Name: 蚊子养育的议定书（冈比亚按蚊） (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: 了解冈比亚按蚊实验室饲养技术，掌握温度湿度控制及人工血饲方法，用于疟疾传播研究与病媒防控。本视频展示从卵到成虫的完整生命周期管理。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

蚊虫食物：
<ol>
<li>食物A：碾碎的鱼食（Aquaricare）。需加入少量。</li>
<li>食物B：碾碎的猫粮（Purina）。需加入少量。</li>
<li>食物C：猫粮（Purina）。需加入两片。</li>
</ol>
血液：
可用于饲养蚊子的血液包括动物或人血。用注射器采集新鲜血液后，放入无菌的15 ml Falcon离心管中，每10 ml血液加入1 ml CPD（抗凝剂），轻轻混匀，然后在室温下以2000 rpm离心5分钟。弃去上清液，注意去除含有其他血细胞（如白细胞）的白膜层。将红细胞沉淀用移液管重悬于等体积的RPMI培养基中，并在此培养基中再洗涤三次。最后一次洗涤后，将沉淀的红细胞重悬于等体积的RPMI培养基中，4°C保存（可保存8–10天）。喂食前，将RPMI中的红细胞以2000 rpm离心5分钟，使细胞成团，然后将压紧的红细胞重悬于血清（O+型人血清）中，制备成40%的血细胞比容。喂食过程中血液必须始终保持在37°C。
第1天：
<ol>
<li>使用3至5日龄的成年雌蚊进行血液饲喂以促使其产卵。</li>
<li>血液饲喂采用人工膜（Parafilm）饲喂法，步骤如下： <ol>
<li>将红细胞（血液制备方法见上文）与热灭活血清混合，配制约为40%的血细胞比容（压积红细胞占40%，血清占60%），并将该混合液加入玻璃饲喂器中。</li>
<li>将饲喂器连接至温水循环装置（37°C），并放置于蚊笼上方，使蚊子能够接触到膜表面进行吸血。</li>
<li>让蚊子自由吸血约30分钟。</li>
</ol></li>
</ol>
第3天：
<ol>
<li>雌蚊在吸血后两天会产卵。将一小片滤纸折成圆锥形，放入盛有蒸馏水的小烧杯中，确保滤纸湿润。将烧杯置于蚊笼内过夜，使蚊子产卵。</li>
</ol>
第4天：
<ol>
<li>将含有蚊卵的滤纸放入盛有约 300 ml 蒸馏水的塑料托盘中。向托盘中加入少量食物 A，随后在接下来的几天中让卵孵化成幼虫。</li>
</ol>
第5至8天：
<ol>
<li>每日用两片食物C喂养生长中的幼虫，并监测其密度和种群数量。在第八天（5日龄幼虫），将幼虫种群从1个托盘稀释至约10个托盘，每个托盘中加入少量食物A和两片食物C。（约30分钟）</li>
</ol>
第 9 - 12 天：
<ol>
<li>幼虫每天喂食食物C。在第12天（9日龄幼虫）更换新鲜水，并添加食物（一小撮食物B和两片食物C）。此阶段开始出现蛹的发育。培养盘上方覆盖网罩，以防止成虫逃逸。（约8–10分钟）</li>
</ol>
第13 - 15天：
在接下来的2至3天内，让蛹羽化为成虫。每天需小心移开网罩，为幼虫/蛹提供食物，以避免成虫逃逸。
第16天：
<ol>
<li>通过连接真空泵的吸虫器将成虫收集到饲养笼中。饲养笼由一个小型100 ml的瓶子构成，瓶内装有一根浸有10%蔗糖（经高压灭菌）的棉芯，并在底部铺有纸巾，以吸收在操作饲养笼时可能溢出的糖液。（约30–40分钟）</li>
</ol>
第 17 - 21 天：
<ol>
<li>随后将成虫（包括雄性和雌性）置于昆虫饲养室中饲养4-5天，并喂食10%蔗糖溶液，之后再次进行血液饲喂以启动下一个繁殖周期。同一批蚊子可多次用于产卵。</li>
<li>不再需要用于实验或饲养的蚊子可通过将笼子放入冰箱冷冻处死。使用过的饲养盘和笼子需清洗并干燥后方可再次使用。</li>
</ol>
注意：蚊虫饲养方法可能存在一些差异，不同实验室可能采用不同的技术。

