向新生大鼠皮质脊髓神经元靶向递送病毒以研究脊髓损伤

以一只麻醉后经手术暴露颈段脊髓的新生大鼠开始。

该大鼠已注射了一种编码设计受体和荧光蛋白的顺行性病毒，该病毒靶向大脑体感运动皮层中的皮质脊髓束（CST）神经元。

利用脊髓动脉确定脊髓的中线。

将一根装有编码重组酶的逆行病毒的玻璃针置于目标脊髓板层后方，该位置含有皮质脊髓束轴突末梢。

将针头插入脊髓并注射病毒。

让病毒扩散，然后缓慢撤出针头并缝合切口。

病毒进入CST轴突末梢，并逆向运输至细胞体，在细胞体中表达重组酶。

该酶可激活顺行病毒递送的转基因，从而仅在双重感染的神经元中表达设计受体和荧光蛋白。此方法可实现对脊髓损伤中皮质脊髓束神经元的靶向分析。

进行脊髓内直接注射时，通过识别脊髓动脉，使用玻璃注射针的尖端大致定位脊髓的中线位置。

接下来，将针头置于C5椎板后方中线附近位置，并以此作为参考点。随后，使用显微操作器将针头向右侧横向移动0.3毫米，并缓慢下放针头，直至其刚好接触脊髓表面。

从此深度将针头刺入脊髓0.6毫米。以每分钟250纳升的速度注射1微升携带Cre重组酶基因的逆行腺相关病毒2型。然后等待两分钟，使病毒扩散至脊髓组织，再缓慢撤出针头。