Name: 科隆Ascendens支架腹膜炎（CASP） - 标准化的模式为多种微生物腹部败血症 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-18T18:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 了解科隆Ascendens支架腹膜炎（CASP）模型在小鼠中诱导多种微生物腹部败血症的标准化手术方法。该技术通过调节支架尺寸控制死亡率，为败血症机制研究提供可重复的临床前模型。

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作者感谢Nico Zantl、Klaus Pfeffer和Bernhard Holzmann。本研究由德国波恩-巴特戈德斯贝格的德意志研究联合会（Deutsche Forschungsgemeinschaft）资助（GRK-840；Vo 450/10-1）。

1. 小鼠的准备
<ol>
<li>通过腹腔注射麻醉液（见试剂表）使小鼠麻醉，并将其置于仰卧位。</li>
<li>需用胶带将小鼠的四肢固定在板上，以确保手术过程中动物位置稳定。</li>
</ol>
2. 操作
<ol>
<li>取一个常用于人体静脉注射的静脉套管，在距其尖端约2 mm处将塑料管环形切开。我们使用三种不同规格的套管以控制死亡率（BD Venflon 18GA (1.2×45 mm, 80 mL/min)；16GA (1.7×45 mm, 180 mL/min)；14GA (2.0×45 mm, 270 mL/min)）。</li>
<li>彻底消毒腹部皮肤后，沿中线切开约15 mm。沿腹白线切开腹肌和腹膜，打开腹膜腔。</li>
<li>辨认盲肠末端，使用棉签小心地将盲肠、回肠末端和升结肠从腹腔内拉出。</li>
<li>在回盲瓣远端15 mm处，用7/0缝线穿刺升结肠壁，注意避免损伤肠壁血管。通过两个外科结将缝线固定在结肠壁上。</li>
<li>现在用已准备好的套管在7/0缝线近端1–2 mm处穿刺升结肠。小心地将套管插入结肠，直至塑料管上的凹槽与浆膜层平齐。</li>
<li>将7/0缝线的游离端绕过套管，并在塑料管的预置凹槽处打一个双结。</li>
<li>然后取7/0缝线的针头，将其穿过结肠的对系膜侧肠壁。连续打两个外科结，以进一步将塑料管固定于结肠壁上。剪除缝线末端。</li>
<li>轻轻退出套管的金属部分，并在紧邻（约1 mm）7/0固定缝线处剪断塑料管。</li>
<li>使用棉签小心地将盲肠内的粪便向结肠支架方向推挤，直到支架顶端出现少量粪便为止。</li>
<li>将肠管复位至腹膜腔内，并通过腹腔内注射0.5 mL生理盐水进行液体复苏。</li>
<li>用连续缝合法（4/0缝线）关闭腹膜。</li>
<li>用间断缝合法（4/0缝线）关闭皮肤。</li>
</ol>
3. 术后护理
<ol>
<li>将动物放回笼中，笼内应备有足够的食物和水。为缓解疼痛，应定期进行腹腔注射强效镇痛药物（我们使用丁丙诺啡）。</li>
<li>术后前两天内，需每6小时检查动物一次。</li>
</ol>
4. 假手术对照组（Sham CASP）
<ol>
<li>执行步骤 1.1-2.4。</li>
<li>不要穿刺结肠。仅执行步骤 2.6-2.8。</li>
<li>执行步骤 2.10-3.2。</li>
</ol>
5. CASPI
<ol>
<li>使用14G套管针按照步骤1.1-3.1进行CASP操作</li>
<li>CASP术后5小时，需再次对动物进行手术。根据步骤1.1-1.2重新准备并麻醉小鼠</li>
<li>切开腹壁缝线</li>
<li>将带有支架的升结肠轻轻拉出</li>
<li>小心剪断固定支架的缝线，并移除支架</li>
<li>使用单个倒置缝合线（7/0）闭合结肠缺损处</li>
<li>将肠道复位至腹腔内，并用10 mL生理盐水冲洗腹腔两次</li>
<li>使用连续缝合线（4/0）缝合腹膜</li>
<li>使用单个缝合线（4/0）缝合皮肤</li>
<li>执行步骤3.1-3.2</li>
</ol>
6. 代表性结果
术后数小时内，动物即出现早期脓毒症的临床症状。该疾病的典型症状包括活动能力下降、毛发竖立、出汗、摄食量减少、体重减轻以及逃避行为减弱。发生严重腹膜炎并继发全身性感染的动物通常在48小时内死亡。根据植入的套管针尺寸不同，可产生不同的死亡率。使用14G套管针可导致100%死亡率，16G套管针约为70%死亡率，而使用18G套管针可达到约50%的死亡率（图1a）。假手术组动物的存活率为100%。通常情况下，所有死亡均发生在CASP术后最初的48小时内，因此在此时间点仍存活的动物可被视为幸存者。然而，我们建议额外延长至少72小时的观察期，以发现CASP术后罕见的“晚期死亡”情况。