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
<li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior%2C+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li>
<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
<li>Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+larval+crowding+on+mating+competitiveness+of+Anopheles+gambiae+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+J%22%5BJournal%5D)">Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Malar J. 30 (4), 49(2005).</li>
<li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus%5BTitle%5D)+AND+%22Edw.+J.+Exp.+Boil%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>食物A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>研磨的鱼食。需加入少量。</td></tr><tr><td>食物B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>研磨的猫粮。需加入少量。</td></tr><tr><td>食物C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>猫粮。需加入两片。</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>制备的红细胞：含40%红细胞压积的人血清</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>培养基</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>抗凝剂</td></tr><tr><td>血清</td><td></td><td></td><td></td><td>O+型人血清</td></tr><tr><td>蚊子饲喂装置</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>石蜡膜</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>蚊子</td></tr><tr><td>10%蔗糖</td><td></td><td></td><td></td><td>蚊子食物</td></tr><tr><td>昆虫饲养室</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

冈比亚按蚊（a. gambiae）的饲养方案

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

本方案描述了在昆虫饲养室中进行蚊虫饲养的步骤。昆虫饲养室需维持在28°C和约80%的湿度，并保持12小时光照与12小时黑暗的循环条件。进行该操作时，您需要蚊虫饲养笼、10%无菌蔗糖溶液、纸巾、烧杯、Whatman滤纸、玻璃饲喂器、人血和血清、水浴锅、Parafilm封口膜、蒸馏水、干净的塑料托盘、蚊虫食物（如下所述）、覆盖托盘用的蚊帐、真空泵以及用于收集成虫的收集装置。

