿者均可无需麻醉。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4a.jpg" alt="细胞成像，荧光显微镜，突出显示组织结构，光谱发射分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Figure 4a"> 
 图4 A. 味蕾的免疫组织化学染色。利用Nomarski光学显微镜观察菌状乳头，并使用针对磷脂酶β2的抗体，结合红色荧光蛋白标记。味蕾的轮廓及少数标记的味觉细胞以黄色显示。 <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4b.jpg" alt="DNA电泳结果；凝胶条带；标记物，第1-4泳道；片段大小1.6 kB；分离分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Figure 4b"> B. 候选酸味受体——酸敏感离子通道1（ASIC1）的RT-PCR检测。M=标记物。第1至第4泳道为来自四位不同志愿者的单细胞RT-PCR扩增结果。采集样本后，将菌状乳头进行酶解离，单个细胞被挑选后进行ASIC1表达检测。第2和第4泳道显示出正常的ASIC1表达。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig5.jpg" alt="细胞生物学中的显微注射技术，显微镜图像显示精确的细胞操作。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 5"> 
 图 5. A. 使用膜片钳移液管拾取单个味觉细胞的图像。左下角可见一个较大的上皮细胞（5A）。在膜片钳移液管上方及玻璃管体后方还可看到两个红细胞。味觉细胞长约 30–50 µm，宽约 6 µm。作为参考，红细胞直径约为 7–8 µm。B. 显示另一个被四个上皮细胞包围的味觉受体细胞。该味觉细胞轮廓清晰。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig6.jpg" alt="细胞显微镜图像，图A和图B，展示不同的微生物结构；显微分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Figure 6"> 
 图6。A. 开始形成凋亡性出泡的细胞图像（附着在味觉细胞上的鬼影样圆形出泡，箭头所示）。B. 当细胞形态发生如此变化时，便不再进行收集。
<img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig7.jpg" alt="舌组织愈合阶段；术后10分钟及40天的实验结果；临床研究" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图7"> 
 图7. A. 使用无麻醉方式切除8个味蕾乳头后10分钟。手术部位可见为略微发红的斑点，未见出血。 B. 同一舌部在活检后40天的情况。注意所有乳头均已再生。为便于识别再生乳头的原始位置，在右侧图像上建立网格，并将其平移覆盖至左侧图像的再生乳头区域。 C. 再生乳头出现在完全相同的位置。对该组再生乳头再次取材并进行免疫组织化学分析，结果显示再生乳头包含有功能的味觉细胞（见图4A）。

<ol><li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+taste+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Mammalian taste perception.</a> Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).</li>
<li>Miller, I. Anatomy of the peripheral taste system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+I+%22Handbook+of+Olfaction+and+Gustation%22">Handbook of Olfaction and Gustation</a>. Doty, R. I., Dekker, M. , Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).</li>
<li>Figure 12.67. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Gray%27s+Anatomy%3A+The+Anatomical+Basis+of+Medicine+and+Surgery%22">Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery</a>. , 38th Edition, Churchill Livingstone. New York. (1995).</li>
<li>Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sour+ageusia+in+two+individuals+implicates+ion+channels+of+the+ASIC+and+PKD+families+in+human+sour+taste+perception+at+the+anterior+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue.</a> PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).</li>
<li>MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamping+of+taste+cells+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Biology+of+Taste+and+Olfaction%22%5BJournal%5D)">Patch-clamping of taste cells in mouse.</a> Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. Spielman, A. I., Brand, J. G. , CRC Press. Boca Raton, FL. 329-332 (1995).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

使用人源细胞的一个显著优势在于其特异性。本文详细描述的实验方法可获取用于分离人口腔味觉受体细胞的舌组织。这些味觉细胞可用于分子生物学研究，以发现参与味觉信号转导的关键分子，也可用于钙成像实验，以监测味觉细胞对刺激物的反应活性。此外，通过该方法获得的舌组织还可应用于多种技术分析，例如免疫组织化学。 原位 杂交，并允许捕获单个细胞用于分子实验操作，例如聚合酶链式反应（PCR），包括实时定量单细胞PCR。由于该操作可在活检前对其味觉功能已进行心理物理学评估的个体上实施，因此能够清晰揭示导致味觉异常的分子机制细节（例如，参见 Huque）。 等 2009）。该活检方法可制备出具有活力且代谢完整的单细胞悬液，并富集来自味蕾的细胞，从而能够对这些细胞进行膜片钳记录。利用该技术，未来的研究不仅可加深对人类特异性味觉转导过程的理解，还可解析疾病状态或药物诱导状态下味觉异常的分子机制，并开发治疗这些异常的干预方案。
最后，我们的观察结果强烈表明，菌状乳头表面靠近分支结构处常可见的“小孔”，通常被认为是味蕾孔，但实际上并不能很好地预测味蕾的存在。这些小孔的本质究竟...