CASPI 的结果取决于 CASP 后支架移除的时间间隔。在 CASP 后 3 小时进行干预，动物的存活率为 45%；若在 CASP 后 5 小时移除支架，仅有 10% 的动物能够存活；而在 CASP 后 9 小时移除支架，则死亡率达到 100%（图 1b）。假手术组的 CASPI 动物存活率为 100%。对于 CASPI 实验设置，我们建议观察期为 10 天，因为通常会有动物在 CASP 后超过 48 小时才死亡。
CASP术后24小时对腹部解剖结构进行肉眼检查，可见典型的腹膜炎体征：水肿、血管扩张、肠壁发红、派尔集合淋巴结分界清晰、肠麻痹、游离液体以及脓性分泌物（图2）。
通过细菌学分析可以显示全身性感染。在CASP术后12小时，可在腹腔灌洗液、血液、肝脏、肺脏、脾脏和肾脏中检测到大量细菌。对细菌的定性分析显示，典型的肠道细菌（如E. coli、拟杆菌属、肠球菌属等）引起了全身性感染（图3）。
CASP诱导的脓毒症表现为局部以及全身性促炎性和抗炎性细胞因子与趋化因子的释放。CASP术后12小时，可通过ELISA在血液以及器官悬液（如肝脏、肺、脾脏、肾脏）的上清液中检测到大量TNF、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1及其他因子（图4）。
在实验室建立CASP模型时，应将存活率、细菌学和细胞因子释放作为评估CASP操作是否正确的控制参数。此后，这些参数可作为所有实验条件下标准的检测指标系统。
<img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig1.jpg" alt="Kaplan-Meier生存分析图；治疗组包括14G、16G、18G、假手术组及CASPI条件。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 图1a：CASP术后生存率。CASP手术后的生存率取决于所插入支架的直径。14G CASP导致100%的死亡率，16G CASP导致70%的死亡率，而18G CASP导致50%的死亡率。假手术CASP的生存率为100%。每组n=20。B： CASPI手术后的生存率取决于支架移除的时间。在14G CASP后3小时移除支架，死亡率为55%；在14G CASP后5小时移除支架，死亡率为90%；而在14G CASP后9小时移除支架，则死亡率达到100%。假手术CASPI（5小时）的生存率为100%。每组n=10（假手术CASPI；CASPI 9小时组），每组n=20（3小时CASPI组；5小时CASPI组）。
<img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig2.jpg" alt="假手术组与CASP组小鼠肠道组织比较；炎症的可视化分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图2"> 图2：CASP术后24小时腹部解剖情况。分别在16G CASP或假手术CASP术后24小时去除腹壁。假手术组小鼠的腹部解剖结构呈现生理状态。相比之下，CASP术后出现水肿、充血、肠管扩张以及派尔集合淋巴结（Peyer's patches）边界清晰可见，提示存在严重的腹膜炎。
<img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig3.jpg" alt="血液样本在3小时和12小时的菌落计数柱状图；生长比较，微生物分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图3"> 图3：细菌学分析。CASP手术后12小时内，肠道细菌可导致多个腔室和器官发生严重感染。细菌数量以每毫升菌落形成单位（cfu）表示。假手术小鼠的细菌培养完全无菌（未显示）。16G CASP，每组n=5。
<img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig4.jpg" alt="血浆细胞因子水平图表：3小时和12小时时的TNF、IL-6、IL-10；单位为pg/ml，研究数据。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图4"> 图4：细胞因子。CASP可引发全身性免疫反应，多种细胞因子和趋化因子可在血浆及器官上清液中检测到。该图示例性地展示了促炎性细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）和白细胞介素-6（IL-6），以及主要具有抗炎作用的IL-10。CASP术后12小时，可在血浆、肝脏、肺和脾脏中检测到显著水平的细胞因子。然而，CASP术后在肺和脾脏中无法检测到IL-10。假手术组未引起任何细胞因子分泌（未显示）。16G CASP，每组n=5。

