立体定向移植神经细胞悬液至创伤性脑损伤小鼠

从连接在立体定位注射泵上的预装注射器开始。

注射器中含有由人诱导多能干细胞衍生的神经细胞悬液。

将针头置于具有创伤性脑损伤的小鼠经手术暴露的大脑皮层上方。

将注射器 lowered 下降至针尖接触硬脑膜，调整坐标以对准损伤部位，然后轻微回撤。现在，

制作一个小切口，为针头建立进入点。

接着，降低活塞以允许细胞悬液流动。

降低针头并穿透脑组织，到达深部皮层的灰质-白质交界处。

最后，在用生理盐水灌洗手术部位以保持水合状态的同时，缓慢输注细胞悬液。

操作完成后，拔出针头，再次冲洗，并缝合切口。

随着时间的推移，移植的细胞逐渐成熟，恢复神经回路，并修复脑损伤。

开颅术后约24小时，将小鼠重新放入立体定位仪中。

用带窗手术巾覆盖小鼠。用无菌生理盐水冲洗切口部位，以清洁局部并松解缝线。使用浸有70%乙醇的棉签轻轻消毒切口部位，并用精细镊子和眼科剪去除缝线。

然后用大量无菌生理盐水冲洗手术区域和颅骨切除部位。在细胞培养生物安全柜中，轻轻旋转或轻敲细胞管，以确保细胞悬液均匀。使用微量移液器从哈密尔顿注射器的推杆端吸入约7.5微升细胞悬液。

将注射器以120度角持握，针筒推杆末端朝下，插入推杆时注意避免在细胞悬液与推杆尖端之间引入气泡。将垫圈组件连接到移液针上，并将针头安装到注射器上。推动推杆，使细胞悬液进入移液针，然后将注射器安装到立体定位注射泵上。

推进活塞，确保注射泵组件正常工作，并将针头移至注射坐标位置。将针尖对准前囟，设定 x 和 y 坐标为零。将针尖移至颅骨开窗处，位于前囟外侧 2 毫米、后方 1 毫米处，并使针尖接触硬脑膜表面。

将针头略微抬起，然后在针尖接触处的硬脑膜上做一个小切口。将立体定位坐标设为 z 等于 0，推动针栓以确认细胞悬液流动通畅，然后再将针头插入脑组织。将针头插入脑组织至深度 z 等于 -1.4 毫米，以将移植物置于深部皮层的灰质/白质交界处。

启动注射泵，在15分钟内输注细胞悬液。使用长工作距离显微镜监测细胞悬液的流出情况，并在注射过程中用无菌生理盐水冲洗手术部位，以维持组织的水合状态。当所有细胞输送完毕后，缓慢撤出移植针头，再用额外的生理盐水冲洗手术部位，然后使用新的缝线关闭切口。

然后按照演示进行术后护理。