<table><tbody><tr><td>McPherson-Vannas。弯曲、锋利的切割刃，5 mm。梳状，尖端宽度 0.2 mm，总长度 3&quot;</td><td>Roboz 外科器械公司</td><td>RS-5603, Roboz</td><td></td></tr><tr><td>小型 Dumont 镊子</td><td>Roboz 外科器械公司</td><td>RS-4915, Roboz</td><td></td></tr></tbody></table>

采集人舌菌状（味觉）乳头的技术

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

味觉对人类生命至关重要。它向机体提供即将摄入食物的质量信息，并激发相应的代谢过程，使消化道为消化做好准备。目前，人们对味觉转导早期生化与分子事件的理解正在稳步进展（综述见 Breslin 和 Spector，20081）。然而，迄今为止的研究进展主要来自动物模型。但由于不同物种之间在受体特异性和受体密度方面存在显著差异，只有利用人类味觉组织才能真正理解人类的味觉转导机制。本文中，我们描述了一种活检技术，用于采集人类轮廓乳头——这些乳头表现为直径约 0.5 mm 的粉红色圆形前部结构，含有味蕾。所采集的乳头可用于多种用途，包括分离有活性的味蕾细胞、原位杂交、免疫组织化学，以及通过分子生物学技术鉴定味觉特异性的新蛋白质。

近年来，由于采用动物模型，人们对味觉转导分子机制的认识取得了显著进展。然而，哺乳动物在味觉敏感性和特异性方面存在广泛差异，因此有必要开展针对人体组织的研究。本文介绍了一种活检技术，用于从人舌乳头采集存活的味觉细胞。

味觉对人类生命至关重要。它向身体提供即将摄入食物的质量信息，并激发相应的代谢反应……

本实验的总体目标是清除舌背表面的人类真菌。该操作首先用一块无菌Gores垫包裹舌头前1/4区域，并用左手牢固握住。同时，用左手食指从舌下轻轻向上推，使舌头被拉伸并覆盖于手指上，从而暴露目标舌背真菌。该操作的第二步是在采集部位远端的舌背区域注射0.25毫升2%利多卡因麻醉剂。等待三分钟，使麻醉起效。第三步是切除乳头，切割时使用靠近叉状结构的刀片最内侧部分进行。将剪刀张开，置于目标毛囊上方，同时下压周围组织，使目标毛囊凸出并位于刀片之间，然后迅速单次剪切。避免使用剪刀尖端进行切割。手术的最后一步是用剪刀刀片提起已切断的毛囊，并用直镊子夹起。轻柔地将切割后的每根柱状组织转移至相应的缓冲液中。避免挤压柱状组织。该样品可用于原位杂交、免疫组织化学、聚合酶链式反应等实验。它也是获取单个分离味蕾细胞的组织来源。该方法的主要优势在于，目前这是获取新鲜人体味觉组织的唯一途径。菌状乳头。首先，让受试者坐在牙科椅或带有头枕的座椅上。然后，检查口腔内组织的整体健康状况，观察是否存在口干或舌部病变的迹象。任何显示有口腔疾病（包括舌部病变或口干）迹象的受试者均被排除在研究之外。指导受试者用水漱口，以清除口腔内的当日残留物，并用戴手套的手进行操作。使用无菌纱布垫固定从口腔伸出的舌前1/4部分。若需实施麻醉，使用1 mL结核菌素注射器，配28号半英寸针头及2%利多卡因。使用1:100,000稀释的肾上腺素，将针头插入背侧表面稍下方。麻醉部位应位于采样部位的远端，以避免利多卡因干扰后续研究；在插入针头后、注射麻醉抽吸液之前，应确认未刺中血管。但由于注射部位位于背侧表面，这种情况发生的可能性极低。舌静脉中较大的舌动脉沿舌的腹侧表面走行。麻醉区域约为一平方厘米，与周围组织相比颜色略显苍白。这是由于组织肿胀压迫了小血管，以及肾上腺素的血管收缩作用所致。大约三分钟后，使用探针测试注射区域是否已麻木。为移除舌乳头垫片，用无菌手套包裹受试者的舌头，并用与进行活检操作手相反的手握住舌头。牢固地固定舌头，但需小心避免造成不必要的不适。将持舌手的食指直接放在进行活检的部位下方，向上推起，并将舌头拉伸至指尖上方，以暴露乳头，便于活检。菌状乳头上的味蕾因其形状和大小，可轻易与周围丝状乳头区分开来。菌状乳头周围与其周围组织有一定分离，较为孤立。在该区域附近，存在一个无丝状乳头的圆形区域，直径约为一毫米。菌状乳头的另一个显著特征是其顶端可见的扩展毛细血管分支，多数菌状乳头上均可观察到这一结构。然而，这些微小的血管并不一定是判断这些乳头中是否存在味蕾的良好指标。通常情况下，应从舌前部开始采集，从舌尖向后移动，以避免毛细血管出血遮蔽下一个组织采集部位。一旦确定了合适的乳头，即使用弹簧显微剪将其剪下。为了有效使用显微手术剪刀，不要使用刀刃的尖端进行切割，而应尽可能靠近剪刀的叉口，在刀刃内部进行切割。使用一次剪切动作即可去除

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科研

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医学

技术收集人舌菌状（味道）乳头

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本方案用于测量人类的味觉反应，包括简要的解剖学评估、简短的味觉测试，以及利用受试者报告的感觉和味觉受体基因型进行验证的方法。...

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