<ol><li>Maier, S., Traeger, T., Entleutner, M., Westerholt, A., Kleist, B., Huser, N., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cecal+ligation+and+puncture+versus+colon+ascendens+stent+peritonitis%3A+two+distinct+animal+models+for+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Cecal ligation and puncture versus colon ascendens stent peritonitis: two distinct animal models for polymicrobial sepsis.</a> Shock. 21, 505-511 (2004).</li>
<li>Bougaki, M., Searles, R. J., Kida, K., Yu, J. D. e, Buys, E. S., Ichinose, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOS3+protects+against+systemic+inflammation+and+myocardial+dysfunction+in+murine+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">NOS3 protects against systemic inflammation and myocardial dysfunction in murine polymicrobial sepsis.</a> Shock. , (2009).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li>
<li>Busse, M., Traeger, T., Potschke, C., Billing, A., Dummer, A., Friebe, E., Kiank, C., Grunwald, U., Jack, R. S., Schutt, C., Heidecke, C. D., Maier, S., Broker, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+role+for+CD4%2B+T+lymphocytes+in+murine+diffuse+peritonitis+due+to+inhibition+of+local+bacterial+elimination%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Detrimental role for CD4+ T lymphocytes in murine diffuse peritonitis due to inhibition of local bacterial elimination.</a> Gut. 57, 188-195 (2008).</li>
<li>Daubeuf, B., Mathison, J., Spiller, S., Hugues, S., Herren, S., Ferlin, W., Kosco-Vilbois, M., Wagner, H., Kirschning, C. J., Ulevitch, R., Elson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4%2FMD-2+monoclonal+antibody+therapy+affords+protection+in+experimental+models+of+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR4/MD-2 monoclonal antibody therapy affords protection in experimental models of septic shock.</a> J Immunol. 179, 6107-6114 (2007).</li>
<li>Entleutner, M., Traeger, T., Westerholt, A., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Maier, S., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+interleukin-12%2C+oxidative+burst%2C+and+iNOS+on+the+survival+of+murine+fecal+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Colorectal+Dis%22%5BJournal%5D)">Impact of interleukin-12, oxidative burst, and iNOS on the survival of murine fecal peritonitis.</a> Int J Colorectal Dis. 21, 64-70 (2006).</li>
<li>Kerschen, E. J., Fernandez, J. A., Cooley, B. C., Yang, X. V., Sood, R., Mosnier, L. O., Castellino, F. J., Mackman, N., Griffin, J. H., Weiler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endotoxemia+and+sepsis+mortality+reduction+by+non-anticoagulant+activated+protein%5BTitle%5D)+AND+%22C.+J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Endotoxemia and sepsis mortality reduction by non-anticoagulant activated protein.</a> C. J Exp Med. 204, 2439-2448 (2007).</li>
<li>Kiank, C., Koerner, P., Kessler, W., Traeger, T., Maier, S., Heidecke, C. D., Schuett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+variations+in+inflammatory+responses+to+sepsis+and+stress+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Seasonal variations in inflammatory responses to sepsis and stress in mice.</a> Crit Care Med. 35, 2352-2358 (2007).</li>
<li>Lustig, M. K., Bac, V. H., Pavlovic, D., Maier, S., Grundling, M., Grisk, O., Wendt, M., Heidecke, C. D., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colon+ascendens+stent+peritonitis--a+model+of+sepsis+adopted+to+the+rat%3A+physiological%2C+microcirculatory+and+laboratory+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Colon ascendens stent peritonitis--a model of sepsis adopted to the rat: physiological, microcirculatory and laboratory changes.</a> Shock. 28, 59-64 (2007).</li>
<li>Traeger, T., Kessler, W., Assfalg, V., Cziupka, K., Koerner, P., Dassow, C., Breitbach, K., Mikulcak, M., Steinmetz, I., Pfeffer, K., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+role+of+CC+chemokine+receptor+4+in+murine+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Detrimental role of CC chemokine receptor 4 in murine polymicrobial sepsis.</a> Infect Immun. 76, 5285-5293 (2008).</li>
<li>Traeger, T., Kessler, W., Hilpert, A., Mikulcak, M., Entleutner, M., Koerner, P., Westerholt, A., Cziupka, K., Rooijen, N. van, Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+depletion+of+alveolar+macrophages+in+polymicrobial+sepsis+increases+lung+injury%2C+bacterial+load+and+mortality+but+does+not+affect+cytokine+release%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Selective depletion of alveolar macrophages in polymicrobial sepsis increases lung injury, bacterial load and mortality but does not affect cytokine release.</a> Respiration. 77, 203-213 (2009).</li>
<li>Traeger, T., Mikulcak, M., Eipel, C., Abshagen, K., Diedrich, S., Heidecke, C. D., Maier, S., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cell+depletion+reduces+hepatic+inflammation+and+apoptosis+but+decreases+survival+in+abdominal+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Kupffer cell depletion reduces hepatic inflammation and apoptosis but decreases survival in abdominal sepsis.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. , (2010).</li>
<li>Weighardt, H., Kaiser-Moore, S., Schlautkotter, S., Rossmann-Bloeck, T., Schleicher, U., Bogdan, C., Holzmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+IFN+modulates+host+defense+and+late+hyperinflammation+in+septic+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Type I IFN modulates host defense and late hyperinflammation in septic peritonitis.</a> J Immunol. 177, 5623-5630 (2006).</li>
<li>Zantl, N., Uebe, A., Neumann, B., Wagner, H., Siewert, J. R., Holzmann, B., Heidecke, C. D., Pfeffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+gamma+interferon+in+survival+of+colon+ascendens+stent+peritonitis%2C+a+novel+murine+model+of+abdominal+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Essential role of gamma interferon in survival of colon ascendens stent peritonitis, a novel murine model of abdominal sepsis.</a> Infect Immun. 66, 2300-2309 (1998).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