本视频展示了在实验室中饲养冈比亚按蚊的一般技术。通过该生物体从幼虫到蛹再到吸血成虫的整个生命周期，演示了实验室蚊虫饲养的各个环节。

冈比亚按蚊（A. gambiae）的饲养方案

本方案描述了昆虫饲养室中蚊虫的饲养方法。昆虫饲养室的环境条件保持在28°C和约80%湿度，光照周期为12小时光照/12小时黑暗……

我叫Shish，是约翰·霍普金斯大学公共卫生学院分子微生物学与免疫学系George OU博士实验室的一名博士后。我将演示如何在实验室中饲养冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）。我们在昆虫饲养室中维持这些蚊子，环境条件通常保持在27摄氏度和80%的湿度。昆虫饲养室也维持在12小时光照与12小时黑暗的循环条件下，以便我们模拟自然界中的实际环境。这就是我们所使用的昆虫饲养室，作为本机构的核心设施之一，用于维持该昆虫的培养。如您所见，这些是装有处于不同发育阶段蚊虫的各种托盘，包括卵、不同龄期的幼虫以及蛹。这些托盘中含有约 11 至 12 日龄的幼虫，而这个笼子用于收集成蚊，并以 10% 蔗糖溶液维持其生存。为了开始蚊虫的饲养，我们需要对蚊子进行血液饲喂，因为蚊子需要血液中的蛋白质来产卵。第一天的操作是在成蚊被收集到笼中并以 10% 蔗糖溶液维持后进行的。第一天需要给蚊子喂食血液，因此采用人工膜喂血法。这是一种玻璃饲血器，我们用它对蚊子进行膜饲血。通过您所看到的小孔将血液注入其中，并由该容器盛装血液。在侧面底部有两个喷嘴，连接到一个维持在 37 度的水浴装置。为了将血液保持在 37 度，并准备喂食装置，我们取一小片透析膜。从四个方向的两端将其拉伸，然后覆盖在玻璃喂食器的开口一侧，形成一层薄膜，以模拟皮肤结构。这就是所谓的膜饲法。这是一个循环水浴装置，可将水温维持在37°C，同时通过玻璃饲血器循环加热水，使血液始终保持在37°C的适宜温度。我们将玻璃饲血器通过细小的毛细管连接到循环水浴装置上，并开启水浴，使水开始循环。水和血液不会混合，因为它们分别位于两个独立的腔室中。这是一个装有冈比亚按蚊成蚊的笼子。这个是玻璃饲血器，连接到循环水浴装置，我们在笼子顶部夹上夹子，并加入200 µL血液。笼内同时含有雄性和雌性蚊子。只有雌性才会来吸血。吸血过程持续约30分钟。吸血后两天，我们将产卵杯放入蚊子的笼子中，供其产卵。这是具体操作步骤：取一个小烧杯，部分装入一些蒸馏水；取一张滤纸，将其浸湿后卷成圆锥形，放入盛有蒸馏水的烧杯中，并确保辣椒提取物被润湿。然后缓慢打开蚊虫饲养笼，注意不要让任何蚊子逃出，并将盛有蚊卵的杯子放入其中。将杯子放入笼内后的第二天，即第四天，缓慢将其从笼内取出。这些是卵，黑色的卵，其中还含有一些死亡的蚊子。待卵准备好后，将其放置在塑料托盘上。过去，将塑料托盘装满蒸馏水。取出带有卵的滤纸并放入其中。再加入少量食物A，即研磨后的鱼食，然后将托盘放入架子中。我们应在开始放置培养盘的当天对培养盘进行水平调整，并记录其中的物种信息。这是指在您将卵放入培养盘后的第二天。也就是说，这些卵已有一天的龄期，但实际操作中应以蚊子产卵后的第五天为准。这些黑色的是即将孵化成幼虫的卵。这些是蚊子的食物。在蚊子的饲养过程中，我们通常使用三种不同类型的食物。食物A实际上是研磨过的鱼食，我们在开始饲养蚊子（处于X阶段）时添加这种食物，每天添加两片食物C，即购自Purina的猫粮。八到九天后，我们更换托盘中的水并加入新鲜水。此时，不再添加食物A，而是加入少量食物B，食物B其实就是与食物C相同的研磨猫粮，同时仍添加两片食物C，以供卵孵化成幼虫。幼虫分为三个不同的发育阶段：第一龄幼虫、第二龄幼虫和第三龄幼虫。这些是饲养幼虫的托盘，其中的幼虫为五到六日龄。这些 Ravi 处于更晚的阶段，大约有 9 到 10 天大。在此期间已更换水，并添加了新鲜水和新鲜食物。此托盘中既有成虫，也有 ppe。如您所见，这些成虫正在蚊帐下飞行。在边缘处，您可以看到所有深色的蛹壳，它们将孵化为成虫。一旦获得成虫，就可以将其收集到一个类似这样的笼子中。其内部衬有纸巾，并有一个小瓶，内含10%超级溶液和一块浸有肥皂的棉球，可作为蚊子的食物来源。我们将瓶盖盖好，这是吸蚊器装置，通过连接真空泵，可从这些托盘中收集成蚊。吸蚊器的这一部分在此处连接，另一端也已接通。连接至真空泵。我们将笼子放入，用于收集成虫至这个小盒子中。这是吸蚊器的另一部分，带有一根长管，将插入蚊虫培养盘中。另一端将连接到笼子上。必须确保所有连接处都紧密，以保证真空效果良好。我们合上盖子，并确保所有部位都密封严实。缓慢启动后端设备。一旦装置准备就绪，我们将这段长管缓慢插入蚊虫托盘中，确保关闭网罩，防止蚊虫逸出。如您所见，蚊虫正被收集到小型笼子中。缓慢地将管子移动到各处，以收集所有成虫。现在我几乎完成了。所有成虫都已被收集，它们全部在这个笼子里，你们可以看到。然后缓慢释放真空，拆卸收集装置。这是采集到的冈比亚按蚊成蚊，将把这些蚊子放入笼中饲养数天。它们将饲喂10%的蔗糖溶液，并仅在需要产卵时提供血液供其吸食。我刚刚向您演示了如何使用蚊子。在实验室条件下饲养致倦库蚊（Culex quinquefasciatus）时，关键步骤包括血液喂养。然后放置产卵杯，收集卵，接着它们会经历不同的发育阶段，如幼虫、蛹和成虫。最后，我们收集成蚊。该技术的重要性在于必须模拟自然界中的实际环境条件，以确保获得健康的蚊子，随后用疟原虫感染这些蚊子，并开展多种疟疾相关研究，其主要目标是彻底根除全球的疟疾。

