0 次观看 • 6:05 分钟 • August 29th, 2025
固定一只已麻醉的妊娠小鼠，使其子宫暴露，内含神经管未闭合期的胚胎。在此阶段，神经板处于开放状态，直接暴露于羊水中。
将选定的胚胎置于带有弹性膜的培养皿中以固定胚胎。固定胚胎并加入生理盐水以保持湿润。
将超声探头对准胚胎，测量羊膜腔直径以计算最佳注射体积。
将含有高滴度慢病毒溶液的纳米注射针置于目标胚胎上方，角度接近垂直。
将精确的少量液体注入羊膜腔，轻轻回撤针头并取出超声探头。
轻轻地将胚胎推回小鼠体内。
注射的慢病毒与神经板细胞融合，释放其遗传物质，该遗传物质经逆转录为DNA后整合到宿主基因组中。
这使得神经板细胞中的基因操作更加稳定，有助于潜在的治疗应用。
用镊子夹住胚胎之间的组织，小心地将两侧的子宫角从腹腔中拉出。从两侧的卵巢到宫颈或从宫颈到卵巢方向，对胚胎进行计数并编号。
接下来，用湿润的棉签轻轻将所有胚胎推回腹腔，仅留下待注射的前三个胚胎。然后，在商品化的改良培养皿圆形中央开口处粘附的弹性膜上滴加一滴 PBS，并立即将其置于胚胎上方。将闭合的镊子插入弹性膜的切口内，随后松开镊子以撑开弹性膜切口，使液体滴落到胚胎上。
用镊子将子宫中对应三个胚胎的部分穿过弹性膜，并轻轻将培养皿置于小鼠腹部上方。使用四个黏土支脚将培养皿固定在腹部上方，以减少对小鼠的压力，同时降低成像对小鼠呼吸和心跳的敏感性。接着，用镊子和湿润的棉签调整子宫和弹性膜的位置，确保弹性膜与小鼠皮肤紧密贴合，防止 PBS 渗漏。
接下来，为了固定子宫，将塑形黏土圆柱体压在胚胎或子宫的右侧，并向培养皿中加入 PBS，直至胚胎和子宫完全被 PBS 覆盖。为了便于记录注射过程，将超声探头浸入 PBS 中，并调整小鼠或手术台的位置，使第一个胚胎与超声探头对齐。依次扫描全部三个胚胎，并检查羊膜腔。
然后，使用超声波仪器测量羊膜腔的直径，以确定合适的注射体积。使用注射控制器，设定已确定的注射体积，并将注射速度设为慢速，注射速率为每秒23纳升。将针头插入PBS溶液后，利用轨道系统上的主控旋钮，按压纳米注射控制器上的“排空”按钮，直至液体到达针尖。
然后，将针头从 PBS 中提起，按下“注射”以确认释放出一滴体积接近所需量的液体。再次将针头插入 PBS 中，并使用显微操作器的 Y 平面轮移动纳米注射仪，使针头与超声探头及胚胎对齐。通过调节注射角度轮来调整针头角度，确保针头相对于子宫壁接近垂直注射。
然后，使用显微操作仪上的注射转轮，将针头一次性插入羊膜腔。如果针尖在超声图像中消失，可前后移动探头，使针尖重新回到焦点范围内。随后，按压“注射”按钮相应次数，注入所需体积的液体。
在注入所需体积后，等待5到10秒，然后轻柔地一次性撤出针头。
接下来，使用显微操作器将超声探头和针头从 PBS 中提起，同时将针头转向远离操作者的方向，以避免损坏和造成伤害。
使用镊子，通过轻轻推动弹性组织，将第一和第二枚胚胎放回腹腔内。
在完成所有具有最佳羊膜腔的胚胎注射后，轻柔地将胚胎和子宫推回小鼠腹腔内。