CASP 是一种多微生物性腹腔脓毒症模型，符合有价值脓毒症模型的大多数标准：CASP 可在小型动物中实施，具有高度可重复性，可通过标准参数轻松监测，提供良好的检测读出可能性，并且能高度模拟临床腹腔脓毒症的情况。在一项比较研究中，我们已证明 CASP 会导致弥漫性腹膜炎，并伴随早期出现且持续加重的全身感染和炎症（全身炎症反应综合征）；而盲肠结扎穿刺术（CLP）则表现为一种腹腔内脓肿形成的模型，其全身炎症反应持续但较轻微（1）。CASP 技术的改进版本（CASPI）能够模拟腹膜炎的临床病程，并可连续进行手术病灶清除，后者是人类治疗中最关键的治疗原则。CASP 可用于研究脓毒症或腹膜炎相关的所有问题，因此适用于所有涉及脓毒症研究的学科，例如免疫学、药理学、外科学、重症医学等。以下列出了一些应用 CASP 模型研究脓毒症不同主题的部分出版物（1-14）。
刚开始进行CASP操作时，应注意需要一定的练习才能准确且快速地完成手术。具备外科经验可能有所帮助，但并非必需。我们建议将致死率作为评估CASP操作是否正确的参数。初学者应从14G CASP开始，因为较粗的支架比更细的支架更容易操作。一名熟练的CASP外科操作人员可在10分钟内完成一只小鼠的手术。在开始任何实验之前，应确保自己已接近这一操作时间。当您积累了一定的手术操作经验后，应进行一次生存动力学检测以评估您的操作技能。14G CASP应达到100%的致死率。我们实验室的初学者必须证明其能够使用14G CASP实现100%致死率后，方可开始正式实验。此外，应进行细菌学检测和细胞因子测定，以确认脓毒症模型的建立。 
如果在CASP显微外科步骤的初期遇到困难，使用放大镜或手术显微镜可能会有所帮助。但原则上，CASP无需这些设备也能顺利完成。为了重现我们的生存率结果，必须使用相同的材料，尤其是支架（BD Venflon，见下文）。否则，结果可能出现显著差异。此外，我们提示结果可能因例如操作者个体差异等因素而有所不同。然而，此类因素的影响应当较小。
总之，CASP 是一种切实可行、简单、可重复且有价值的脓毒症模型，能紧密模拟腹腔脓毒症的临床情况，因此适用于所有脓毒症研究领域。

