升结肠支架腹膜炎（CASP）——一种用于多微生物性腹腔脓毒症的标准化模型

本实验的总体目标是通过将支架插入小鼠升结肠来诱导腹腔脓毒症。首先需准备升结肠，随后将改良的套管插入结肠并固定到位。

最后，移除支架并将结肠放回腹腔内。最终可通过检测血浆中的细胞因子和细菌计数来获得表明脓毒症的结果。该技术相较于现有的结扎穿刺等方法的主要优势在于，可通过插入支架的大小来调节脓毒症的严重程度和死亡率。

因此，对于初次接触该方法的研究人员而言，可能会遇到一定困难，因为显微外科技术需要一定的练习才能掌握。在达到理想操作水平之前，首先通过腹腔注射麻醉剂对小鼠进行麻醉，并将动物置于仰卧位。需用胶带将小鼠的四肢固定在操作板上，以确保手术过程中动物体位的稳定。

进行此操作时，使用一种常用于人类静脉注射的静脉套管，将其塑料管部分进行修整。在对小鼠腹部皮肤彻底消毒后，从套管尖端环形切开约2毫米，沿腹中线切开约15毫米。沿白线切开腹肌和腹膜，打开腹膜腔。

确定回肠末端，用棉签小心地将回肠末端和升结肠从腹腔内拉出。在回盲瓣远端15毫米处，用7-0缝线穿刺升结肠壁。用两个外科结将缝线固定在结肠壁上。

用准备好的套管穿刺升结肠，在七号缝线近端1至2毫米处。小心将套管插入结肠，直至套管凹槽与塑料管与肝圆韧带处于同一水平。

将7-0缝线的自由端绕过套管，在塑料管预置的凹槽内打一个双重结。取7-0缝线的针头，连续穿过结肠对系膜侧肠壁。打两个外科结，以进一步固定塑料管与结肠壁。

剪断缝合线末端。稍微拔出套管的金属部分，并在靠近固定用的7.0号缝合线处剪断塑料管。然后用棉签小心地将盲肠内的粪便向结肠支架方向推挤，直至有少量粪便尖端出现在支架顶部。

将肠管放回腹膜腔，并通过腹腔内注射0.5毫升生理盐水进行液体复苏。用连续缝合法缝合腹膜。用单个缝合线缝合皮肤以缓解疼痛。

必要时应皮下注射强效镇痛物质（如丁丙诺啡），然后将动物放回笼中，笼内应提供食物和水。在 Casp 处理后 5 小时，再次准备并麻醉小鼠，以对动物实施手术干预。切开腹壁缝合线。

小心地将带有支架的升结肠拉出，仔细剪断固定支架的缝线并取出支架。使用单个内翻缝线闭合结肠缺损。将肠管放回腹腔，并用5 mL生理盐水冲洗腹腔两次。

用连续缝合关闭腹膜。使用单个缝合线缝合皮肤以缓解疼痛。定期皮下注射强效镇痛物质。

术后前两天内将动物放回笼中，并提供充足的食物和水。CASP手术后数小时内，每六小时监测一次动物状况。动物会出现早期败血症的临床症状。CASP手术后的存活率取决于所插入支架的直径：14号规格CASP的死亡率为100%，16号规格CASP的死亡率为70%，18号规格CASP的死亡率为50%。

假手术组的存活率为100%。CASP手术的结果取决于时间长短。在CASP术后，当支架被移除时，若在CSP后3小时进行干预，动物的存活率为45%；若在CSP后5小时移除支架，仅有10%的动物能够存活；若在CSP后9小时才移除支架，则死亡率达到100%。假手术组的CASP操作可实现100%的存活率。

腹腔镜检查在CSP术后24小时可见典型的腹膜炎体征，包括水肿、血管扩张、肠鸣音消失、肠壁界限清晰的坏死灶、肠麻痹、游离液体以及脓性分泌物。通过细菌学分析可在CSP术后12小时证实全身性感染。在腹腔灌洗液、血液、肝脏、肺脏、脾脏和肾脏中均可检测到大量细菌。

CSP 诱导的脓毒症表现为局部以及全身性促炎和抗炎细胞因子及趋化因子的释放。在 CSP 12 小时后，可通过 ELISA 在血液中检测到大量 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1 等因子，同样也可在肝脏、肺、脾脏和肾脏等器官悬液的上清液中检测到。一旦掌握该技术，若操作得当，可在 10 分钟内完成。

观看本视频后，您应该能够充分掌握如何利用 SSP 模型以及 SSP 干预模型来建立腹腔感染性脓毒症。以上就是全部内容。感谢您的观看，祝您的实验顺利成功。