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

蚊子养育的议定书“（冈比亚按蚊）

一旦某个基因被鉴定为可能具有抗疟疾特性，就必须评估其在蚊子体内抑制疟原虫感染的作用。本方案展示了如何检测疟原虫在蚊子体内的感染程度。文中演示了配子体培养的制备、通过膜饲法使蚊子吸食含人类血液的样本，以及检测蚊子中肠内病毒滴度的技术。...

恶性疟原虫蚊虫感染方案及感染表型测定

反向遗传学方法已被证明在确定蚊子对媒介传播病原体抗性相关基因方面极为有效。本视频方案展示了Dimopoulos实验室用于将dsRNA注入冈比亚按蚊（Anopheles...

冈比亚按蚊成蚊RNAi实验方案

通过将两种基因型不同的寄生虫喂给蚊子，可实现啮齿类疟原虫的遗传杂交。在允许蚊子叮咬感染小鼠后，从小鼠血液中分离并克隆重组子代。本视频展示了如何对Plasmodium...

啮齿类疟原虫遗传杂交实验方案

RNA-Seq 分析在揭示非模式生物适应性状分子基础方面正变得越来越重要。本文介绍了一项从蚊子饲养、RNA测序到RNA-Seq数据的生物信息学分析，用于鉴定滞育与非滞育状态的白纹伊蚊（Aedes...

一种用于亚洲虎蚊Aedes albopictus光周期滞育研究的RNA-seq实验与生物信息学分析方案

通过注入微珠，该技术可激活蚊虫血淋巴循环系统中的黑色素化反应。解剖后，可通过测量覆盖在微珠表面的黑色素量来评估免疫反应强度。...

接种 Anopheles gambiae 利用微珠诱导并测量蚊子黑色素化免疫反应

Aedes aegypti 蚊子感染 Wolbachia 后被释放到自然种群中，以抑制节肢动物传播病毒的传播。本文描述了在实验室中培育携带 Wolbachia 感染的 Ae. aegypti...

维持感染 Wolbachia 的 Aedes aegypti 蚊子

提出了一种无血人工饲料的配制方案，用于饲养 按蚊属...

一种无需血液的按蚊饲养食谱

双组分GAL4-UAS系统是一种多功能工具，可用于在可控的时空条件下调控基因表达，从而在Anopheles...

利用GAL4-UAS系统在Anopheles gambiae中进行功能遗传学研究

该方案描述了如何在基因组中实现定点修饰 按蚊属 疟疾蚊子使用 φC31 系统。所描述的修饰包括基因组中转基因盒的整合与置换...

定点 φC31介导的整合与盒式交换 按蚊属 疟疾的传播媒介

昆虫不育技术（SIT）用于控制对化学防治可能具有抗性的特定重要医学蚊虫种群。本文介绍了一种大规模饲养和制备不育雄性蚊虫的方法，以供在针对埃及伊蚊（Aedes...

准备用于绝育昆虫技术项目释放的辐射处理并标记的雄性Aedes aegypti蚊虫

显微注射技术对于将外源基因导入蚊子基因组至关重要。本方案介绍了James实验室用于向Anopheles...

Anopheles gambiae 胚胎的显微注射方法

了解冈比亚按蚊实验室饲养技术，掌握温度湿度控制及人工血饲方法，用于疟疾传播研究与病媒防控。本视频展示从卵到成虫的完整生命周期管理。

冈比亚按蚊（A. gambiae）的饲养方案

探索更多视频