<table><tbody><tr><td>麻醉液</td><td></td><td></td><td>将0.5 mL Rompun与4.0 mL Ketanest混合，再加入5.5 mL生理盐水（0.9%）。为实现完全麻醉，按10 &amp;#x03BC;L/g体重剂量腹腔注射</td></tr><tr><td>Rompun（20 mg/mL 塞拉嗪）</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketanest（25 mg/mL 乙氯胺酮）</td><td>Pfizer Pharma GmbH</td><td>647028001E</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon 18GA（1.2×45 mm，80 mL/min）</td><td>BD Biosciences</td><td>391457</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon 16GA（1.7×45 mm，180 mL/min）</td><td>BD Biosciences</td><td>391455</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon 14GA（2.0×45 mm，270 mL/min）</td><td>BD Biosciences</td><td>391456</td><td></td></tr><tr><td>白色4/0聚酯肠线，不可吸收</td><td>Catgut GmbH</td><td>17218113</td><td></td></tr><tr><td>黑色7/0 Mariderm，不可吸收</td><td>Catgut GmbH</td><td>18104900</td><td></td></tr></tbody></table>

升结肠支架腹膜炎（casp）——一种用于多微生物性腹腔脓毒症的标准化模型

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

脓毒症仍然是全球重症监护病房中持续存在的难题。深入了解脓毒症复杂的发病机制，是建立新型治疗策略的前提条件。因此，需要能够高度模拟人类疾病并充分满足科学问题研究需求的动物模型。升结肠支架腹膜炎（Colon Ascendens Stent Peritonitis, CASP）是一种高度标准化的啮齿类动物多微生物性腹腔脓毒症模型。在该模型中，通过手术将一根小型支架植入小鼠或大鼠的升结肠，导致肠道细菌持续泄漏至腹腔。该操作可引发腹膜炎、全身性菌血症、肠道细菌引起的器官感染，以及多种促炎性和抗炎性细胞因子的全身性及局部释放。CASP模型的致死率可通过植入支架的直径进行调控。该模型的一种变体，即所谓的带干预的CASP（CASP with intervention, CASPI），模拟临床实践中的常规处理方式，允许通过第二次手术清除感染灶。CASP是一种易于掌握且高度可重复的模型，能紧密模拟腹腔脓毒症的临床病程，为免疫学、感染病学或外科学等多个科研领域的问题研究提供了重要途径。

