在大鼠模型中注射自组装肽和神经前体细胞以修复脊髓损伤

将一只已麻醉且具有颈椎脊髓损伤的大鼠固定在立体定位仪上。

损伤部位由受损的轴突和充满液体的空腔组成，周围聚集着浸润的免疫细胞、胶质细胞和成纤维细胞，这些成分阻碍了轴突的再生和功能恢复。

消毒脊柱上方的皮肤并做切口。解剖肌肉以暴露脊髓的外层覆盖物——硬脊膜。

切除硬脑膜上的瘢痕组织，以暴露脊髓损伤部位。

将装有自组装肽（SAPs）的微量注射器置于病灶上方，并

将它们注射到中线一侧的病灶核心区域。

在对侧重复注射，以实现均匀分布。

接下来，在损伤周围部位注射神经前体细胞（NPCs），避免注入炎症性损伤核心区域，以提高NPCs的存活率。

注射后，SAPs 会自组装形成一种模拟细胞外基质并连接空腔的支架结构。该支架可支持神经前体细胞（NPC）的存活，并促进其分化为神经细胞，从而实现组织重塑。

在脊髓损伤后14天进行注射。手术开始前，将SAPs以1%（重量/体积）的浓度溶于无菌水中，配制成溶液，并用该溶液填充连接至汉密尔顿注射器的100微米玻璃毛细管。

将 Hamilton 注射器连接到立体定位仪上。麻醉大鼠后，将其头部固定在立体定位仪中，并如前所述使用聚维酮碘和 70% 酒精对手术区域进行消毒。再次切开皮肤后，仔细分离一对椎旁肌，并插入牵开器。

使用15号手术刀去除硬脊膜上的瘢痕组织，重新暴露病变部位。然后用锐利针尖小心切开硬脊膜。最后，通过立体定位将玻璃毛细管插入损伤的脊髓组织中，深度为两毫米，并注入SAPs。

注射SAPs后，将毛细管保留在注射部位一分钟，再行移除，以使组织充分伸展并适应注入的溶液。随后在下一个位点重复注射操作。本实验中，NPCs从成年DS红色小鼠的室管膜下区分离，并依据先前发表的方法进行培养。

显微注射前，将神经前体细胞（NPCs）用生长培养基稀释至浓度为每微升50 × 10³个活细胞，用于细胞移植，并装载至Hamilton注射器的玻璃毛细管中。在施万细胞前体（SAPs）注射完成后立即注射NPCs。操作时，将Hamilton注射器的玻璃毛细管插入损伤部位前方0.2毫米、脊髓背侧表面下方1.5毫米处。

以每分钟约 0.5 微升的速度注入 2 微升细胞悬液。第一次注射完成后，与之前相同，使毛细管在脊髓中保留 1 分钟。然后回撤毛细管，将其移至相邻部位并重复注射操作。与之前相同，在等待 1 分钟后，回撤毛细管并将其向头侧移动 2 毫米至损伤部位。

在此位置进行两次两微升的注射。