冈比亚按蚊（A. gambiae）的饲养方案

我叫Shish，是约翰·霍普金斯大学公共卫生学院分子微生物学与免疫学系George OU博士实验室的一名博士后。我将演示如何在实验室中饲养冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）。我们在昆虫饲养室中维持这些蚊子，环境条件通常保持在27摄氏度和80%的湿度。

昆虫饲养室也维持在12小时光照与12小时黑暗的循环条件下，以便我们模拟自然界中的实际环境。这就是我们所使用的昆虫饲养室，作为本机构的核心设施之一，用于维持该昆虫的培养。如您所见，这些是装有处于不同发育阶段蚊虫的各种托盘，包括卵、不同龄期的幼虫以及蛹。

这些托盘中含有约 11 至 12 日龄的幼虫，而这个笼子用于收集成蚊，并以 10% 蔗糖溶液维持其生存。为了开始蚊虫的饲养，我们需要对蚊子进行血液饲喂，因为蚊子需要血液中的蛋白质来产卵。第一天的操作是在成蚊被收集到笼中并以 10% 蔗糖溶液维持后进行的。

第一天需要给蚊子喂食血液，因此采用人工膜喂血法。这是一种玻璃饲血器，我们用它对蚊子进行膜饲血。通过您所看到的小孔将血液注入其中，并由该容器盛装血液。

在侧面底部有两个喷嘴，连接到一个维持在 37 度的水浴装置。为了将血液保持在 37 度，并准备喂食装置，我们取一小片透析膜。从四个方向的两端将其拉伸，然后覆盖在玻璃喂食器的开口一侧，形成一层薄膜，以模拟皮肤结构。

这就是所谓的膜饲法。这是一个循环水浴装置，可将水温维持在37°C，同时通过玻璃饲血器循环加热水，使血液始终保持在37°C的适宜温度。我们将玻璃饲血器通过细小的毛细管连接到循环水浴装置上，并开启水浴，使水开始循环。水和血液不会混合，因为它们分别位于两个独立的腔室中。

这是一个装有冈比亚按蚊成蚊的笼子。这个是玻璃饲血器，连接到循环水浴装置，我们在笼子顶部夹上夹子，并加入200 µL血液。笼内同时含有雄性和雌性蚊子。

只有雌性才会来吸血。吸血过程持续约30分钟。吸血后两天，我们将产卵杯放入蚊子的笼子中，供其产卵。

这是具体操作步骤：取一个小烧杯，部分装入一些蒸馏水；取一张滤纸，将其浸湿后卷成圆锥形，放入盛有蒸馏水的烧杯中，并确保辣椒提取物被润湿。然后缓慢打开蚊虫饲养笼，注意不要让任何蚊子逃出，并将盛有蚊卵的杯子放入其中。

将杯子放入笼内后的第二天，即第四天，缓慢将其从笼内取出。这些是卵，黑色的卵，其中还含有一些死亡的蚊子。待卵准备好后，将其放置在塑料托盘上。

过去，将塑料托盘装满蒸馏水。取出带有卵的滤纸并放入其中。再加入少量食物A，即研磨后的鱼食，然后将托盘放入架子中。

我们应在开始放置培养盘的当天对培养盘进行水平调整，并记录其中的物种信息。这是指在您将卵放入培养盘后的第二天。也就是说，这些卵已有一天的龄期，但实际操作中应以蚊子产卵后的第五天为准。

这些黑色的是即将孵化成幼虫的卵。这些是蚊子的食物。在蚊子的饲养过程中，我们通常使用三种不同类型的食物。

食物A实际上是研磨过的鱼食，我们在开始饲养蚊子（处于X阶段）时添加这种食物，每天添加两片食物C，即购自Purina的猫粮。八到九天后，我们更换托盘中的水并加入新鲜水。此时，不再添加食物A，而是加入少量食物B，食物B其实就是与食物C相同的研磨猫粮，同时仍添加两片食物C，以供卵孵化成幼虫。

幼虫分为三个不同的发育阶段：第一龄幼虫、第二龄幼虫和第三龄幼虫。这些是饲养幼虫的托盘，其中的幼虫为五到六日龄。

这些 Ravi 处于更晚的阶段，大约有 9 到 10 天大。在此期间已更换水，并添加了新鲜水和新鲜食物。此托盘中既有成虫，也有 ppe。

如您所见，这些成虫正在蚊帐下飞行。在边缘处，您可以看到所有深色的蛹壳，它们将孵化为成虫。一旦获得成虫，就可以将其收集到一个类似这样的笼子中。

其内部衬有纸巾，并有一个小瓶，内含10%超级溶液和一块浸有肥皂的棉球，可作为蚊子的食物来源。我们将瓶盖盖好，这是吸蚊器装置，通过连接真空泵，可从这些托盘中收集成蚊。吸蚊器的这一部分在此处连接，另一端也已接通。

连接至真空泵。我们将笼子放入，用于收集成虫至这个小盒子中。这是吸蚊器的另一部分，带有一根长管，将插入蚊虫培养盘中。

另一端将连接到笼子上。必须确保所有连接处都紧密，以保证真空效果良好。我们合上盖子，并确保所有部位都密封严实。

缓慢启动后端设备。一旦装置准备就绪，我们将这段长管缓慢插入蚊虫托盘中，确保关闭网罩，防止蚊虫逸出。如您所见，蚊虫正被收集到小型笼子中。

缓慢地将管子移动到各处，以收集所有成虫。现在我几乎完成了。所有成虫都已被收集，它们全部在这个笼子里，你们可以看到。

然后缓慢释放真空，拆卸收集装置。这是采集到的冈比亚按蚊成蚊，将把这些蚊子放入笼中饲养数天。它们将饲喂10%的蔗糖溶液，并仅在需要产卵时提供血液供其吸食。

我刚刚向您演示了如何使用蚊子。在实验室条件下饲养致倦库蚊（Culex quinquefasciatus）时，关键步骤包括血液喂养。然后放置产卵杯，收集卵，接着它们会经历不同的发育阶段，如幼虫、蛹和成虫。

最后，我们收集成蚊。该技术的重要性在于必须模拟自然界中的实际环境条件，以确保获得健康的蚊子，随后用疟原虫感染这些蚊子，并开展多种疟疾相关研究，其主要目标是彻底根除全球的疟疾。