升结肠支架腹膜炎（CASP）是一种高度标准化的啮齿类动物多微生物性腹腔脓毒症模型。本文描述了CASP的手术操作过程。CASP模型及其变体可用于系统性地研究与脓毒症相关的各种问题。

升结肠支架腹膜炎（CASP）——一种用于多微生物性腹腔脓毒症的标准化模型

脓毒症仍然是全球重症监护病房持续存在的难题。理解脓毒症复杂的发病机制是……

本实验的总体目标是通过将支架插入小鼠升结肠来诱导腹腔脓毒症。首先需准备升结肠，随后将改良的套管插入结肠并固定到位。最后，移除支架并将结肠放回腹腔内。最终可通过检测血浆中的细胞因子和细菌计数来获得表明脓毒症的结果。该技术相较于现有的结扎穿刺等方法的主要优势在于，可通过插入支架的大小来调节脓毒症的严重程度和死亡率。因此，对于初次接触该方法的研究人员而言，可能会遇到一定困难，因为显微外科技术需要一定的练习才能掌握。在达到理想操作水平之前，首先通过腹腔注射麻醉剂对小鼠进行麻醉，并将动物置于仰卧位。需用胶带将小鼠的四肢固定在操作板上，以确保手术过程中动物体位的稳定。进行此操作时，使用一种常用于人类静脉注射的静脉套管，将其塑料管部分进行修整。在对小鼠腹部皮肤彻底消毒后，从套管尖端环形切开约2毫米，沿腹中线切开约15毫米。沿白线切开腹肌和腹膜，打开腹膜腔。确定回肠末端，用棉签小心地将回肠末端和升结肠从腹腔内拉出。在回盲瓣远端15毫米处，用7-0缝线穿刺升结肠壁。用两个外科结将缝线固定在结肠壁上。用准备好的套管穿刺升结肠，在七号缝线近端1至2毫米处。小心将套管插入结肠，直至套管凹槽与塑料管与肝圆韧带处于同一水平。将7-0缝线的自由端绕过套管，在塑料管预置的凹槽内打一个双重结。取7-0缝线的针头，连续穿过结肠对系膜侧肠壁。打两个外科结，以进一步固定塑料管与结肠壁。剪断缝合线末端。稍微拔出套管的金属部分，并在靠近固定用的7.0号缝合线处剪断塑料管。然后用棉签小心地将盲肠内的粪便向结肠支架方向推挤，直至有少量粪便尖端出现在支架顶部。将肠管放回腹膜腔，并通过腹腔内注射0.5毫升生理盐水进行液体复苏。用连续缝合法缝合腹膜。用单个缝合线缝合皮肤以缓解疼痛。必要时应皮下注射强效镇痛物质（如丁丙诺啡），然后将动物放回笼中，笼内应提供食物和水。在 Casp 处理后 5 小时，再次准备并麻醉小鼠，以对动物实施手术干预。切开腹壁缝合线。小心地将带有支架的升结肠拉出，仔细剪断固定支架的缝线并取出支架。使用单个内翻缝线闭合结肠缺损。将肠管放回腹腔，并用5 mL生理盐水冲洗腹腔两次。用连续缝合关闭腹膜。使用单个缝合线缝合皮肤以缓解疼痛。定期皮下注射强效镇痛物质。术后前两天内将动物放回笼中，并提供充足的食物和水。CASP手术后数小时内，每六小时监测一次动物状况。动物会出现早期败血症的临床症状。CASP手术后的存活率取决于所插入支架的直径：14号规格CASP的死亡率为100%，16号规格CASP的死亡率为70%，18号规格CASP的死亡率为50%。假手术组的存活率为100%。CASP手术的结果取决于时间长短。在CASP术后，当支架被移除时，若在CSP后3小时进行干预，动物的存活率为45%；若在CSP后5小时移除支架，仅有10%的动物能够存活；若在CSP后9小时才移除支架，则死亡率达到100%。假手术组的CASP操作可实现100%的存活率。腹腔镜检查在CSP术后24小时可见典型的腹膜炎体征，包括水肿、血管扩张、肠鸣音消失、肠壁界限清晰的坏死灶、肠麻痹、游离液体以及脓性分泌物。通过细菌学分析可在CSP术后12小时证实全身性感染。在腹腔灌洗液、血液、肝脏、肺脏、脾脏和肾脏中均可检测到大量细菌。CSP 诱导的脓毒症表现为局部以及全身性促炎和抗炎细胞因子及趋化因子的释放。在 CSP 12 小时后，可通过 ELISA 在血液中检测到大量 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1 等因子，同样也可在肝脏、肺、脾脏和肾脏等器官悬液的上清液中检测到。一旦掌握该技术，若操作得当，可在 10 分钟内完成。观看本视频后，您应该能够充分掌握如何利用 SSP 模型以及 SSP 干预模型来建立腹腔感染性脓毒症。以上就是全部内容。感谢您的观看，祝您的实验顺利成功。

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科隆Ascendens支架腹膜炎（CASP） - 标准化的模式为多种微生物腹部败血症

盲肠结扎穿刺小鼠模型作为研究人类脓毒症的重要工具。...

盲肠结扎穿刺术

脓毒症是指由微生物感染引发的全身性炎症反应综合征，可通过一种称为盲肠结扎穿刺（CLP）的手术技术进行模拟。本文介绍了一种利用CLP诱导的动物模型筛选具有治疗作用的药用植物的方法。...

利用脓毒症动物模型评价新型草药疗法

可通过盲肠结扎穿刺（CLP）法在小鼠中诱导实验性脓毒症。目前评估自噬的方案 体内...

盲肠结扎穿刺诱导脓毒症作为研究小鼠自噬的模型

本方案描述了在免疫抑制状态下测量继发性医院获得性感染相关传染性结局的技术，首先通过建立盲肠结扎/穿刺小鼠模型，然后对其进行鼻内感染攻击，以构建具有临床相关性的免疫抑制脓毒症模型。...

脓毒症诱导免疫抑制的盲肠结扎穿刺联合鼻内感染双模型设计

本文介绍了一种可重复的大鼠重症监护病房导向型内毒素模型。...

一种可重复的面向重症监护病房的大鼠内毒素模型

本方案介绍了在脓毒症小鼠模型中进行盲肠结扎穿刺（CLP）的操作细节。CLP是建立脓毒症动物模型最常用的实验技术之一。因此，为获得可靠的研究结果，需要采用标准化的CLP操作流程。...

脓毒症小鼠盲肠结扎穿刺模型中可靠生物标志物的评估

本方案描述了在小鼠模型系统中诱导革兰氏阴性单菌性败血症的方法。该模型可用于研究败血症期间的炎症反应及致死性宿主反应。...

表征 沙门氏菌 小鼠中由伤寒沙门菌诱导的败血性腹膜炎

为了改善伴有胰周脓肿的坏死性胰腺炎患者的引流效果，并降低坏死性胰腺炎患者的死亡率，我们采用经腹膜后入路的腹腔镜下胰周脓肿清创引流术。...

经腹膜后腹腔镜胰腺脓肿清创引流术

本方案提供了建立和评估7日龄小鼠新生儿败血症所需的步骤。...

一种用于新生儿多微生物败血症的受控小鼠模型

本文描述了一种利用高频超声成像技术在腹主动脉瘤小鼠模型上测量管腔直径、脉搏传播速度、可扩张性和径向应变的详细实验方案。...

腹主动脉瘤小鼠模型中脉搏传播速度、可扩张性和应变的测量

了解科隆Ascendens支架腹膜炎（CASP）模型在小鼠中诱导多种微生物腹部败血症的标准化手术方法。该技术通过调节支架尺寸控制死亡率，为败血症机制研究提供可重复的临床前模型。

升结肠支架腹膜炎（CASP）——一种用于多微生物性腹腔脓毒症的标准化模型

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